名詞講解操控子：是原核生物基因的一個基本轉(zhuǎn)錄單位，由編碼序列及上游的調(diào)控序列組成。編碼序列平時包含幾個功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因，調(diào)控序列有啟動序列（啟動子）、操控序列（操控基因）及其余調(diào)治序列組成。順式作用元件：是真核基因變大調(diào)控轉(zhuǎn)錄過程的特別DNA序列，于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合而起作用，平時包含啟動子、增強(qiáng)子、默然子等。反式作用元件：與其余基因的順式作用元件結(jié)合，調(diào)治基因轉(zhuǎn)錄活性的蛋白質(zhì)因子，依據(jù)功能不同樣分為基因轉(zhuǎn)錄因子和特異性轉(zhuǎn)錄因子。啟動子：位于結(jié)構(gòu)基因上游、與RNA聚合酶鑒別、結(jié)合的特異DNA序列，與基因轉(zhuǎn)錄起始相關(guān)。同源重組：是指發(fā)生在同源序列見得重組，它經(jīng)過鏈的斷裂和再連接，在兩個DNA分子同源序列間進(jìn)行單鏈或雙鏈的交換。又稱基因重組。DNA克?。褐冈隗w外對DNA分子依據(jù)既定目的和方案進(jìn)行人工重組，將重組分子導(dǎo)入適合細(xì)胞內(nèi)，使其在細(xì)胞擴(kuò)增和生殖，進(jìn)而獲取該DNA分子大批拷貝的過程稱為分子克隆，又叫基因克隆或重組DNA技術(shù)。基因工程：在體外將目的基因和載體DNA依據(jù)既定的目的基因進(jìn)行人工重組，并將重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞，經(jīng)過無性生殖和表達(dá)獲取所需核酸、蛋白質(zhì)、生物新品種。包含轉(zhuǎn)基因動物、植物、基因工程生產(chǎn)藥物、基因診斷和基因治療等。限制性核酸內(nèi)切酶：指一類能鑒別和切割雙鏈DNA分子內(nèi)特定的堿基序次的核酸水解酶，絕大多數(shù)是從原核細(xì)胞中提取的，可分為三類，此中Ⅱ型是分子克隆中最常用的工具酶。pBR322：是研究最早、最清楚的質(zhì)粒，其所有序次為4363bp，含有一個復(fù)制原點(diǎn)、一個Ampr和Tetr標(biāo)志，有限制酶酶切位點(diǎn)，可供外源性基因插入，利用這種遺傳標(biāo)志，有益于精選出重組轉(zhuǎn)變菌。gDNA文庫：即基因組DNA文庫，是指存在于轉(zhuǎn)變菌內(nèi)、由克隆載體所攜帶的所有基因組DNA的會集。它涵蓋了基因組所有基因信息。cDNA文庫：是細(xì)胞總mRNA的克隆，文庫只包含表達(dá)蛋白質(zhì)或多肽的基因。感覺態(tài)細(xì)胞：用適合的理化方法辦理受體菌后，使宿主細(xì)胞處于最適攝入和容忍重組體的狀態(tài)，此時的宿主細(xì)胞即稱為感覺態(tài)細(xì)胞?；蛟\斷：又稱DNA診斷，是利用分子生物學(xué)即分子遺傳學(xué)的技術(shù)和原理，在DNA水平解析、判斷遺傳性疾病所涉及的基因異常?；蛑委煟合蛴泄δ苋秉c(diǎn)的細(xì)胞導(dǎo)入擁有相應(yīng)功能的外源基因，以糾正活補(bǔ)償其基因缺點(diǎn)，進(jìn)而達(dá)到治療的目的，包含體細(xì)胞基因治療和性細(xì)胞基因治療。目的基因：要分別和克隆的相應(yīng)基因常稱為目的基因，因目的基因片段需要插入載體，導(dǎo)入而宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制或表達(dá)，因此對宿主細(xì)胞DNA言，又稱它為外源性基因或外源性DNA。質(zhì)粒：是獨(dú)立于細(xì)菌染色體以外，能自主復(fù)制的共價閉合環(huán)狀雙鏈DNA。細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)：細(xì)胞針對外源信息所發(fā)生的細(xì)胞內(nèi)生物學(xué)變化及效應(yīng)的全過程。受體：（receptor）是細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)能鑒別外源化學(xué)信號并與之結(jié)合的成分，其化學(xué)實(shí)質(zhì)是蛋白質(zhì)，個別糖脂。鳥苷酸結(jié)合蛋白（G蛋白）：亦稱GTP結(jié)合蛋白，是一類信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，此類蛋白因?yàn)槠渖砘钚杂匈囉谌姿狲B苷（GTP）的結(jié)合以及擁有GTP水解酶的活性而得名，在各種細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路子中轉(zhuǎn)導(dǎo)信號給不同樣的效應(yīng)蛋白。核酸分子雜交：指用已知的DNA或RNA來檢測樣品中未知核苷酸序次的分子生物學(xué)技術(shù)，若兩者結(jié)合后，經(jīng)顯影或顯色可知結(jié)合的地址和大小，這一過程稱為核酸分子雜交。印跡技術(shù)：將凝膠中分其他生物大分子轉(zhuǎn)移（印跡）或直接放在固定化介質(zhì)上并加以檢測分析的技術(shù)。核酸探針：指用來檢測某一特定核苷酸序次或基因序次的有同位素或非同位素標(biāo)志的已知DNA或NA片段。Southern印跡：由E.Southern創(chuàng)立，利用毛細(xì)作用將凝膠中的DNA片段轉(zhuǎn)移到載體膜上（NC膜），并將DNA固定于膜上的過程稱為Southern印跡。PCR及RT—PCR：PCR即聚合酶鏈反應(yīng)，是體外DNA的合成、擴(kuò)增和放大技術(shù)。經(jīng)變性、退火、延伸的若干循環(huán)，極微量的目的基因被特異擴(kuò)增和放大，RT-PCR即逆轉(zhuǎn)錄PCR，又稱RNA-PCR，是以mRNA為模板，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄和體外擴(kuò)增放大獲取大批cDNA的一種PCR技術(shù)。基因組文庫（gDNAlibrary）：包含某一個生物的所有基因組DNA序列的克隆集體，以DNA片段的形式儲藏著某一世物的所有基因組DNA信息。cDNA文庫：包含某一組織細(xì)胞在必然條件下所表達(dá)的所有mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄而合成的cDNA序列的克隆集體，它以cDNA片段的形式儲藏著該組織細(xì)胞的基因表達(dá)信息?；蛐酒褐冈诠滔嘀С治锷显缓铣晒押塑账嵋苍S直接將大批DNA探針以顯微打印方式有序的固化于支持物表面，爾后與標(biāo)志的樣品雜交，經(jīng)過對雜交信號的檢測解析，即可得出樣品遺傳信息。蛋白質(zhì)芯片：將高密度集擺列的蛋白質(zhì)分子作為探針點(diǎn)陣固定在固相支持物上，當(dāng)與待測樣品反應(yīng)時，可捕捉樣品中靶蛋白，再經(jīng)檢測系統(tǒng)對靶蛋白進(jìn)行定性和定量解析的一種技術(shù)。寫出以下代號的中文名稱：PCR-RFLP:PCR結(jié)合限制性片段長度多態(tài)性解析（將正常和致病基因的PCR產(chǎn)物經(jīng)同一限制內(nèi)切酶消化，可得長度不等的限制性片段，據(jù)此判斷致病基因有無的解析方法。）PCR-ASO:PCR產(chǎn)物與等位基因特異寡核苷酸探針的雜交解析PCR-SSCP:PCR產(chǎn)物的單鏈構(gòu)象多態(tài)性解析DGGE:變性梯度凝膠電泳DMD:杜氏營養(yǎng)不良癥SRY基因：Y染色體性別決定基因CT-PCR：模板競爭PCRRAPD：隨即擴(kuò)增的多態(tài)性DNADDRT-PCR：RNA差別顯示逆轉(zhuǎn)錄PCR轉(zhuǎn)基因技術(shù)：采納基因轉(zhuǎn)移技術(shù)使目的基因整合入受精卵細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞，爾后將細(xì)胞導(dǎo)入動物子宮，使之發(fā)育成個體。核酸轉(zhuǎn)移技術(shù):核轉(zhuǎn)移技術(shù)是將動物的一個體細(xì)胞核導(dǎo)入另一個體得去除了胞核的卵細(xì)胞內(nèi)，將該卵細(xì)胞導(dǎo)入動物子宮，使之發(fā)育成個體?；蛱蕹夹g(shù):有目的地去處動物體內(nèi)某種基因的技術(shù)或基因靶向滅活，其基根源理是成立在同源重組的基礎(chǔ)上。功能克隆和定位克?。汗δ芸寺∈侵笇σ环N致病基因功能的認(rèn)識出發(fā)克隆該致病基因。定位克隆是指從一種致病基因的染色體定位出發(fā)漸漸減小范圍，最后克隆該基因?；蛟\斷：經(jīng)過直接檢測基因的結(jié)構(gòu)及其表達(dá)水平可否正常，進(jìn)而對疾病做出診斷的方法，平時用于遺傳病、病原體、腫瘤等基本，基因補(bǔ)充：將目的基因?qū)氩∽兗?xì)胞或其余細(xì)胞，經(jīng)過目的基因的非定點(diǎn)整合，使其表達(dá)產(chǎn)物補(bǔ)償缺點(diǎn)基因的功能或使原有的功能得以增強(qiáng)?；蛞呙纾褐窪NA疫苗將編碼外源性抗原的基因插入到真核表達(dá)質(zhì)粒中，直接導(dǎo)入人體內(nèi)，使抗原基因在一準(zhǔn)時間內(nèi)連續(xù)表達(dá)，不停刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，達(dá)到防病或治病目的。自殺基因：指宿主細(xì)胞獲取的外源基因，表達(dá)某種酶能將對宿主細(xì)胞無毒或低毒的藥物前體轉(zhuǎn)變成細(xì)胞毒性物質(zhì)，致使宿主細(xì)胞死亡。該基因稱為自殺基因，可用于腫瘤的基因治療。寫出以下代號的中文名稱：RFLP：限制性片段長度多態(tài)性VNTR：可變串通重復(fù)多態(tài)性SSCP：單鏈構(gòu)象多態(tài)性PCR-ASO：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-等位基因特異性寡核苷酸問答題試述乳糖操控子的調(diào)控體系。（1）乳糖操控子的機(jī)構(gòu)中含有Z、Y、A三個結(jié)構(gòu)基因，分別編碼利用乳糖乳糖的β-半乳糖苷酶、通透酶、乙?；D(zhuǎn)移酶。其他還有一個操作序列O、一個啟動序列P及上游的分解代謝物基因激活蛋白（CAP）結(jié)合位點(diǎn)，組成乳糖操控子的調(diào)控區(qū)。在操控子的上游還有一個調(diào)治基因I,編碼一種隔斷蛋白，后者可與O序列結(jié)合而使操縱子處于關(guān)閉狀態(tài)。（2）乳糖操控子的負(fù)調(diào)控：當(dāng)細(xì)菌以葡萄糖為能源時，i基因編碼一種隔斷蛋白，與O序列結(jié)合，阻攔RNA聚合酶與P序列結(jié)合和向結(jié)構(gòu)基因搬動，而控制結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。3）乳糖操控子的正調(diào)控：當(dāng)細(xì)菌只好以乳糖為能源時，乳糖轉(zhuǎn)變成半乳糖，后者與阻遏蛋白結(jié)合，使其構(gòu)象變化而不能夠聯(lián)合O序列，進(jìn)而引誘轉(zhuǎn)錄過程。同時，細(xì)胞內(nèi)cAMP

的含量高升，

cAMP

與

CAP

結(jié)合，使

CAP

結(jié)合到

CAP

結(jié)合位點(diǎn)上，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄過程。何謂限制性核酸內(nèi)切酶？Ⅱ型限制酶的作用特色是什么？指一類能鑒別和切割雙鏈DNA分子內(nèi)特定的堿基序次的核酸水解酶，絕大多數(shù)是從原核細(xì)胞中提取的，可可分為Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ型，此中Ⅱ型是分子克隆中最常用的工具酶。Ⅱ型限制酶的作用特色：（1）之內(nèi)切方式切斷雙鏈

DNA

的磷酸二酯鍵；

（2）能鑒別切割

4~8bp

回文結(jié)構(gòu)；（3）切割可有兩類切口，產(chǎn)生三種尾端。何謂載體？分子克隆中優(yōu)異的載體應(yīng)具備哪些條件？能夠攜帶外源

DNA

（目的基因）進(jìn)入受體細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)外源

DNA

的無性生殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采納的一些

DNA

分子。優(yōu)異載體應(yīng)具備的條件：

a、一定有自己的復(fù)制子，能在宿主細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立自主復(fù)制并能攜帶重組

DNA

片段一同擴(kuò)增。

b、一定有限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)（即多克隆位點(diǎn)）以供外源

DNA

插入。

c、擁有可供選擇的遺傳標(biāo)志（如抗藥基因、酶基因、營養(yǎng)缺點(diǎn)型以及形成吞噬瘢的能力等），以供陽性重組體的精選。d、分子量應(yīng)盡量小，以便容納較大的外源DNA片段，擁有拷貝數(shù)高，與宿主細(xì)胞核酸易分裂，抗剪切力強(qiáng)等特色。e、表達(dá)型載體還應(yīng)裝備與宿主細(xì)胞相適應(yīng)的啟動子、前導(dǎo)序次、增強(qiáng)子等調(diào)控元件。簡述DNA克隆的基本步驟。1）目的基因的獲取2）基因載體的選擇與成立3）目的基因與載體的體外拼接4）重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞5）精選并沒有性生殖含有重組分子的受體細(xì)胞（轉(zhuǎn)變子）常用的工具酶有哪些？其主要用途是什么？（1）限制性核酸內(nèi)切酶（一定）：鑒別并特異切割DNA堿基序列，（2）DNApolⅠ：催化缺口平移，制備高比度DNA探針（3）Klenow片段（掌握）：合成cDNA的第二條鏈，補(bǔ)齊或標(biāo)志雙鏈DNA3′端4）多核苷酸激酶：催化多聚核苷酸5′-羥基尾端磷酸化，或標(biāo)志探針5）逆轉(zhuǎn)錄酶：催化合成cDNA6）尾端轉(zhuǎn)移酶：將3′-羥基尾端進(jìn)行同質(zhì)多聚物加尾7）DNA連接酶（一定）：催化2條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵8）堿性磷酸酶：切除常用的基因獲取方法有哪些？制備基因組文庫建cDNA文庫PCR擴(kuò)增目的基因人工合成DNA技術(shù)常用的基因與載體連接方法有哪些？（1）粘性尾端連接:將靶基因片段和載體DNA經(jīng)同樣限制酶分別切割，使它們兩端產(chǎn)生同樣的黏性尾端。爾后經(jīng)黏性尾端堿基配對，再經(jīng)DNA連接酶作用，共價連接成新的重組DNA分子，（2）平頭尾端連接：將平尾端的DNA分子在T4DNA連接酶催化下，使DNA分子在3′OH和5′P進(jìn)行共價結(jié)合（3）人工接頭法：是指利用人工接頭加在平端DNA片段的兩端，爾后用相應(yīng)限制酶切割人工接頭以產(chǎn)生黏性尾端，再與帶同樣黏性尾端的載體相連，（4）同源多聚尾聯(lián)接法：在尾端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶催化下，在線形載體分子的兩端加上單一核苷酸加dG組成的多聚尾，而在目的DNA分子的兩端加上dC尾，兩者混雜退火，爾后經(jīng)DNA聚合酶Ⅰ或Klenow填充裂口處缺失的核苷酸，再經(jīng)過DNA連接酶修復(fù)成環(huán)狀的雙鏈DNA什么是藍(lán)白斑精選法？這種方法是依據(jù)組織化學(xué)的原理來精選重組體。主若是在載體的非必需區(qū)插入一個帶有大腸桿菌-半乳糖苷酶的基因片度，攜帶有l(wèi)ac基因片段的載體轉(zhuǎn)入lac的宿主菌后，在含有5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷X-gal）平板上形成淺藍(lán)色的噬菌斑，外源基因插入lac后，重組的能（的噬菌體將喪失分解X-gal力，轉(zhuǎn)入lac宿主菌后，在含有5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷（X-gal）平板上形成白色的噬菌斑，非重組的噬菌體則成為藍(lán)色噬菌斑。簡述細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的基本路線。細(xì)胞外信號→受體→細(xì)胞內(nèi)多種分子的濃度、活性、地址變化→細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)簡述細(xì)胞在轉(zhuǎn)導(dǎo)信號過程中所采納的基本方式。①改變細(xì)胞內(nèi)各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的構(gòu)象②改變信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的細(xì)胞內(nèi)定為③促進(jìn)各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子復(fù)合物的形成④改變小分子信使的細(xì)胞內(nèi)濃度或散布闡述：G蛋白歐聯(lián)受體怎樣經(jīng)過發(fā)揮信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用，舉例說明。重點(diǎn)：G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）得名于這種受體的細(xì)胞內(nèi)部分總是與異源三聚體G蛋白結(jié)合，受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的第一步反應(yīng)都是活化G蛋白。GPCR是七跨膜受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路子的基本模式：配體+受體→G蛋白→效應(yīng)分子→第二信使→靶分子→生物學(xué)效應(yīng)例子：胰高血糖素受體經(jīng)過AC-ｃＡＭＰ－ＰＫＡ通路轉(zhuǎn)導(dǎo)信號核酸分子雜交的基根源理、操作重點(diǎn)和常有種類?；蠢恚菏抢茫模危磷冃院蛷?fù)性這一基天性質(zhì)來進(jìn)行DNA和RNA定性或定量的解析技術(shù)。雙鏈DNA在變性因子作用下，氫鍵斷裂成為單鏈，而當(dāng)除去變性因子，則兩條相互分開的單鏈重新結(jié)合并形成雙鏈。基本操作：核酸制備→核酸分子電泳→轉(zhuǎn)印至固相載體或核酸分子直接固定在固相載體→雜交→檢測（放射自顯影和化學(xué)檢測）核酸分子雜交常有種類：Southernblot、Northernblot、斑點(diǎn)雜交、原位雜交、DNA芯片技術(shù)試述PCR系統(tǒng)的原理、過程及應(yīng)用?；蠢恚海?/p>

1）體細(xì)胞分裂中

DNA

的半保留復(fù)制機(jī)理（

2）體外

DNA

分子的熱變性和退火（3）

dNTP

存在時，耐高溫的

TaqDNA

聚合酶使引物沿單鏈模板延伸為

dsDNA故經(jīng)過高溫變性、低溫退火、適溫延伸的若干循環(huán)，目的

DNA

被擴(kuò)增、放大過程：（

1）DNA

模板的高溫變性：在

95℃時，

dsDNA

→

ssDNA

（2）

ssDNA

與引物適溫退火形成模板—引物復(fù)合體（

3）延伸：

DNA

聚合酶

72℃催化以

dNTP

為底物的目的

DNA

合成，經(jīng)過

25—

30

次循環(huán)，目的基因被擴(kuò)大至可供檢測或應(yīng)用的量應(yīng)用：

a、目的基因克隆

b基因的體外突變

c、

DNA

或

RNA

的微量解析

d、DNA

的序列測定e、基因突變解析說明PCR系統(tǒng)的組成及其在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)