熱原試驗(yàn)演示文稿第1頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六

試驗(yàn)?zāi)康膶⒁欢▌┝康墓┰囈?醫(yī)療產(chǎn)品的萃取液)，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品是否具有潛在的致熱作用。依據(jù)方法：GB/T14233.2-2005醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法；中國(guó)藥典2010；ISO10993-12:2005{GB/T16886.12-2005}.第2頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六熱原試驗(yàn)的應(yīng)用熱原試驗(yàn)應(yīng)用于藥物及醫(yī)療產(chǎn)品的檢測(cè)（注射器、輸液器、輸血器、引流管、手術(shù)器械等等）第3頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六熱原概念熱原：引入或釋放到機(jī)體內(nèi)后能引起恒溫動(dòng)物體溫異常升高的物質(zhì)。它包括細(xì)菌性熱原、內(nèi)源性高分子熱原、內(nèi)源性低分子熱原及化學(xué)熱原等。細(xì)菌性熱原，是某些細(xì)菌的代謝產(chǎn)物、細(xì)菌尸體及內(nèi)毒素。致熱能力最強(qiáng)的是革蘭氏陰性桿菌的產(chǎn)物，其次是革蘭陽(yáng)性桿菌類(lèi)，革蘭陽(yáng)性球菌則較弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能產(chǎn)生熱原。第4頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六熱原引起機(jī)體發(fā)熱機(jī)理

外源性致熱原多為大分子物質(zhì)，特別是細(xì)菌內(nèi)毒素分子量非常大，不能通過(guò)血腦屏障直接作用于體溫調(diào)節(jié)中樞，而是通過(guò)激活血液中的中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和單核一吞噬細(xì)胞系統(tǒng)，使其產(chǎn)生并釋放內(nèi)源性致熱原，通過(guò)下述機(jī)制引起發(fā)熱。第5頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六熱原引起機(jī)體發(fā)熱機(jī)理熱原—白細(xì)胞(WBC)—吞噬—白細(xì)胞崩解，釋放內(nèi)源性致熱源原—作用于體溫調(diào)節(jié)中樞—產(chǎn)熱增加、散熱減少—體溫上升第6頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六

實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料超凈工作臺(tái)、電熱干燥箱、水浴鍋、天平、電子稱、肛門(mén)體溫計(jì)（儀器設(shè)備需經(jīng)國(guó)家相關(guān)部門(mén)檢定）、注射器、三角燒瓶、棉球、家兔固定架、時(shí)鐘等等。所用試劑：醫(yī)用生理鹽水、75%乙醇、凡士林。第7頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六

供試液的制備依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)：ISO10993：12（GB/T16886.12）按0.2g:1ml（樣品:生理鹽水）的比例進(jìn)行萃取，條件為37±1℃，時(shí)間為72±1小時(shí)。萃取液應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用完畢。第8頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六試驗(yàn)家兔飼養(yǎng)環(huán)境1在做熱原檢查前1~2日，供試用家兔應(yīng)處于同一溫度環(huán)境中；2實(shí)驗(yàn)室和飼養(yǎng)室的溫度相差不得大于3℃，實(shí)驗(yàn)室的溫度應(yīng)控制在17~25℃；3在試驗(yàn)全部過(guò)程中，應(yīng)注意室溫的溫度變化不得大于3℃，防止動(dòng)物騷動(dòng)并避免噪聲干擾。第9頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六

試驗(yàn)家兔的選擇1.未曾用于熱原檢查的家兔；

2.或供試品判定為符合規(guī)定，但組內(nèi)升溫達(dá)0.6℃的家兔；

3.或3周內(nèi)未使用的家兔，均應(yīng)在檢查供試品前3~7日內(nèi)預(yù)測(cè)體溫，進(jìn)行挑選。挑選試驗(yàn)用家兔的條件與檢查供試品時(shí)相同，僅不注射藥液，每隔30分鐘測(cè)量體溫1次，共測(cè)8次，8次體溫均在38.0~39.6℃的范圍內(nèi)，且最高與最低相差不超過(guò)0.4℃的家兔，方可供熱原檢查用。

第10頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六

試驗(yàn)家兔的選擇㈠家兔應(yīng)健康，雌雄不限，體重1.7kg以上，雌兔應(yīng)無(wú)孕。預(yù)測(cè)體溫前7日即應(yīng)用同一飼料飼養(yǎng)，在此期間內(nèi)，體重應(yīng)不減輕，精神、食欲、排泄等不得有異?，F(xiàn)象(科學(xué)飼養(yǎng))。第11頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六㈡

用于熱原試驗(yàn)后的家兔，如供試品判定為符合規(guī)定，至少應(yīng)休息48小時(shí)方可再本試驗(yàn)用，其中體溫升高0.6℃以上的家兔，至少休息兩周后以上。如供試品判定為不符合規(guī)定，則組內(nèi)全部家兔不再使用。每一家兔的使用次數(shù)，用于一般藥品的檢查，不應(yīng)超過(guò)10次。

試驗(yàn)家兔的選擇第12頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六

（一）家兔在試驗(yàn)前至少1小時(shí)開(kāi)始停止給食并置于適宜的裝置中，直到試驗(yàn)完畢。應(yīng)使用精密度為±0.1℃的測(cè)溫裝置測(cè)量家兔體溫。測(cè)溫探頭或肛溫計(jì)插入肛門(mén)的深度和時(shí)間各兔應(yīng)相同，深度一般約6cm，時(shí)間不少于1.5分鐘，每隔30分鐘測(cè)量體溫1次，一般測(cè)量2次，兩次體溫之差不得超過(guò)0.2℃.試驗(yàn)前家兔的準(zhǔn)備第13頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六

試驗(yàn)前家兔的準(zhǔn)備（二）

以此兩次體溫的平均值作為該兔的正常體溫。當(dāng)日使用的家兔，正常體溫應(yīng)在38.0~39.6℃的范圍內(nèi)，且各兔間的正常體溫之差不得超過(guò)1℃.第14頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六

試驗(yàn)前器械的準(zhǔn)備注射器（帶針頭）及一切與供試品溶液接觸的器皿應(yīng)是無(wú)菌、無(wú)熱原，如試管等應(yīng)采用干熱滅菌法置烘箱中用250℃加熱至少30分鐘，也可用其他適宜的方法除去熱原。第15頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六試驗(yàn)方法

取適用的家兔3只，測(cè)定其正常體溫后15分鐘以內(nèi)，自耳靜脈緩緩注入規(guī)定劑量(10ml/kg)并溫?zé)嶂良s38℃的供試品溶液，然后每隔30分鐘按前法測(cè)量其體溫1次，共測(cè)6次，以6次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高溫度。

第16頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六

試驗(yàn)方法如3只家兔中有1只體溫升高了0.6℃或0.6℃以上，或3只家兔體溫升高均低于0.6℃，但體溫升高的總和達(dá)1.3℃或1.3℃以上，應(yīng)另取5只家兔復(fù)試，檢查方法同上。第17頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六

結(jié)果判斷㈠在初試的3只家兔中，體溫升高均低于0.6℃，并且3只家兔體溫升高總和低于1.3℃；或在復(fù)試的5只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔不超過(guò)1只，并且初試、復(fù)試合并8只家兔的體溫升高總和為3.5℃或3.5℃以下，均判為供試品的熱原檢查符合規(guī)定。第18頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六

結(jié)果判斷

㈡在初試的3只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超過(guò)1只；或在復(fù)試的5只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超過(guò)1只；或在初試、復(fù)試合并8只家兔的體溫升高總和超過(guò)3.5℃，均判為供試品的熱原檢查不符合規(guī)定當(dāng)家兔體溫升高為負(fù)值時(shí)，均以0℃計(jì)。第19頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六展望檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性取決于試驗(yàn)動(dòng)物的狀況、試驗(yàn)室條件和操作的規(guī)范性。家兔法檢測(cè)內(nèi)毒素的靈敏度為0.001μg/ml,試驗(yàn)結(jié)果接近人體真實(shí)情況，但操作繁瑣費(fèi)時(shí)，不能用于注射劑生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量監(jiān)控，且不適用于放射性藥物、腫瘤抑制劑等細(xì)胞毒性藥物制劑。

第20頁(yè)，共22頁(yè)，2023年，2月20日，星期六注意事項(xiàng)

（1）試驗(yàn)室內(nèi)保持安靜，避免強(qiáng)烈直射陽(yáng)光、燈光等刺激。（2）試驗(yàn)過(guò)程中避免家兔騷動(dòng)，保持體溫穩(wěn)定。

（3）試驗(yàn)室、飼養(yǎng)室溫度及其變化應(yīng)符合要求。

（4）試驗(yàn)過(guò)程中不得隨意更換肛門(mén)體溫計(jì)。

第21頁(yè)，共