標(biāo)準(zhǔn)解讀

《NY/T 547-2002 兔粘液瘤病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)方法》是一項(xiàng)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，主要用于指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室通過瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散技術(shù)來檢測兔粘液瘤病毒抗體或抗原。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了實(shí)驗(yàn)所需材料、試劑制備方法、操作步驟及結(jié)果判斷等關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

在準(zhǔn)備階段，首先需要準(zhǔn)備好所有必要的材料和試劑，包括但不限于特異性抗血清（針對兔粘液瘤病毒）、待測樣品（如疑似感染動物的血清或其他體液樣本）、以及用于制作瓊脂板的基礎(chǔ)成分——瓊脂糖。此外，還需確保實(shí)驗(yàn)室環(huán)境符合生物安全要求，并采取適當(dāng)措施防止交叉污染。

接下來是瓊脂凝膠板的制備過程。將適量的瓊脂糖溶解于蒸餾水中加熱至完全溶解后冷卻至約60°C左右，然后倒入預(yù)先清潔并干燥好的玻璃培養(yǎng)皿內(nèi)形成均勻薄層，待其自然冷卻固化即可得到所需的瓊脂凝膠板。

隨后，在已固化的瓊脂凝膠板上按照預(yù)定模式打孔，通常采用圓形排列方式。將特異性抗血清加入中心孔中，而待測樣品則分別加至周圍的小孔里。放置好所有液體后，需輕輕敲擊培養(yǎng)皿底部使溶液充分滲入凝膠孔洞內(nèi)部。

完成上述步驟后，將整個裝置置于濕潤環(huán)境中（例如濕度箱）保持恒定溫度（一般為37℃），讓其靜置足夠時間（至少24小時）。期間，若存在相應(yīng)抗體與抗原，則會在兩者之間形成沉淀線，這是由于免疫復(fù)合物形成的緣故。

最后一步是對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行觀察分析。根據(jù)沉淀線出現(xiàn)的位置、數(shù)量及其清晰度等因素綜合判斷待測樣品是否含有兔粘液瘤病毒相關(guān)的抗體或抗原。需要注意的是，正確解讀沉淀線形態(tài)對于獲得準(zhǔn)確結(jié)論至關(guān)重要，因此建議由經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員執(zhí)行此任務(wù)。


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  • 2002-08-27 頒布
  • 2002-12-01 實(shí)施
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NY/T 547-2002兔粘液瘤病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)方法_第1頁
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ICS.11.220NYB41中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T547-2002免粘液瘤病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)方法Agargelimmunodiffusionforrabbitmyxoma2002-08-27發(fā)布2002-12-01實(shí)施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T547-2002前免粘液瘤是免的病毒性致死性傳染病，世界動物衛(wèi)生組織World（rganizationforAnimalHealth（英）,OfficeintentionaldesEpizootic(法),OIE和我國分別將之列為B類或二類動物疫病。本標(biāo)準(zhǔn)是依據(jù)OIE《診斷試驗(yàn)和疫苗標(biāo)準(zhǔn)手冊》（2000版）（"ManualofStandardsforDiagnostieTestsandVaccines”,2000）第2.2.1章制定的。本標(biāo)準(zhǔn)與該章的差異是-本標(biāo)準(zhǔn)只采用了該章規(guī)定的最實(shí)用的抗體抗原兼測的瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)(液體法)技術(shù)·此項(xiàng)技術(shù)已可滿尼我國對內(nèi)和對外診斷及檢疫的需要；-本標(biāo)準(zhǔn)基于該章的原則性規(guī)定，根據(jù)我國的研究與實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)規(guī)定了具體的操作程序本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部動物檢疫所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：杜元釗、朱萬光、劉佩蘭、吳延功。

NY/T547-2002免粘液瘤病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)方法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了免粘液瘤病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)的技術(shù)要求本標(biāo)準(zhǔn)適用于免粘液瘤病毒特異抗體和可溶性抗原的檢測.也可用于兔粘液瘤病的流行病學(xué)調(diào)查，拉驗(yàn)方法2.1材料2.1.1器材與試劑：a）孔器：內(nèi)徑6mmib）家脂樓：三羥甲基氮基甲燒（Tris）10%故酸;乙二胺四乙酸(EDTA)。2.1.2瓊脂擴(kuò)散抗原，按說明書使用2.1.3標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，按說明書使用。2.1.4被檢血消：按常規(guī)方法采血分離血清,4℃保存10d內(nèi)檢測有效；一20℃凍結(jié)保存，一年有效。2.1.5瓊脂糖平板制備方法見附錄A。2.2操作方法2.2.1在瓊脂糖平血上,按坐標(biāo)紙上畫好的梅花型(見圖1)打孔，其孔徑為6mm.孔距為4mm;孔內(nèi)瓊脂糖用針頭小心挑出，勿破壞周圍瓊脂。打孔后用酒精燈加熱封底。圖1梅花型打孔示意圖2.2.2加樣:滴加抗原和血清于梅花型孔中，中央孔(7孔）加抗原（Ag)，1、3.5孔加標(biāo)準(zhǔn)陽性血清,2、4、6孔加被檢血清，每孔均以加滿不溢出為度。2.2.3反應(yīng)：加樣完畢后.靜置10min.然后放入帶蓋的濕盒中置37C反應(yīng),24h觀察結(jié)果，48h判定結(jié)果。陰性或可疑的結(jié)果于72h再判定一次。2.3結(jié)果判定2.3.1判定標(biāo)準(zhǔn)檢測血清中可溶性抗原或抗體出現(xiàn)的沉淀線：a）加被檢血清中含有可溶性抗原，則被檢血消與陽性血清之間形成沉淀線，并與陽性血清和抗原形成的沉淀線

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