標準解讀
《GB/T 5522-1985 糧食、油料檢驗 過氧化氫酶活動度測定法》是一項國家標準,專門用于測定糧食和油料中過氧化氫酶的活性。該標準詳細規(guī)定了從樣品準備到最終結果計算的一系列步驟,以確保檢測過程的準確性和可重復性。
首先,在樣品制備方面,需要將待測樣品研磨成細粉,并通過一定目數(shù)的篩子篩選,保證顆粒大小均勻,便于后續(xù)實驗操作。對于不同的糧食或油料種類,可能還需要采取特定的預處理措施來提高酶活性測定的準確性。
接下來是提取液制備階段,根據(jù)標準要求,使用適量的緩沖溶液與樣品混合,經(jīng)過充分攪拌后離心分離得到上清液作為過氧化氫酶的提取物。這里所使用的緩沖溶液類型及其pH值等參數(shù)均需嚴格按照標準給出的具體條件執(zhí)行。
然后進入關鍵的酶活測定環(huán)節(jié),采用分光光度計測量在特定波長下反應體系吸光度的變化情況。通過向含有底物(如過氧化氫)的溶液中加入一定量的酶提取液,并記錄一段時間內(nèi)吸光度隨時間變化的數(shù)據(jù),可以間接反映出過氧化氫酶催化分解過氧化氫的速度快慢,進而計算出其相對活性單位。
最后,依據(jù)實驗數(shù)據(jù)及標準提供的公式進行計算,得出每克干物質(zhì)中含有多少單位的過氧化氫酶活性。需要注意的是,在整個實驗過程中都必須嚴格遵守實驗室安全規(guī)范以及正確操作儀器設備,同時做好詳細的實驗記錄,以便于后期分析比較不同批次之間的差異性。
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文檔簡介
UDC(633.1+633.85).001.4X10中華人民共和國國家標準GB5522—85糧食、油料檢驗過氧化氫酶活動度測定法InspectionofgrainandoilseedsMethodsfordeterminationofhydrogenperoxidaseactivity1985-11-02發(fā)布1986-07-01實施家標唯局國批準
中華人民共和國國家標準糧食、油料檢驗過氧化氫酶活動度測定法GB5522-85中國標準出版社出版發(fā)行北京西城區(qū)復興門外三里河北街16號郵政編碼:100045電話:63787337、637874471986年5月第一版2006年3月電子版制作書號:155066·1-23816版權專有侵權必究舉報電話:010)68533533
中華人民共和國國家標準UDC(633.1+633.85.001.4糧食、油料檢驗GB5522-85過氧化氫酶活動度測定法lnspectionofgrainandoilseedsMethodsfordeterminationofhydrogenperoxidaseactivity本標準適用于商品糧食過氧化氫酶活動度的測定儀器和用具1.1恒溫水浴鍋;1.2電爐:1.3離心機或吸濾裝置;1.4推形瓶:100mli1.5量筒:10、15m1g1.6移液管:5、10,20m11.7研缽:1.88滴定管、細口瓶、漏斗等。2試劑2.113%過氧化氫溶液:取30%過氧化氫溶液3ml加水稀釋至30ml2.2:10%硫酸溶液;2.30.1N高錳酸鉀溶液;2.4pH7.7索倫遜磷酸鹽緩沖液:甲甲液,稱取礁酸氫二鈉11.876g溶于11水中。乙液,稱取磷酸二氫鉀9.078g溶于11水中。臨用時,甲、乙液按9:1混合。2.5石英砂或用干凈的玻璃片研制成的細砂。3操作方法3.1過氧化氫酵的提?。悍Q取試樣(能換算成無水試樣1g),放入研缽中,加少量細砂,量取緩沖被50ml,先倒出5~10m1于研體中研磨試樣,然后經(jīng)漏斗倒入館形瓶中,用剝余的緩沖液洗凈研體和漏斗,再把洗液倒入錐形瓶內(nèi),振搖后靜置2~3h,用吸濾法或離心沉淀法獲得透明的提取液。3.2酶活動度的測定:搖勾提取液,吸取20ml注入錐形瓶中,加入20ml水和3ml39過氧化氫溶液,在室溫下放置15~30mia,加入5m110%硫酸溶液,搖勾,用0.1N高錳酸鉀溶液滴定剝余的過氧化氫,記下用去的高錳酸鉀溶液廷升數(shù)(Y,)。3.3對照試驗;吸取20ml提取液注入錐形瓶中,置于沸水浴中加熱5mia,或用直接煮沸法破壞過氧化氫酶。加20ml水和3ml3%過氧化氫溶液于錐形瓶中,在室溫下放置15~30min,再加入10%碗酸5ml
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