標準解讀

《GB/T 38165-2019 人體外周血中循環(huán)游離DNA濃度檢測 基于Alu序列實時熒光PCR法》是一項國家標準，旨在規(guī)范通過Alu序列實時熒光定量PCR技術對人體外周血中的循環(huán)游離DNA（cfDNA）進行濃度測定的方法。該標準適用于臨床實驗室、科研機構等需要對血液樣本中的cfDNA含量進行準確測量的場合。

根據(jù)此標準，首先需準備合適的實驗材料與試劑，包括但不限于：外周血樣本、DNA提取試劑盒、特異性針對人類基因組Alu序列設計的引物和探針以及用于實時熒光PCR擴增的相關耗材。接著，按照規(guī)定步驟從全血樣品中分離出無細胞DNA，并利用特定的Alu引物及探針體系，在熒光定量PCR儀上完成目標片段的擴增過程。通過比較未知樣品與已知濃度標準品之間Ct值的關系，可以計算得到待測樣本中cfDNA的具體含量。

整個檢測流程強調(diào)了操作過程中質量控制的重要性，如設置空白對照、陽性對照及內(nèi)參等措施來確保結果準確性；同時對于數(shù)據(jù)處理也給出了具體指導，比如如何利用標準曲線法求得樣本濃度值等。此外，還詳細描述了可能影響實驗結果的因素分析及其應對策略，幫助實驗人員更好地理解和掌握該方法的應用條件和技術要點。

本標準為我國在循環(huán)游離DNA領域提供了統(tǒng)一的技術規(guī)范，促進了相關研究工作的標準化發(fā)展。


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....

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  • 2019-10-18 頒布
  • 2019-10-18 實施
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文檔簡介

ICS07080

A40.

中華人民共和國國家標準

GB/T38165—2019

人體外周血中循環(huán)游離DNA濃度檢測

基于Alu序列實時熒光PCR法

Detectionofcirculatingcell-freeDNAconcentrationinhumanperipheralblood—

Real-timePCRmethodbasedonAlusequence

2019-10-18發(fā)布2019-10-18實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T38165—2019

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國生化檢測標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC387)。

本標準起草單位成都中醫(yī)藥大學四川省腫瘤醫(yī)院上海市計量測試技術研究院

:、、。

本標準主要起草人何洋肖洪濤宋瑱李燕聞艷麗冷平劉剛李東梅

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T38165—2019

人體外周血中循環(huán)游離DNA濃度檢測

基于Alu序列實時熒光PCR法

1范圍

本標準規(guī)定了人體外周血中循環(huán)游離脫氧核糖核酸基于序列的實時熒光聚合酶鏈式

(DNA)Alu

反應定量檢測方法

(PCR)。

本標準適用于循環(huán)游離樣品中序列的定量檢測

DNAAlu。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

實驗室生物安全通用要求

GB19489

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件

。

31

.

循環(huán)游離DNAcirculatingcell-freeDNAcfDNA

;

血液中來源于細胞凋亡和壞死的細胞外游離狀態(tài)的短片段

DNA。

32

.

實時熒光PCRreal-timePCR

在反應體系中加入熒光基團通過熒光信號的積累實時監(jiān)控整個擴增過程實現(xiàn)對起始

PCR,PCR,

模板的定量及定性分析

。

33

.

Ct值cyclethreshold

每個反應管內(nèi)的熒光信號達到設定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

。

34

.

Alu序列Alusequence

散在分布于靈長類動物基因組中的中度重復序列

。

注序列具有同源性占人類基因組序列的每個元件長度約為

:Alu70%~98%,5%~10%,300bp。

4原理

以提取的外周血循環(huán)游離作為檢測目標樣品以符合要求的人基因組定量標準物質為

DNA,DNA

標準品采用實時熒光技術設計特異性引物分別擴增序列中長度為和的片

,PCR,Alu115bp219bp

段以標準品起始模板濃度的對數(shù)為橫坐標值為縱坐標制作標準曲線根據(jù)標準曲線方程

,DNA,Ct,。

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