ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標準

GB/T36820—2018

甘蔗條紋花葉病毒實時熒光反轉錄聚合酶

鏈式反應RT-PCR檢測方法

()

DetectionmethodofSugarcanestreakmosaicvirusbyreal-timereverse

transcritionolmerasechainreactionRT-PCR

ppy()

2018-09-17發(fā)布2019-04-01實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T36820—2018

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國植物檢疫標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標準起草單位福建農林大學國家甘蔗工程技術研究中心農業(yè)部甘蔗及制品質量監(jiān)督檢驗測試

:、

中心農業(yè)部福建甘蔗生物學與遺傳育種重點實驗室

、。

本標準主要起草人高三基黃美婷傅華英孫生仁張慧麗王錦達陳如凱

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T36820—2018

甘蔗條紋花葉病毒實時熒光反轉錄聚合酶

鏈式反應RT-PCR檢測方法

()

1范圍

本標準規(guī)定了甘蔗條紋花葉病毒Suarcanestreakmosaicvirus實時熒光反轉錄聚合酶鏈式反

(g)

應檢測方法的儀器與設備試劑與材料樣品的采集與前處理檢測以及結果判斷與表述等

(RT-PCR)、、、。

本標準適用于可能帶有甘蔗條紋花葉病毒的活體寄主植物的快速檢測診斷

、。

2縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

外殼蛋白

CP:(coatprotein)

值實時熒光反應中每個反應管內的熒光信號達到設定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

Ct:PCR,(cycle

threshold)

與鏈互補的單鏈

cDNA:RNADNA(complementaryDNA)

Taq酶熱啟動聚合酶

ExHS:DNA(hotstartDNApolymerase)

羧基熒光素

FAM:6-(6-carboxy-fluorescein)

聚合酶鏈式反應

PCR:(polymerasechainreaction)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

反轉錄聚合酶鏈式反應

RT-PCR:(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)

甘蔗條紋花葉病毒Sugarcanestreakmosaicvirus

SCSMV:()

羧基四甲基羅丹明

TAMRA:6-(6-carboxytetramethylrhodamine)

吸頭

Tip:

3方法原理

根據(jù)甘蔗條紋花葉病毒基因序列設計一對僅在該病毒基因間保守的特異性引物和一條特

CPCP

異性的熒光雙標記水解型寡核苷酸探針探針首先利用反轉錄酶將病毒反轉成

(TaqMan)。RNA

再以為模板在同一反應管內連續(xù)進行實時熒光擴增反應水解型寡核苷酸探針

cDNA,cDNAPCR,

探針的熒光信號強度伴隨著目標序列擴增產物的增加呈正比關系通過收集擴

(TaqMan)PCR,PCR

增過程的熒光信號值即可判斷試樣是否帶有目標序列甘蔗條紋花葉病信息參見附錄

,。A。

4儀器與設備

41實時熒光檢測儀激發(fā)檢測波長范圍可用熒光染料和水

.PCR:/350nm~750nm;(SYBRGreenI)

解型寡核苷酸探針探針升降溫速度均一性準確性溫

(TaqMan);≥2.0℃/s;+/-0.5℃;+/-0.3