標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 35904-2018 旋毛蟲實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn)，旨在為旋毛蟲的檢測(cè)提供一種基于實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)的方法。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了從樣品采集到結(jié)果分析的具體步驟和技術(shù)要求，適用于肉類及肉制品中旋毛蟲（Trichinella spiralis）核酸的定性檢測(cè)。

首先，在樣品處理部分，標(biāo)準(zhǔn)明確了不同類型樣本（如肌肉組織）的采集方式、保存條件以及如何進(jìn)行前處理以提取DNA。這一步驟對(duì)于保證后續(xù)實(shí)驗(yàn)的有效性和準(zhǔn)確性至關(guān)重要。

接著，關(guān)于引物和探針的設(shè)計(jì)，文件給出了針對(duì)旋毛蟲特定基因序列的選擇指南，并強(qiáng)調(diào)了其特異性與靈敏度的重要性。正確設(shè)計(jì)并選擇高效的引物對(duì)是實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確擴(kuò)增的前提。

然后，在反應(yīng)體系構(gòu)建方面，《GB/T 35904-2018》提供了詳細(xì)的配方指導(dǎo)，包括各種試劑的比例及其加入順序等信息。同時(shí)，還指出了使用合適儀器設(shè)備的重要性，并列舉了幾種推薦型號(hào)。

此外，標(biāo)準(zhǔn)還介紹了如何設(shè)置循環(huán)參數(shù)來優(yōu)化PCR擴(kuò)增過程，以及通過觀察熒光信號(hào)變化來進(jìn)行數(shù)據(jù)分析的方法。通過對(duì)Ct值的測(cè)定可以判斷樣品中是否存在目標(biāo)DNA片段。

最后，文件強(qiáng)調(diào)了質(zhì)量控制措施的應(yīng)用，比如設(shè)立陽性對(duì)照、陰性對(duì)照及內(nèi)參對(duì)照等，以確保整個(gè)檢測(cè)流程的可靠性和重復(fù)性。同時(shí)，也提到了實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)實(shí)驗(yàn)的重要性，用以驗(yàn)證不同實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的一致性。

該標(biāo)準(zhǔn)為旋毛蟲的快速、準(zhǔn)確檢測(cè)提供了科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支持，有助于提高食品安全水平，保護(hù)消費(fèi)者健康。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2018-02-06 頒布
  • 2018-09-01 實(shí)施
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文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T35904—2018

旋毛蟲實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法

Real-timePCRmethodfordetectionofTrichinellaspiralis

2018-02-06發(fā)布2018-09-01實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T35904—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位東北農(nóng)業(yè)大學(xué)中華人民共和國黑龍江出入境檢驗(yàn)檢疫局

:、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人宋銘忻張子群李雅麗韓彩霞王海燕李巍李曉云路義鑫

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T35904—2018

旋毛蟲實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了旋毛蟲實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)的操作方法

PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于家豬野豬和犬等動(dòng)物的旋毛蟲核酸檢測(cè)

、。

2規(guī)范應(yīng)引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

3儀器

31熒光儀

.PCR。

32高速冷凍離心機(jī)

.。

33生物安全柜

.。

34高壓滅菌鍋

.。

35天平精密度達(dá)以上

.:0.01g。

36組織勻漿機(jī)

.。

37冰箱

.。

38渦旋混合器

.。

39研缽

.。

310無菌離心管

.。

311微量移液器

.。

4試劑

41緩沖液無2+酶2+等所有試劑均為生物試劑公司生產(chǎn)

.10×PCRBuffer(Mg)、rTaq、dNTP、Mg,。

42本方法試驗(yàn)用水符合規(guī)定的一級(jí)水

.GB/T6682。

5對(duì)照樣品

51陽性對(duì)照樣品

.

含有條以上的國際標(biāo)準(zhǔn)種Trichinellaspiralis或Trichinellanativa旋毛蟲的大鼠

5/g(T1)(T2)

肉樣

。

52陰性對(duì)照樣品

.

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