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文檔簡介

實驗九

植物基因組的RAPD分析1、了解常用的分子標記；2、掌握RAPD標記的分析方法。一、實驗目的廣義的分子標記（molecularmarker）：可遺傳的并可檢測的DNA序列或蛋白。包括蛋白質標記和DNA標記（狹義的分子標記）。蛋白質標記包括動植物蛋白、同工酶及等位酶。理想的分子標記：1.高多態(tài)性2.共顯性遺傳3.能明確辨別等位基因4.遍布整個基因組5.無基因多效性6.檢測手段簡單快速7.成本低廉8.重復性好二、實驗原理RPADRAPD

randomamplifiedpolymorphicDNA

1990年，由美國杜邦公司的科學家Williams推出。原理：任意序列的8-10個堿基的寡核苷酸片段隨機引物擴增;引物結合區(qū)域發(fā)生DNA片段插入、缺失或堿基突變導致PCR產(chǎn)物增加、缺少或發(fā)生分子量變化。RAPD實驗流程

DNA提取 PCR擴增 產(chǎn)物檢測 數(shù)據(jù)記錄 0.2kb0.5kb0.3kb0.2kb0.5kb0.3kb×0.2kb0.3kb0.5kb品系1品系2RAPD的特點不需DNA探針簡單快速,多態(tài)性高少量DNA樣品,成本較低優(yōu)點缺點顯性遺傳重復性不太高在共遷移問題三、儀器與材料材料：不同小麥DNA樣品。試劑：MgCl2、引物、10XBuffer、dNTP、Taq酶、瓊脂糖凝膠，EB，溴酚蘭等。器具：移液槍，槍頭，離心管，電泳儀，電泳槽等。四、實驗程序（1）配制RAPD反應體系總體積：25μl物質H2O引物模板10XBuffer（含MgCl2）dNTPTaq酶濃度5μM20ng/μl25mM5U/μl體積(μl)12.81.542.52.00.2（2）RAPD擴增程序預變性：94oC5min變性：94oC30s退火：37oC1min30個循環(huán)延伸：72oC1min最后一個循環(huán)結束后在72oC延伸10min（3）PCR擴增產(chǎn)物用1.2％的瓊脂糖凝膠電泳檢測（溴化乙錠染色）。電泳結果在UV紫外凝膠系統(tǒng)上照相觀測。結果利用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)處理結果。[實驗注意事項]：配制PCR反應體系過程中所用試劑的量一定要準確；所有的配制操作都應該在冰

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