ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T34757—2017

豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測方法

Porcineepidemicdiarrhea—RT-PCRfordetectingvirusacid

2017-11-01發(fā)布2018-05-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T34757—2017

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標準由全國動物衛(wèi)生標準化技術(shù)委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位東北農(nóng)業(yè)大學(xué)中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院河南農(nóng)業(yè)

:、、、

大學(xué)

。

本標準主要起草人李一經(jīng)邵衛(wèi)星魏榮宋建德姜艷平袁麗萍唐麗杰喬薪瑗崔文徐耀輝

:、、、、、、、、、、

吳發(fā)興張志孫映雪魏戰(zhàn)勇李曉成

、、、、。

Ⅰ

GB/T34757—2017

豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測方法

1范圍

本標準規(guī)定了豬流行性腹瀉病毒檢測方法的儀器試劑樣品的采集和處理程

RT-PCR、、、RT-PCR

序電泳及結(jié)果判定的技術(shù)要求

、。

本標準適用于快速檢測豬臨床樣品豬小腸和新鮮糞便或細胞培養(yǎng)物中豬流行性腹瀉病毒核酸

()。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注明日期的引用文件僅注日期的版本適用于本

。,

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

鳥類病毒反轉(zhuǎn)錄酶

AMV:RNA(avianmyeloblastosisvirus)

堿基對

bp:(basepair)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

脫氧核糖核酸

DNA:(deoxyribonucleicacid)

種脫氧核糖核苷三磷酸混合物

dNTPs:4(deoxyribonucleosidetriphosphates)

磷酸鹽緩沖液

PBS:(phosphate-bufferedsalinebuffer)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)

RT-PCR:-(reversetranscriptase-polymerasechainreaction)

酶抑制劑

RRI:RNA(rnaseribonucleaseinhibitor)

Taq酶Taq聚合酶Taq

:DNA(DNApolymerase)

4儀器

41擴增儀

.PCR。

42高速臺式冷凍離心機可控溫至離心速度可達以上

.:4℃、12000r/min。

43組織研磨器或者研缽

.。

44冰箱冰箱和以下超低溫冰箱

.2℃~8℃-70℃。

45核酸電泳儀和水平電泳槽

.。

46微量移液器量程分別和

.0.2μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL100μL~

的移液器并配備與移液器相匹配的吸頭

1000μL,