免疫診斷P241（一）抗原抗體反應的基本原理1.特異性：

2.可逆性：非共價可逆結(jié)合

反應條件：親和力;溫度、PH、離子濃度3.可見性：抗原抗體比例適當?shù)谝还?jié)抗原或抗體的檢測1

2(二)抗原或抗體的檢測方法：1.凝集反應：顆粒性抗原(細菌、紅細胞等)與相應抗體結(jié)合，在有電解質(zhì)存在時，比例適當，形成肉眼可見的凝集團塊。凝集沉淀標記技術(shù)3直接凝集反應（1）直接凝集：

玻片法：定性檢測未知抗原

如ABO血型鑒定、細菌鑒定

試管法：定量檢測未知抗體如肥達氏反應4（2）間接凝集：載體顆粒（RBC、乳膠等）間接凝集：包被已知抗原，如Coombstest反向間接凝集：包被已知抗體已知5間接凝集抑制反應：妊娠乳膠試驗(HCG)標本62.沉淀反應：可溶性抗原（血清蛋白、細胞裂解液等）與相應抗體結(jié)合后，在有電解質(zhì)存在時，比例適當，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物。半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)。7原理:檢測抗原⑴單向免疫擴散：Ab+瓊脂制板打孔AgNSAgAg加樣觀察（含量）8沉淀環(huán)Ag擴散Ab固定于瓊脂單向免疫擴散9（2）雙向免疫擴散：瓊脂AbNS10(3)對流免疫電泳：方法和原理：雙擴＋電泳NSAgAb11（4）免疫電泳原理：電泳后雙擴應用：血清蛋白種類分析123.免疫標記技術(shù)：標記物：熒光素、酶、放射性核素等特點：敏感性高，定性、定位、定量13（1）免疫熒光法：

FITC、PE應用：檢測CD分子；傳染病和自身免疫病診斷。14FITC標記15（2）酶免疫測定：HRP、AP

*酶免疫組化法：

測定組織中或細胞表面抗原

*酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：測定可溶性抗原或抗體16ELISA原理：

將已知抗原或抗體吸附于固相載體（聚苯乙烯微量反應板）表面，使抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌液將游離成分洗去。17方法：*雙抗體夾心法：檢測抗原Ag底物包被標本洗滌酶標抗體18*間接法：檢測抗體洗滌洗滌洗滌標本觀察結(jié)果19*生物素-親和素系統(tǒng)（BAS）ELISA：生物素標記抗體，酶標記親和素*抗原競爭抑制法：標本20（3）放射免疫測定法（RIA）：

131I、125I標記，微量物質(zhì)測定或放射自顯影21（4）免疫印跡WesternBlot覆蓋轉(zhuǎn)印→硝酸纖維素膜（去垢劑）將分子大小不同的蛋白質(zhì)分開412412022稀釋的抗凝血淋巴細胞分離液淋巴細胞分離液第二節(jié)淋巴細胞的測定外周血單個核細胞（PBMC）分離：

密度梯度分離法血漿血小板PBMC紅細胞粒細胞單核細胞淋巴細胞90%23淋巴細胞亞群的分離與鑒定：尼龍毛分離法：E花結(jié)實驗：CD2/LFA-224利用表面標志分離淋巴細胞亞群免疫熒光25流式細胞術(shù)：樣品進入孔待分離單細胞懸液＋熒光標記抗體產(chǎn)生散射光光電倍增管發(fā)射熒光根據(jù)細胞表面電荷26Lc功能測定：1.淋巴細胞增殖/轉(zhuǎn)化試驗：原理：

有絲分裂原等非特異刺激T、B細胞向淋巴母細胞轉(zhuǎn)化、增殖。方法：

MTT法：線粒體琥珀脫氫酶MTT（噻唑鹽）甲臜顆粒（紫藍色）27氚標記的胸腺嘧啶核苷放射能絲裂原淋巴細胞增殖實驗3H-TdR摻入法MTT用酶標儀測定細胞培養(yǎng)OD值282.T細胞介導的細胞毒試驗：CTL待檢殺傷靶細胞標記293.

B細胞溶血空斑實驗：RBC表面AgAb溶血空斑補體1～3小時檢測：B細胞的抗體產(chǎn)生功能

30溶血空斑溶血空斑實驗31免疫預防

特異性免疫的獲得方式：

1.自然免疫：

2.人工免疫：主動、被動免疫自然主動免疫自然被動免疫32一、人工主動免疫概念：用具有免疫原性的物質(zhì)接種機體，使之產(chǎn)生特異性免疫，從而預防感染的措施。疫苗（一）傳統(tǒng)疫苗：1．滅活疫苗（死疫苗）：2．減毒活疫苗：3．類毒素：33滅活疫苗和減毒活疫苗的特性比較

死疫苗活疫苗性狀死活接種次數(shù)和劑量多（2-3次）、大少（1次）、小途徑皮下皮下、自然感染途徑等效果弱、維持時間短強、維持時間長穩(wěn)定性穩(wěn)定、易保存不穩(wěn)定、不易保存安全性安全毒力“返祖”機制體液免疫體液、細胞、局部免疫常用疫苗霍亂、傷寒、狂犬卡介苗、麻疹、脊灰34（二）新型疫苗：1．亞單位疫苗：保留有效免疫原成分2．結(jié)合疫苗：TI-Ag+載體→TD-Ag3．合成肽疫苗：4．基因工程疫苗：

重組抗原疫苗：重組載體疫苗：

DNA疫苗:轉(zhuǎn)基因植物疫苗：編碼有效免疫原的基因35二、人工被動免疫

概念：給人體注射含有特異性抗體的免疫血清或細胞因子等制劑，以治療或緊急預防感染的措施。常用制劑：（一）動物免疫血清:外毒素抗毒素類毒素脫毒刺激中和刺激36（二）人免疫球蛋白制劑1.丙種球蛋白：緊急預防甲肝、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎2.人特異性免疫球蛋白：如抗乙肝病毒免疫球蛋白（三）細胞因子制劑：IL-2、IFN等（四）單克隆抗體制劑：人血清丙種球蛋白胎盤丙種球蛋白恢復期病人血清免疫志愿者的血清37

38免疫治療免疫增強療法：免疫抑制療法：

特異性免疫治療：非特異性免疫治療：

主動免疫治療：被動免疫治療：39（一）抗原類制劑：疫苗、瘤苗、自身抗原（二）抗體類制劑1.免疫血清：2.抗淋巴細胞丙種球蛋白：3.抗腫瘤抗體制劑：靶向治療常用細胞毒物質(zhì)：放射性核素、化療藥物、毒素存在問題：鼠源性抗體；對實體腫瘤穿透力差；特異性不高。4.抗細胞因子抗體：如用抗IL-1治療RA。40（三）免疫細胞類制劑：1．造血干細胞移植：骨髓移植、臍血轉(zhuǎn)輸2．過繼免疫療法：CIK：cytokineinduceskillercells.細胞因子誘導的殺傷細胞。主要源于NK（外周血淋巴細胞）。TIL：tumorinfiltratinglymphocytes,腫瘤浸潤性淋巴細胞。源于實體瘤組織，更強的殺傷活性。41（四）生物應答調(diào)節(jié)劑：BRM，具有促進或調(diào)節(jié)免疫功能的制劑，通常對免疫功能正常者無影響，對免疫功能異常尤其是免疫功能低下者有促進和調(diào)節(jié)作用。1.BCG、短小棒桿菌、細菌或真菌的多糖成分2.胸腺肽：3.轉(zhuǎn)移因子：4.免疫核糖核酸：42（五）免疫抑制劑：化學合成：環(huán)磷酰胺，硫唑嘌呤微生物制劑：環(huán)孢素或環(huán)孢菌素CsA；FK-506；雷公藤制劑43抗原補體免疫細胞MHCCK、CD等抗體免疫應答B(yǎng)細胞T細胞體液免疫細胞免疫復習:

生理：病理的免疫應答：超敏、腫瘤、移植免疫診斷、防治：APC44APCT細胞LFA-1CD2LFA-3TCRCD28B7CD4MHC－Ⅱ肽CD40LCD40ICAM-1122作用：以IgG為代表:結(jié)合抗原的部位遺傳標記所在部位結(jié)合補體、結(jié)合胎盤部位結(jié)合細胞部位46復習思考題一、名解：凝集反應、沉淀反應、ELISA、（凝集