ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T29393—2012

柑桔黃龍病菌的檢疫檢測與鑒定

DetectionandidentificationofCandidatusliberobacterasiaticum

2012-12-31發(fā)布2013-03-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T29393—2012

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位全國農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心浙江省植物保護(hù)檢疫局

:、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人吳立峰嚴(yán)鐵林云彪項宇朱景全朱莉

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T29393—2012

柑桔黃龍病菌的檢疫檢測與鑒定

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了柑桔黃龍病菌亞洲種Candidatusliberobacterasiaticum的檢測與鑒

jagoueixetal.

定方法

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于植物檢疫過程中對柑桔黃龍病菌亞洲種的檢測與鑒定

。

2病菌基本信息

中文名柑桔黃龍病菌

:。

學(xué)名Candidatusliberobacterasiaticum

:jagoueixetal.

病害英文名

:CitrusHuanglongbingHLB。

屬薄壁菌門韌皮部桿菌屬Liberobacter

Gracilicutes、。

3方法原理

根據(jù)柑桔黃龍病菌侵染柑桔植株發(fā)病典型癥狀進(jìn)行田間鑒定經(jīng)嫁接或經(jīng)柑桔木虱Diahorina

;(p

citri傳病后可根據(jù)木本指示植物發(fā)病癥狀鑒定聚合酶鏈反應(yīng)檢

),;(PolymeraseChainReaction,PCR)

測技術(shù)對柑桔黃龍病菌進(jìn)行體外擴(kuò)增可得到快速有效的鑒定結(jié)果

DNA,、。

4儀器及用具

紫外線透射儀或凝膠成像系統(tǒng)離心機(jī)核酸電泳儀計移液器

,,,pH,:10μL、20μL、100μL、

儀水浴器超純水系統(tǒng)電子天平

1000μL,PCR,、,。

5試劑與材料

緩沖液三羥甲基氨基甲烷鹽酸乙二胺四乙酸十二烷基硫酸鈉

TAE,()-(Tris-HCl),(EDTA),

乙酸鈉Taq酶緩沖液鎂離子2+脫氧核苷三

(SDS),(NaAc),,10×PCR,25mmol/L(Mg),20mmol/L

磷酸熒光染料瓊脂糖溴酚藍(lán)高錳酸鉀三氯甲烷氯仿異戊醇異丙醇

(dNTP),5μLDNA(GV),,,,(),,,

乙醇

。

6癥狀識別法

柑桔黃龍病主要鑒定依據(jù)是田間出現(xiàn)的葉片斑駁型黃化和黃梢葉片斑駁型黃化即葉片轉(zhuǎn)綠

“”“”。

后從主側(cè)脈附近和葉片基部開始黃化黃化部分?jǐn)U展形成黃綠相間分布不均的斑駁后來可以全葉黃

、,,

化黃梢即在發(fā)病初期綠色樹冠上少部分新梢枝葉片黃化有些柑桔結(jié)果樹果實呈紅鼻子果在

。,?！啊?。

柑桔黃龍病區(qū)符合上述典型癥狀的病苗病樹可直接鑒定為柑桔黃龍病

、。

對難以下結(jié)論的疑似病苗病樹可根