色層分離法的產(chǎn)生和發(fā)展2色層分離的有關(guān)術(shù)語(yǔ)3概述118色層分離法色層分離過(guò)程理論4各類(lèi)不同分離機(jī)制的色層分離法介紹5層析的放大618.1概述色層分離是一組相關(guān)技術(shù)的總稱，又叫色譜法、層離法、層析法等，是一種條件溫和、能分離物化性能差別很小的一組化合物的重要分離技術(shù)。18.2色層分離法的產(chǎn)生和發(fā)展12沿革色層分離中的基本概念及其分類(lèi)3色譜展開(kāi)技術(shù)18.2.1沿革氣相和液相特別是液相色層分離技術(shù)，如分配色譜、離子交換色譜、疏水色譜、凝膠色譜、親和色譜等，已成為有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)、蛋白質(zhì)等方面的一項(xiàng)重要分離技術(shù)。色層分離這一術(shù)語(yǔ)，最早應(yīng)用于有色色素的離析并沿用至今。它是基于當(dāng)含有被分離物質(zhì)的料液滲濾通過(guò)由吸著劑粒子涂鋪的層（薄層層析）或填充的管子（柱層析）時(shí)，對(duì)混合物各組分產(chǎn)生選擇性的阻滯作用。18.2.2色層分離中的基本概念及其分類(lèi)18.2.2色層分離中的基本概念及其分類(lèi)18.2.2色層分離中的基本概念及其分類(lèi)18.2.3色譜展開(kāi)技術(shù)18.2.3色譜展開(kāi)技術(shù)（１）洗脫分析法18.2.3色譜展開(kāi)技術(shù)（２）前流分析法18.2.3色譜展開(kāi)技術(shù)（３）頂替分析法18.2.3色譜展開(kāi)技術(shù)18.3色層分離的有關(guān)術(shù)語(yǔ)12平衡關(guān)系局部平衡定律18.3.1平衡關(guān)系在色層分離過(guò)程中，所有的溶質(zhì)都被同一流動(dòng)速度的移動(dòng)相運(yùn)送，并且可逆地向固定相遷移，由于在固定相上面它們所消耗的時(shí)間不同，所以其總的遷移速率各不相同。通常溶質(zhì)在固定相中的濃度是它在流動(dòng)相中濃度的函數(shù)，一般認(rèn)為：18.3.2局部平衡定律但是在給定溫度下，可簡(jiǎn)化為：18.3.2局部平衡定律18.4色層分離過(guò)程理論12塔板理論色層分離的連續(xù)描述以下的假設(shè)是大多數(shù)塔板理論模型所共有的。①吸附過(guò)程是熱力學(xué)上可逆的。②在相間，溶質(zhì)的質(zhì)量傳遞阻力可以忽略不計(jì)③洗脫液連續(xù)通過(guò)板，流出體積為Q④在相鄰板之間它們沒(méi)有返混。⑤平衡等溫線是線性的（Kｄ＝常數(shù)）：⑥18.4.1塔板理論它的圖解表示被稱為是穿透曲線（圖18.10）。（１）參數(shù)的估計(jì)———N的判定（２）等理論板高度的概念和效率（３）不平衡和區(qū)域擴(kuò)展18.4.1塔板理論18.4.1塔板理論18.4.2色層分離的連續(xù)描述（１）平衡模型（２）速率理論18.4.2色層分離的連續(xù)描述18.5各類(lèi)不同分離機(jī)制的色層分離法介紹12吸附色層分離法疏水作用色層分離法34金屬螯合色層分離法共價(jià)作用色層分離法56聚焦色層分離法離子交換色層分離法18.5各類(lèi)不同分離機(jī)制的色層分離法介紹910聚焦色層分離法離子交換色層分離法1112擬似移動(dòng)床型色層分離法灌注色層分離法78凝膠過(guò)濾色層分離法正相與反相層析吸附色層分離法是利用吸附劑對(duì)組分的吸附能力的差別進(jìn)行分離的，用來(lái)填充柱的物質(zhì)包括無(wú)機(jī)吸附劑和有機(jī)吸附劑。18.5.1吸附色層分離法18.5.2疏水作用色層分離法（１）原理（２）首要條件（３）影響疏水作用的參數(shù)（４）在蛋白質(zhì)分離、純化上的應(yīng)用18.5.3金屬螯合色層分離法18.5.4共價(jià)作用色層分離法（１）簡(jiǎn)介（２）過(guò)程階段（３）應(yīng)用情況一是谷胱甘型二硫鍵層18.5.4共價(jià)作用色層分離法二是巰基丙基型二硫鍵層析劑18.5.5聚焦色層分離法（１）簡(jiǎn)介（２）過(guò)程原理

①蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)

②ｐＨ梯度的形成③聚焦效應(yīng)18.5.5聚焦色層分離法18.5.5聚焦色層分離法18.5.6離子交換色層分離法（１）原理（２）特點(diǎn)（３）介質(zhì)（４）洗脫方式（５）影響線性梯度洗脫分離特性的因素（６）應(yīng)用它們的相態(tài)。18.5.6離子交換色層分離法18.5.6離子交換色層分離法18.5.6離子交換色層分離法18.5.7凝膠過(guò)濾色層分離法

18.5.7凝膠過(guò)濾色層分離法

（１）原理18.5.7凝膠過(guò)濾色層分離法

見(jiàn)教材（２）凝膠過(guò)濾介質(zhì)及其選擇18.5.7凝膠過(guò)濾色層分離法（３）應(yīng)用18.5.8正相與反相層析（１）簡(jiǎn)介（２）反相層析對(duì)分離物要求①弱酸性、弱堿性化合物可調(diào)節(jié)ｐＨ使該化合物處于不解離狀態(tài)。②兩性物質(zhì)可以加入反離子使之成為中性離子對(duì)，再進(jìn)行層析。③有些離子，可以使它們先變成中性配合物，然后再層析，如金屬離子。18.5.9親和色層分離法（１）原理（２）親和分離介質(zhì)（３）應(yīng)用親和色譜分離介質(zhì)的種類(lèi)：①金屬螯合介質(zhì)；②小配體親和分離介質(zhì)；③顏料親和分離介質(zhì)；④抗體親和分離介質(zhì)；⑤外源凝集素親和分離介質(zhì)等多種。18.5.9親和色層分離法18.5.9親和色層分離法連續(xù)環(huán)狀色譜法可用于蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類(lèi)等生化物質(zhì)的分離。18.5.10連續(xù)環(huán)狀色層分離法擬似移動(dòng)床型色層分離法是克服色層分離處理量小的另一種方法。18.5.11擬似移動(dòng)床型色層分離法18.5.11擬似移動(dòng)床型色層分離法18.5.12灌注色層分離法（１）灌注色層分離介質(zhì)18.5.12灌注色層分離法（１）灌注色層分離介質(zhì)18.5.12灌注色層分離法（１）灌注色層分離介質(zhì)18.5.12灌注色層分離法（２）