中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅５４１３．１４—２０１０

食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

嬰幼兒食品和乳品中維生素犅１２的測(cè)定

犖犪狋犻狅狀犪犾犳狅狅犱狊犪犳犲狋狔狊狋犪狀犱犪狉犱

犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狏犻狋犪犿犻狀犅１２犻狀犳狅狅犱狊犳狅狉犻狀犳犪狀狋狊犪狀犱狔狅狌狀犵犮犺犻犾犱狉犲狀，

犿犻犾犽犪狀犱犿犻犾犽狆狉狅犱狌犮狋狊

２０１００３２６發(fā)布２０１００６０１實(shí)施

中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部發(fā)布

書(shū)

犌犅５４１３．１４—２０１０

前言

本標(biāo)準(zhǔn)代替ＧＢ／Ｔ５４１３．１４—１９９７《嬰幼兒食品和乳粉維生素Ｂ１２的測(cè)定》。

本標(biāo)準(zhǔn)與ＧＢ／Ｔ５４１３．１４—１９９７相比，主要變化如下：

———標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)改為《嬰幼兒食品和乳品中維生素Ｂ１２的測(cè)定》。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ為規(guī)范性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：

———ＧＢ５４１３—１９８５、ＧＢ／Ｔ５４１３．１４—１９９７。

Ⅰ

書(shū)

犌犅５４１３．１４—２０１０

食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

嬰幼兒食品和乳品中維生素犅１２的測(cè)定

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中維生素Ｂ１２的測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中維生素Ｂ１２的測(cè)定。

２規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版

本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

３原理

利用萊士曼氏乳酸桿菌（犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊犾犲犻犮犺犿犪狀狀犻犻）對(duì)維生素Ｂ１２的特異性和靈敏性，定量測(cè)定出

試樣中維生素Ｂ１２的含量。在測(cè)定用培養(yǎng)基中供給除維生素Ｂ１２以外的所有營(yíng)養(yǎng)成分，這樣微生物生長(zhǎng)

產(chǎn)生的透光率就會(huì)同標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)工作液及未知待測(cè)溶液中維生素Ｂ１２的含量相對(duì)應(yīng)。以不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶

液的透光率相對(duì)于各濃度水平標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)即可計(jì)算出試樣中維生素

Ｂ１２的含量。

４試劑和材料

除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為ＧＢ／Ｔ６６８２規(guī)定的二級(jí)水。

４．１菌株：萊士曼氏乳酸桿菌（犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊犾犲犻犮犺犿犪狀狀犻犻）ＡＴＣＣ７８３０。

４．２維生素Ｂ１２（ＶｉｔａｍｉｎＢ１２或Ｃｙａｎｏｃｏｂａｌａｍｉｎ）標(biāo)準(zhǔn)品：分子式Ｃ６３Ｈ８８ＣｏＮ１４Ｏ１４Ｐ，純度≥９９％。

４．３培養(yǎng)基。

４．３．１乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基：見(jiàn)附錄Ａ。

４．３．２乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基：見(jiàn)附錄Ａ。

４．３．３維生素Ｂ１２測(cè)定用培養(yǎng)基：見(jiàn)附錄Ａ。

注：一些商品化合成培養(yǎng)基效果良好，商品化合成培養(yǎng)基按標(biāo)簽說(shuō)明進(jìn)行配制。

４．４９ｇ／Ｌ氯化鈉溶液（生理鹽水）：稱(chēng)?。梗埃缏然c溶解于１０００ｍＬ水中，分裝于具塞試管，每管

１０ｍＬ。１２１℃滅菌１５ｍｉｎ。

４．５乙醇溶液：體積分?jǐn)?shù)為２５％。

４．６無(wú)水磷酸氫二鈉（Ｎａ２ＨＰＯ４）。

４．７無(wú)水偏重亞硫酸鈉（Ｎａ２Ｓ２Ｏ５）。

４．８檸檬酸（含一個(gè)結(jié)晶水）（Ｃ６Ｈ８Ｏ７·Ｈ２Ｏ）。

４．９標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備。

４．９．１維生素Ｂ１２貯備液（１０μｇ／ｍＬ）：精確稱(chēng)取維生素Ｂ１２標(biāo)準(zhǔn)品（４．２），用乙醇溶液（４．５）定容至維生

素Ｂ１２濃度為１０μｇ／ｍＬ。

４．９．２維生素Ｂ１２中間液（１００ｎｇ／ｍＬ）：用乙醇溶液（４．５）將５