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文檔簡介

轉(zhuǎn)基因食品PCR定性檢測——轉(zhuǎn)基因大豆及制品檢測試驗參照國家標準相關(guān)系列標準：應用范圍：GB/T19495的本部分規(guī)定了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測的核酸定性PCR方法。本部分適用于種子、飼料、食品和環(huán)境樣品中轉(zhuǎn)基因成分的定性PCR檢測。檢測原理：一般原理：定性分析包括對測試樣品目標核算序列的篩選檢測和特異性檢測。在設(shè)置合適的對照和在檢測下限的情況下，定性檢測結(jié)果要清楚判斷樣品是否為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品。本檢測方法包括：目標序列的擴增和檢測，擴增片段特異性的確證。PCR擴增目標序列的擴增是在反應緩沖液中，脫氧核糖核酸三磷酸、寡核苷酸引物在DNA聚合酶的作用下進行的催化反應。在反應混合體系中不應存在DNA聚合酶的抑制劑。DNA擴增是一個循環(huán)的過程：—通過加熱使雙螺旋DNA變性為單鏈核酸：—在合適的溫度下引物和目標序列發(fā)生退火；—在合適的溫度下，結(jié)合在兩條單鏈上的引物通過DNA聚合酶作用進行PCR延伸反應。PCR產(chǎn)物檢測和確證可以通過凝膠電泳或其他方法檢測PCR產(chǎn)物，必要是可以將PCR產(chǎn)物從凝膠中分離出來進行檢測?？梢酝ㄟ^限制性內(nèi)切酶酶切分析、雜交、DNA序列分析或者熔點曲線分析等方法對PCR產(chǎn)物進行確證。采用實時熒光PCR方法檢測時，擴增及檢測同時進行。檢測步驟：引物設(shè)計原則PCR方法的選擇：PCR反應條件及驗證結(jié)果判定：植物基因組DNA提取方法：CTAB法SDS法試劑盒法一、物種特異性檢測：PCR反應體系：PCR反應參數(shù)設(shè)置：PCR結(jié)果確證：二、篩選檢測方法PCR反應體系：PCR反應參數(shù)：PCR結(jié)果確證：三、結(jié)

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