免疫組化結(jié)果判斷及常見問題的分析第一頁，共四十七頁，2022年，8月28日第二頁，共四十七頁，2022年，8月28日肝臟：CK8理想著色，膽管上皮細(xì)胞強陽性，肝細(xì)胞呈不同層次陽性。第三頁，共四十七頁，2022年，8月28日

panCK（AE1/AE3）在肝臟理想的染色，采用了熱修復(fù)。肝細(xì)胞膜、膽管強而清晰的著色。背景干凈。第四頁，共四十七頁，2022年，8月28日一、特異性染色的判斷1.特定的定位

細(xì)胞陽性——根據(jù)靶抗原不同而呈現(xiàn)胞膜型、胞漿型或胞核型間質(zhì)陽性——表現(xiàn)為細(xì)胞外著色，局限性或彌散性2.染色的不均一性陽性細(xì)胞的染色分布不均，片狀或點狀散在分布染色強弱不等，顏色深淺反映抗原量的多少3.排除人為造成的非特異性染色

切片的折疊、刀痕，色素沉著，組織細(xì)胞壞死。4.顆粒性顯色

DAB顯色在高倍鏡下呈顆粒狀而非均勻著色。第五頁，共四十七頁，2022年，8月28日免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化照片CK10CD44v6ER第六頁，共四十七頁，2022年，8月28日第七頁，共四十七頁，2022年，8月28日第八頁，共四十七頁，2022年，8月28日第九頁，共四十七頁，2022年，8月28日第十頁，共四十七頁，2022年，8月28日第十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日合格的免疫組化染色切片

是正確判斷染色結(jié)果的基礎(chǔ)和前提

不合格的免疫組化染色切片

容易導(dǎo)致誤判第十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日C-erbB-2優(yōu)良中差第十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日4321ER第十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日子宮內(nèi)膜PR染色，修復(fù)不足子宮內(nèi)膜PR染色，修復(fù)良好

PR第十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日編號陽性片待檢片陰性對照結(jié)論12345－＋－＋＋－＋＋－＋－＋－－－操作失誤，抗體失效非特異性著色陽性片不含靶抗原待檢片不含定位抗原待檢片含定位抗原二、染色結(jié)果的判斷第十六頁，共四十七頁，2022年，8月28日PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-dayCM陽性強度20×10視野下，隨機選取5個視野，測100個陽性細(xì)胞的平均光密度即為此片的陽性強度。三、結(jié)果分析第十七頁，共四十七頁，2022年，8月28日P53陽性細(xì)胞百分比計數(shù)100個瘤細(xì)胞，其中陽性細(xì)胞的比例：＜5%（－）5%~30%（＋）30%~50%（＋＋）＞50%（＋＋＋）第十八頁，共四十七頁，2022年，8月28日PCNABarnes法A：瘤細(xì)胞顯色有無及深淺0（不著色）1（淺黃色）2（棕黃色）3（棕褐色）B：顯色細(xì)胞的比例1（1%~10%）2（11%~50%）3（51%~80%）4（＞80%）評分=A×B0分：陰性1~4分：弱陽性＞4分：強陽性第十九頁，共四十七頁，2022年，8月28日膠原染色陽性面積百分比40×10視野，選取5個視野，計算陽性區(qū)域面積占整個參考面積的百分率。第二十頁，共四十七頁，2022年，8月28日CD34Weidner法（MVD計數(shù)）孤立的棕黃色細(xì)胞族代表一條微血管。低倍鏡下找到組織內(nèi)密度最高區(qū)域。40×10視野下計數(shù)微血管數(shù)目。第二十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日K-rasVEGF第二十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日附：定量分析——圖象處理系統(tǒng)

1、圖象處理：利用儀器按照不同的目的進(jìn)行圖象的修正、變換、特征提取和測量。1）“狹義”指消除圖象的模糊不清部分，校正畸變。2）“廣義”包括對圖象的結(jié)構(gòu)分析，提取特征進(jìn)行測量。

第二十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日2、圖象處理系統(tǒng)組成圖象輸入（顯微鏡、掃描儀）圖象處理運算（病理圖文分析軟件）圖象、數(shù)據(jù)輸出

第二十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日

3、圖象處理系統(tǒng)功能

幾何形態(tài)學(xué)定量分析細(xì)胞核、漿的大小、面積、核漿比；細(xì)胞分布密度、個數(shù)；血管、腺體的面積、密度；間質(zhì)的面積

免疫組織化學(xué)分析按著色灰度分類，計算陽性、陰性細(xì)胞的面積含量DNA倍體分析計算正常細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞DNA含量，給出倍體參數(shù)、DNA參數(shù)分布直方圖

AgNOR分析顆粒分析：數(shù)目、大小、面積、比例

第二十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日第二十六頁，共四十七頁，2022年，8月28日四、免疫組化異常著色及對策1.非特異性著色及其對策非特異性著色原因?qū)Σ卟僮鬟^程沖洗不充分每步?jīng)_洗3×5min內(nèi)源性過氧化物酶3％H2O2封閉內(nèi)源性生物素使用生物素阻斷試劑盒阻斷電荷吸附非免疫動物血清封閉抗體不純采用單克隆抗體切片制片不當(dāng)改善取材和制片加試劑后切片干燥防止切片干燥第二十七頁，共四十七頁，2022年，8月28日內(nèi)源性生物素—腎小管第二十八頁，共四十七頁，2022年，8月28日內(nèi)源性生物素—淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺腺癌第二十九頁，共四十七頁，2022年，8月28日蛻膜組織部分胞核PR陽性，血管內(nèi)紅細(xì)胞過氧化物酶顯色第三十頁，共四十七頁，2022年，8月28日嗜酸性粒細(xì)胞中細(xì)胞色素顯色第三十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日吞噬細(xì)胞內(nèi)

含鐵血黃素

第三十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日壞死組織著色：AE1/AE3第三十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日壞死組織著色第三十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日交叉反應(yīng)：乳腺ki-67組織細(xì)胞胞漿著色第三十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日黑色素瘤，細(xì)胞內(nèi)含黑色素，呈紫黑色，HE染色第三十六頁，共四十七頁，2022年，8月28日灶狀著色：機械原因著色第三十七頁，共四十七頁，2022年，8月28日CyclinD1套細(xì)胞淋巴瘤全片著色第三十八頁，共四十七頁，2022年，8月28日全片著色第三十九頁，共四十七頁，2022年，8月28日邊緣著色第四十頁，共四十七頁，2022年，8月28日“陰陽臉”著色第四十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日氣泡第四十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日非特異性著色原因?qū)Σ卟僮鬟^程沖洗不充分每步?jīng)_洗3×5min內(nèi)源性過氧化物酶3％H2O2封閉內(nèi)源性生物素使用生物素阻斷試劑盒阻斷電荷吸附非免疫動物血清封閉抗體不純采用單克隆抗體切片制片不當(dāng)改善取材和制片加試劑后切片干燥防止切片干燥非特異性著色及其對策第四十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日無信號片CD30第四十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日2.染色的假陰性及其對策染色假陰性原因?qū)Σ呓M織處理不當(dāng)（固定、浸蠟）改善條件，重取材一抗與二抗種屬連接錯誤確定抗體種屬無誤抗體失效不得使用過期的試劑盒顯色系統(tǒng)不相適配更換適配的顯色系統(tǒng)操作不當(dāng)，遺漏重要步驟嚴(yán)格遵守操作規(guī)程第四十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日無色或淺色片MCL理想的CD5著色。所有的瘤細(xì)胞都著色很強。散在的T細(xì)胞著色比瘤細(xì)胞深。MCL的CD5染色不足(一抗?jié)舛忍?。MCL瘤細(xì)胞幾乎都沒有著色。