PspA和PsaA相關(guān)融合蛋白質(zhì)疫苗綜述,免疫學(xué)論文內(nèi)容摘要：肺炎鏈球菌是一種對(duì)人類健康危害較大的條件致病菌,當(dāng)前其疫苗研究已獲得了宏大突破,但既往研究主要集中在莢膜多糖疫苗上,存在眾多局限性。近年來(lái),隨著生物學(xué)技術(shù)及基因工程技術(shù)的飛速發(fā)展,由肺炎鏈球菌毒力因子及外表蛋白制作的蛋白疫苗研發(fā)迅速。華而不實(shí),將肺炎鏈球菌不同的外表蛋白質(zhì)作為免疫原組分構(gòu)建的融合蛋白疫苗,極大地加強(qiáng)了疫苗的免疫原性,且已獲得一定的試驗(yàn)效果,將來(lái)進(jìn)一步研究將有望取代莢膜多糖疫苗。本文關(guān)鍵詞語(yǔ)：肺炎鏈球菌;融合蛋白疫苗;肺炎鏈球菌外表蛋白;肺炎鏈球菌溶血素;肺炎鏈球菌外表黏附素A;作者簡(jiǎn)介：*閔迅,E-mail:minxunzmu@163.com;收稿日期：2022-01-09基金：國(guó)家自然科學(xué)基金(81460317);貴州省科學(xué)技術(shù)基金(黔科合LH字[2020]7553號(hào));ResearchProgressinStreptococcusPneumoniaeFusionProteinVaccineZHANGSutingHUANGJianMINXunSchoolofLaboratoryMedicine,ZunyiMedicalUniversityDepartmentofMedicalLaboratory,AffiliatedHospitalofZunyiMedicalUniversityAbstract：Streptococcuspneumoniaeisakindofconditionalpathogenwhichisharmfultohumanhealth.Atpresent,greatbreakthroughshavebeenmadeinthevaccineresearch.However,previousstudiesmainlyfocusedoncapsularpolysaccharidevaccine,whichhasmanylimitations.Inrecentyears,withtherapiddevelopmentofbiologicaltechnologyandgeneengineeringtechnology,proteinvaccinesmadefromvirulencefactorsandsurfaceproteinsofstreptococcuspneumoniaeareinrapiddevelopment.Amongthem,thefusionproteinvaccineconstructedwithdifferentsurfaceproteinsofstreptococcuspneumoniaeasimmunogeniccomponentshasgreatlyenhancedtheimmunogenicityofthevaccine,andhasachievedcertaintestresults,whichmayhopefullyreplacethecapsularpolysaccharidevaccinewithfurtherstudiesinthefuture.Keyword：Streptococcuspneumoniae;Fusionproteinvaccine;Pneumococcalsurfaceprotein;Pneumolysin;PneumococcalsurfaceadhesinA;Received：2022-01-09肺炎鏈球菌是一種革蘭陽(yáng)性兼性厭氧菌,其主要通過(guò)呼吸道飛沫與人直接接觸傳播,常以無(wú)異常感覺(jué)和狀態(tài)的方式定居于健康人群的呼吸道,是一種時(shí)機(jī)致病菌。在免疫功能相對(duì)較差的人群(老年人、嬰幼兒)及免疫缺陷人群中,肺炎鏈球菌可引起多種侵襲性疾病[1],如社區(qū)獲得性肺炎和腦膜炎等[2]。由于肺炎鏈球菌導(dǎo)致的疾病的嚴(yán)重性越來(lái)越受重視,故WHO建議各國(guó)進(jìn)行常規(guī)的兒童肺炎鏈球菌疫苗接種[3]。當(dāng)前,臨床廣泛使用的肺炎鏈球菌疫苗有23價(jià)肺炎鏈球菌多糖疫苗、7價(jià)肺炎鏈球菌結(jié)合疫苗。但其僅限于特定的血清型,且由于組分復(fù)雜而導(dǎo)致生產(chǎn)成本高。因而,以肺炎鏈球菌蛋白為免疫原的新型疫苗被提出[4]。當(dāng)前,常作為肺炎鏈球菌蛋白質(zhì)疫苗免疫原的有肺炎鏈球菌外表蛋白(pneumococcalsurfaceprotein,Psp)A、肺炎鏈球菌溶血素(pneumolysin,Ply)、肺炎鏈球菌外表黏附素A(pneumococcalsurfaceadhesinA,PsaA)等。華而不實(shí)PspA的作用機(jī)制主要為抑制肺炎鏈球菌外表的補(bǔ)體沉積,進(jìn)而減少吞噬作用[5,6]。Ply是一種膽固醇依靠性溶細(xì)胞素,是肺炎鏈球菌致病的重要因子,所以常用其減毒形式(Pds、A146Ply等)作為肺炎鏈球菌疫苗組分[7,8,9]。PsaA是一種分子量為37000的脂蛋白,在所有肺炎鏈球菌血清型中均具有遺傳保守性,對(duì)調(diào)節(jié)肺炎鏈球菌黏附于細(xì)胞外表的能力至關(guān)重要[10,11,12]。除此之外,三聯(lián)組氨酸蛋白D、黏附毒力因子A等其他毒力因子也作為免疫原在肺炎鏈球菌融合蛋白疫苗的研發(fā)中被使用[13]?，F(xiàn)就肺炎鏈球菌融合蛋白疫苗的研究進(jìn)展予以綜述。1PspA相關(guān)融合蛋白質(zhì)疫苗1.1PspA家族融合蛋白由于PspA構(gòu)造具有多樣性,所以基于PspA的疫苗應(yīng)包含兩個(gè)主要家族(1和2)的片段,每個(gè)家族至少一個(gè),才能誘導(dǎo)針對(duì)更多血清型肺炎鏈球菌的保衛(wèi)[14]。有研究表示清楚,使用含PspA家族1和2的融合部分(PspA1ABC-4B和PspA1ABC-3AB)片段的PspA融合蛋白,能誘導(dǎo)針對(duì)不同PspA片段肺炎鏈球菌的保衛(wèi)[15]。用PspA融合蛋白免疫的小鼠,能干擾產(chǎn)生不同PspA片段肺炎鏈球菌C3的沉積,而單獨(dú)針對(duì)PspA家族1(PspA1ABC)和PspA家族2(PspA3ABC)片段所制備的單一蛋白質(zhì)疫苗僅對(duì)其本身家族有效,所以PspA融合蛋白疫苗可作為基于PspA抗肺炎鏈球菌感染的有效免疫策略[15]。Xin等[16]將來(lái)自肺炎鏈球菌菌株Rx1(家族1)和EF5668(家族2)的PspA組合構(gòu)成PspA/Rx1-EF5668融合蛋白疫苗,發(fā)現(xiàn)該融合疫苗的免疫保衛(wèi)效果明顯優(yōu)于單一家族PspA。Piao等[17]進(jìn)一步研究了不同PspA家族融合蛋白的效果證實(shí),不同組合的融合蛋白免疫作用有差異不同,PspA3+2疫苗優(yōu)于PspA2+4或PspA2+5疫苗。1.2PspA-PdsGoulart等[18]將重組PspA-Pds融合蛋白接種到小鼠后發(fā)現(xiàn),其可產(chǎn)生針對(duì)PspA和Pds的抗體,這些抗體能夠結(jié)合表示出同源PspA的肺炎鏈球菌,且結(jié)合能力與單獨(dú)接種PspA蛋白質(zhì)疫苗所產(chǎn)生的抗體一樣,故針對(duì)融合蛋白的抗體,對(duì)攜帶異源PspA的細(xì)菌同樣能產(chǎn)生特異性的抗體。為提高PspA-Pds融合蛋白的免疫原性,有學(xué)者進(jìn)一步構(gòu)建了表示出PspA-PdT的融合蛋白,在初免-加強(qiáng)策略中用PspA-PdT蛋白和肺炎鏈球菌重組外表蛋白A構(gòu)建的肺炎鏈球菌重組外表蛋白A-PdT蛋白誘導(dǎo)高抗體反響,促進(jìn)了IgG1/IgG2抗體同種型轉(zhuǎn)變,加強(qiáng)了補(bǔ)體沉積到肺炎鏈球菌外表,進(jìn)而保衛(wèi)小鼠免受致命攻擊[19]。隨后,他們又構(gòu)建了兩種新的表示出SP0148和SP2108蛋白的重組卡介苗菌株,結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用兩種重組卡介苗菌株免疫小鼠后,能夠誘導(dǎo)高水平的白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-17A和干擾素產(chǎn)生。除此之外,Goulart等[20]將這些重組卡介苗菌株與重組卡介苗PspA-PdT(重組卡介苗Mix)組合產(chǎn)生的融合蛋白聯(lián)合使用發(fā)現(xiàn)可誘導(dǎo)更高層次水平的細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答。因而,聯(lián)合使用重組卡介苗菌株產(chǎn)生的融合蛋白可作為肺炎鏈球菌疫苗的初免-加強(qiáng)策略,以提高針對(duì)肺炎鏈球菌感染的保衛(wèi)力。1.3PspA-PspC-產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒素(clostridiumperfringensenterotoxin,CPE)怎樣將疫苗的有效成分傳遞至黏膜組織是黏膜疫苗在開(kāi)發(fā)中必須考慮的問(wèn)題。閉鎖蛋白-4在鼻咽相關(guān)淋巴組織的上皮細(xì)胞中高表示出,PspC-CPE的C端片段能夠與閉鎖蛋白-4結(jié)合,進(jìn)而有效地將融合抗原傳遞給鼻咽相關(guān)淋巴組織和誘導(dǎo)抗原特異性免疫應(yīng)答。Suzuki等[21]將PspC-CPE與PspA融合開(kāi)發(fā)了一種鼻肺炎鏈球菌疫苗,PspA-PspC-CPE與閉鎖蛋白-4結(jié)合能夠有效附著于鼻咽相關(guān)淋巴組織,在用PspA-PspC-CPE鼻部免疫誘導(dǎo)的血清和支氣管肺泡灌洗液中,他們發(fā)現(xiàn)了針對(duì)PspA特異性的IgG和IgA。這證明,PspA-PspC-CPE融合蛋白誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的免疫反響能有效預(yù)防肺炎鏈球菌感染。1.4PsaA-PspA在評(píng)價(jià)PsaA-PspA融合蛋白對(duì)致死性感染保衛(wèi)效果的研究中,與鼻內(nèi)感染肺炎鏈球菌后的牛血清蛋白對(duì)照組相比,PsaA-PspA融合蛋白免疫組小鼠血液和肺中的肺炎鏈球菌水平更低[22]。同時(shí),該研究對(duì)融合蛋白PsaA-PspA23和單一PspA4疫苗進(jìn)行比照發(fā)現(xiàn),與單一PspA4疫苗對(duì)照組相比,PsaA-PspA23融合蛋白免疫組小鼠肺部肺炎鏈球菌菌株的去除率升高,血液中的細(xì)菌負(fù)荷降低,并顯著提高了小鼠存活率(超過(guò)50%)。因而,研究者以為這種含融合蛋白的二價(jià)疫苗可能是莢膜多糖疫苗的良好替代品[23]。1.5細(xì)菌樣顆粒(bacterium-likeparticles,BLPs)/PspA-錨鉤蛋白(proteinanchor,PA)BLP傳遞系統(tǒng)的鼻內(nèi)肺炎鏈球菌蛋白疫苗是將PspA(家族2clade4)與PA融合,使BLPs外表表示出PspA。研究顯示,BLPs/PspA-PA鼻內(nèi)免疫小鼠能夠誘導(dǎo)其血清中產(chǎn)生針對(duì)PspA的特異性IgG,呼吸道灌洗液中產(chǎn)生特異性IgA[24]。因而,通過(guò)BLPs靶向遞送細(xì)菌抗原能夠通過(guò)誘導(dǎo)全身和黏膜免疫應(yīng)答來(lái)預(yù)防肺炎鏈球菌感染。Yu等[25]通過(guò)皮下注射融合蛋白PsaA-PspA23和單一蛋白質(zhì)PspA4的混合物接種小鼠,同時(shí)使用PspA2-PA-BLPs和PspA4-PA-BLPs的混合物通過(guò)鼻內(nèi)途徑免疫另一批小鼠,建模完成后,用兩種不同血清型肺炎鏈球菌攻擊小鼠。結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)全身性疫苗和黏膜疫苗誘導(dǎo)后,針對(duì)PspA的IgG均顯著增加,且黏膜疫苗能在小鼠黏膜中誘導(dǎo)特異性IgA的產(chǎn)生。由此證實(shí),能夠使用兩種疫苗經(jīng)不同途徑實(shí)行共同免疫策略。1.6PspA-多胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白DConverso等[26]研究發(fā)現(xiàn),PspA和多胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白D組成的融合蛋白不僅能提供針對(duì)全身感染的保衛(wèi),還能減少肺炎鏈球菌在鼻咽部的定植,這是單獨(dú)使用PspA蛋白質(zhì)疫苗皮下免疫所沒(méi)有的效果。除此之外,該研究還討論了PspA-多胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白D融合蛋白保衛(wèi)成效的潛在機(jī)制,揭示了該融合蛋白疫苗可增加不同血清型和遺傳背景的肺炎鏈球菌菌株的結(jié)合能力、加強(qiáng)吞噬作用,并促進(jìn)脾細(xì)胞分泌IL-17抗體的產(chǎn)生。1.7特異性靶向人FcRⅠ型(specificallytargetshumanFcRtypeⅠ,hFcRⅠ)-PspAFc受體是細(xì)胞膜外表能與IgFc片段結(jié)合的受體?？乖邢騀c受體能夠在不存在佐劑的情況下加強(qiáng)對(duì)抗原的免疫應(yīng)答,Bitsaktsis等[27]使用抗hFcRⅠ-PspA和重組PspA在不存在佐劑的情況下鼻內(nèi)免疫野生型和hFcRⅠ轉(zhuǎn)基因小鼠。結(jié)果顯示,接受抗hFcRⅠ-PspA的hFcRⅠ轉(zhuǎn)基因小鼠血清和支氣管肺泡灌洗液中的肺炎鏈球菌特異性IgA、IgG2c和IgG1抗體表示出增加且血清補(bǔ)體C3水平明顯升高。除此之外與用肺炎鏈球菌重組外表蛋白A免疫相比,用抗hFcRⅠ-PspA鼻內(nèi)免疫的hFcRⅠ轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生了強(qiáng)烈的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答,并加強(qiáng)了對(duì)致死性肺炎鏈球菌攻擊的保衛(wèi)作用[27]。1.8鞭毛蛋白(flagellin,Fla)B-PspAFla能夠依靠Toll樣受體(Toll-likereceptor,TLR)5實(shí)現(xiàn)信號(hào)表示出和轉(zhuǎn)導(dǎo),其可直接作用于巨噬細(xì)胞,上調(diào)小窩蛋白-1的敏感性。由于TLR5和窩小蛋白-1均在肺部、皮膚、腸道、脾臟中表示出良好,故Lim等[28]將FlaB作為針對(duì)PspA的黏膜佐劑制備了融合蛋白。在青年和老年小鼠的肺炎感染模型中,FlaB-PspA融合蛋白誘導(dǎo)了更高層次水平的抗PspA特異性IgG和IgA應(yīng)答,并對(duì)老年小鼠中肺炎鏈球菌的致死攻擊具有高保衛(wèi)效力[28]。同時(shí)該實(shí)驗(yàn)表示清楚,小窩蛋白-1/TLR5信號(hào)在年齡相關(guān)的先天性免疫反響中起關(guān)鍵作用,且針對(duì)TLR5的FlaB-PspA刺激可能是治療老年人肺炎鏈球菌感染的有效策略。該課題組用FlaB-PspA融合蛋白經(jīng)鼻內(nèi)免疫小鼠發(fā)現(xiàn),其不僅能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生更高層次水平的特異性IgG和IgA,還能為肺炎鏈球菌的致死性攻擊提供保衛(wèi)。除此之外,Nguyen等[29]研究發(fā)現(xiàn)FlaB-PspA還能誘導(dǎo)針對(duì)異源莢膜類型的穿插保衛(wèi)。上述研究表示清楚,FlaB-PspA融合蛋白可作為肺炎鏈球菌黏膜疫苗或多價(jià)莢膜疫苗的有效伴侶蛋白。1.9PspA-膽堿結(jié)合蛋白A(cholinebindingproteinA,CbpA)-Ply肺炎鏈球菌CbpA在肺炎鏈球菌的感染經(jīng)過(guò)中有一定的致病作用。Chen等[30]使用不同的小鼠模型來(lái)測(cè)試各種多價(jià)蛋白質(zhì)疫苗的成效,這些疫苗包含免疫原Ply、CbpA或PspA的全長(zhǎng)或肽區(qū)域的各種組合:具有L460D替代的Ply類毒素(在這里簡(jiǎn)稱L460D)與CbpA的保衛(wèi)性肽表位融合;L460D與含有PspA富含脯氨酸區(qū)的CD2肽融合;L460D和H70(L460D+H70)的組合;H70+YLN和其他組合。經(jīng)腹膜內(nèi)或皮下使用各種抗原組合的3個(gè)劑量(間隔2周)免疫小鼠,然后用不同種血清型肺炎鏈球菌通過(guò)不同的感染途徑攻擊小鼠。在腹腔感染膿毒癥模型中,H70+YLN始終能抵抗1、2、6A型菌株的致死性感染,而CD2+YLN和L460D+H70的組合也能在致死性感染中提供有效保衛(wèi);PspA衍生的抗原組分在靜脈內(nèi)敗血癥(3型和6A型攻擊菌株)模型中表現(xiàn)出良好的保衛(wèi)作用,且H70在有或沒(méi)有L460D或YLN的情況下均能誘導(dǎo)較好的免疫反響。因而,H70+YLN的三價(jià)抗原組合在多種肺炎鏈球菌攻擊模型中均表現(xiàn)出良好的保衛(wèi)效果。2PsaA相關(guān)融合蛋白質(zhì)疫苗2.1PsaA-PlyPsaA蛋白疫苗中融合Ply,能夠誘導(dǎo)表示出高水平的IgG和IgA,且僅使用納克級(jí)別的該疫苗進(jìn)行接種,可引起小鼠特異性的抗原抗體反響。固然接種PsaA-Ply融合蛋白不能保衛(wèi)小鼠免受肺炎鏈球菌攻擊,但研究證實(shí)Ply可用作新型黏膜佐劑,以顯著加強(qiáng)局部和全身體液反響[31]。Lu等[32]制備了PsaA與Ply無(wú)毒衍生物PdT的融合蛋白,并將細(xì)胞壁多糖與融合蛋白偶聯(lián),當(dāng)鼻內(nèi)給予CT佐劑一同免疫后,融合蛋白能較細(xì)胞壁多糖、Ply和PsaA三種單一抗原的等摩爾混合物誘導(dǎo)更高層次的血清抗體滴度[32]。Pope等[33]研究發(fā)現(xiàn),6Ply與PsaA融合能夠顯著調(diào)節(jié)和加強(qiáng)促炎性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答。由于融合蛋白可使6Ply將PsaA有效地遞送至抗原呈遞細(xì)胞外表,有助于啟動(dòng)抗肺炎鏈球菌CD4+T細(xì)胞免疫經(jīng)過(guò)[33]。2.2霍亂毒素B亞基(choleratoxinBsubunit,CTB)-PsaACTB負(fù)責(zé)霍亂全毒素與細(xì)胞的結(jié)合,是一種疫苗的黏膜佐劑。Pimenta等[34]發(fā)現(xiàn),使用CTB-PsaA融合蛋白進(jìn)行鼻內(nèi)免疫能保衛(wèi)小鼠免于肺炎鏈球菌在鼻咽部的定植,且不會(huì)改變小鼠口腔和鼻咽的正常微生物群。Aras等[35]將CTB基因與PsaA基因進(jìn)行融合,并將純化的重組CTB-PsaA融合蛋白用于BALB/c小鼠的鼻內(nèi)免疫實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,CTB-PsaA能夠誘導(dǎo)小鼠血清、唾液、鼻黏膜及支氣管洗滌液中肺炎鏈球菌抗體的表示出,表示清楚CTB-PsaA可作為肺炎鏈球菌候選蛋白疫苗進(jìn)行研究。在隨后的研究中,他們將CTB-PsaA融合蛋白通過(guò)腹腔注射的方式免疫BALB/c小鼠,然后將小鼠暴露于肺炎鏈球菌中,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與其他組相比,免疫組小鼠固然生存時(shí)間并沒(méi)有延長(zhǎng),但其血清中卻產(chǎn)生了大量IgG抗體[36]。2.3PsaA-IL-2和PsaA-IL-4用完全弗氏佐劑乳化的PsaA免疫小鼠,能夠提供針對(duì)肺炎鏈球菌致死性感染的保衛(wèi)。但完全弗氏佐劑的使用在人類中不被接受,所以研究者們需尋求其替代方式方法。有學(xué)者將PsaA的編碼序列與編碼小鼠IL-2、IL-4或源自小鼠IL-1的基因序列進(jìn)行連接,構(gòu)建了PsaA-細(xì)胞因子融合蛋白并在大腸埃希菌中進(jìn)行表示出[37]。結(jié)果顯示,用PsaA-IL-2或PsaA-IL-4免疫小鼠產(chǎn)生的PsaA特異性抗體的滴度與使用完全弗氏佐劑時(shí)相當(dāng)。另外,由于PsaA-Adj(Adj是一種不完全弗式佐劑)誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體主要為IgG1亞類,而PsaA-IL-2和PsaA-IL-4除IgG1外還誘導(dǎo)小鼠表示出大量的IgG2a,所以PsaA-Adj或PsaA-IL-4均顯示出對(duì)肺炎鏈球菌腹膜內(nèi)攻擊的保衛(wèi)作用[37]。在無(wú)佐劑的情況下,用PsaA免疫和PsaA-IL-2免疫的小鼠在遭到攻擊后的存活率分別為0%(0/20)和5%(1/20)[37]。這講明PsaA與IL-2或IL-4的組合,單獨(dú)或與適宜的黏膜佐劑聯(lián)合,可作為肺炎鏈球菌的候選疫苗。2.4PsaA-肺炎鏈球菌膽固醇結(jié)合蛋白A(strepto-coccuspneumoniaecholesterolbindingproteinA,PcpA)PcpA可能在肺炎鏈球菌的黏附經(jīng)過(guò)中起作用。趙博[38]構(gòu)建了PsaA-PcpA融合蛋白,并用其免疫小鼠,檢測(cè)特異性抗體水平,同時(shí)用不同血清型的肺炎鏈球菌對(duì)免疫后的小鼠進(jìn)行攻毒,檢測(cè)肺組織及鼻腔中的細(xì)菌定植量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),PsaA-PcpA融合蛋白能夠有效刺激小鼠產(chǎn)生免疫應(yīng)答,血清抗體效價(jià)在1105以上,而呼吸道中細(xì)菌定植量顯著下降。這表示清楚,PsaA-PcpA融合蛋白不僅能減少肺炎鏈球菌對(duì)宿主細(xì)胞的黏附,還能刺激機(jī)體產(chǎn)生高效價(jià)的抗體,進(jìn)而起到較好的保衛(wèi)作用。3其他融合蛋白質(zhì)疫苗Ply的減毒形式A146Ply具有較好的黏膜佐劑功能,其與DnaJ融合表示出后通過(guò)黏膜免疫能夠誘導(dǎo)C57BL/6小鼠產(chǎn)生較高水平的特異性IgG和sIgA,可幫助小鼠有效抵抗肺炎鏈球菌在鼻咽部、肺部的定植和致死性感染,保衛(wèi)效果與市售23價(jià)肺炎鏈球菌多糖疫苗相當(dāng),且具有非血清型依靠性[39]。Su等[40]發(fā)現(xiàn),與單獨(dú)給予DnaJ相比,用融合蛋白DnaJ-A146Ply經(jīng)皮下免疫的小鼠產(chǎn)生的抗DnaJIgG滴度更高層次,且能夠誘導(dǎo)針對(duì)定植和致死性肺炎鏈球菌感染的B細(xì)胞和T細(xì)胞依靠性保衛(wèi),能明顯提高小鼠血清中的干擾素、IL-4和IL-17A水平[40]。除此之外,Wang等[41]證實(shí)用DnaJ-A146Ply融合蛋白皮下免疫的TLR2-/-小鼠,在用肺炎鏈球菌菌株D39或19F攻擊后顯示出較野生型小鼠更低的存活率和更高層次的細(xì)菌定植;且在TLR2-/-小鼠脾細(xì)胞中,干擾素水平降低。該研究結(jié)果表示清楚,TLR2的表示出對(duì)于用DnaJ-A146Ply免疫的小鼠能有效誘導(dǎo)產(chǎn)生輔助性T細(xì)胞1的免疫應(yīng)答。同時(shí)也有研究表示清楚,DnaJ-A146Ply融合蛋白可通過(guò)蛋白激酶B和核因子B信號(hào)通路刺激巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)免疫應(yīng)答[42]。另有研究者將衍生自CbpA的生物活性肽與Ply類毒素L460D進(jìn)行融合,并在鼻咽炎、中耳炎、肺炎、敗血癥和腦膜炎小鼠模型中測(cè)試融蛋白質(zhì)疫苗的成效[43]。結(jié)果證實(shí),與單獨(dú)的肺炎鏈球菌疫苗相比,CbpA-L460D肺炎鏈球菌融合蛋白具有更廣泛的免疫原性,且抗體在體外對(duì)肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟球菌和流感嗜血桿菌均有活性。除此之外,該融合蛋白疫苗可在被動(dòng)免疫和主動(dòng)免疫途徑中保衛(wèi)小鼠免于肺炎鏈球菌感染。除上述較為廣譜的融合蛋白疫苗外,還有研究者設(shè)計(jì)了肺炎鏈球菌菌毛蛋白亞基RrgB的三種變體組成的RrgB321融合蛋白,由于肺炎鏈球菌菌毛1存在于30%～50%的侵襲性致病菌株中,所以由RrgB321組成的疫苗可能覆蓋30%或更多血清型的肺炎鏈球菌菌株[44,45]。4小結(jié)PspA作為在各型肺炎鏈球菌中廣泛表示出且免疫原性最強(qiáng)的免疫原被廣泛應(yīng)用于融合蛋白疫苗中。當(dāng)前,肺炎鏈球菌融合蛋白的研發(fā)主要有兩種思路:(1)將不同免疫原位點(diǎn)融合,以到達(dá)覆蓋更多菌株的目的;(2)將抗原位點(diǎn)與疫苗佐劑蛋白融合,以到達(dá)放大免疫反響或?qū)⒁呙缬行С煞指眠\(yùn)送到菌株定植部位的目的。在今后的融合蛋白研發(fā)中,將兩種思路結(jié)合能夠獲得更大進(jìn)展。除此之外,肺炎鏈球菌融合蛋白疫苗研究主要處于臨床前研究階段,研究對(duì)象主要為小鼠,將來(lái)等待更多的臨床研究數(shù)據(jù)和成果。以下為參考文獻(xiàn)[1]TerryJE.OcularpathogenicityofStreptococcuspneumoniae[J].JAmOptomAssoc,1984,55(8):587-590.[2]vandeBeekD,deGansJ,TunkelAR,etal.Community-acquiredbacterialmeningitisinadults[J].NEnglJMed,2006,354(1):44-53.[3]WHOPublication.PneumococcalvaccinesWHOpositionpaper-2020-Recommendations[J].Vaccine,2020,30(32):4717-4718.[4]駱詩(shī)露,黃健,韓道賓,等.肺炎鏈球菌蛋白質(zhì)疫苗研究進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥,2021,56(10):102-104.[5]TUAH,FulghamRL,MccroryMA,etal.PneumococcalsurfaceproteinAinhibitscomplementactivationbyStreptococcuspneumoniae[J].InfectImmun,1999,67(9):4720-4724.[6]RenB,SzalaiAJ,HollingsheadSK,etal.EffectsofPspAandantibodiestoPspAonactivationanddepositionofcomplementonthepneumococcalsurface[J].InfectImmun,2004,72(1):114-122.[7]PatonJC,FerranteA.Inhibitionofhumanpolymorphonuclearleukocyterespiratoryburst,bactericidalactivity,andmigrationbypneumolysin[J].InfectImmun,1983,41(3):1212-1216.[8]PatonJC,Rowan-kellyB,FerranteA.Activationofhumancomplementbythepneumococcaltoxinpneumolysin[J].InfectImmun,1984,43(3):1085-1[9]DarrieuxM,GoulartC,BrilesD,etal.Currentstatusandperspectivesonprotein-basedpneumococcalvaccines[J].CritRevMicrobiol,2021,41(2):190-200.[10]MorrisonKE,LakeD,CrookJ,etal.ConfirmationofpsaAinall90serotypesofStreptococcuspneumoniaebyPCRandpotentialofthisassayforidentificationanddiagnosis[J].JClinMicrobiol,2000,38(1):434-437.[11]BerryAM,PatonJC.SequenceheterogeneityofPsaA,a37-kilodaltonputativeadhesinessentialforvirulenceofStreptococcuspneumoniae[J].InfectImmun,1996,64(12):5255-5262.[12]BrilesDE,HollingshedaS,Brooks-WalterA,etal.ThepotentialtousePspAandotherpneumococcalproteinstoelicitprotectionagainstpneumococcalinfection[J].Vaccine,2000,18(16):1707-1711.[13]CoatsMT,BenjaminWH,HollingsheadSK,etal.AntibodiestothepneumococcalsurfaceproteinA,PspA,canbeproducedinsplenectomizedandcanprotectsplenectomizedmicefrominfectionwithStreptococcuspneumoniae[J].Vaccine,2005,23(33):4257-4262.[14]HollingsheadSK,BeckerR,BRILESDE.DiversityofPspA:mosaicgenesandevidenceforpastrecombinationinStreptococcuspneumoniae[J].InfectImmun,2000,68(10):5889-5900.[15]DarrieuxM,MiyajiEN,FerreiraDM,etal.Fusionproteinscontainingfamily1andfamily2PspAfragmentselicitprotectionagainstStreptococcuspneumoniaethatcorrelateswithantibody-mediatedenhancementofcomplementdeposition[J].InfectImmun,2007,75(12):5930-5938.[16]XinW,LiY,MoH,etal.PspAfamilyfusionproteinsdeliveredbyattenuatedSalmonellaentericaserovarTyphimuriumextendandenhanceprotectionagainstStreptococcuspneumoniae[J].InfectImmun,2018,77(10):4518-4528.[17]PiaoZ,AkedaY,TakeuchiD,etal.ProtectivepropertiesofafusionpneumococcalsurfaceproteinA(PspA)vaccineagainstpneumococcalchallengebyfivedifferentPspAcladesinmice[J].Vaccine,2020,32(43):5607-5613.[18]GoulartC,daSilvaTR,RodriguezD,etal.CharacterizationofprotectiveimmuneresponsesinducedbypneumococcalsurfaceproteinAinfusionwithpneumolysinderivatives[J].PLoSOne,2020,8(3):e59605.[19]GoulartC,RodriguezD,KannoAI,etal.RecombinantBCGexpressingaPspA-PdTfusionproteinprotectsmiceagainstpneumococcallethalchallengeinaprime-booststrategy[J].Vaccine,2021,35(13):1683-1691.[20]GoulartC,RodriguezD,KannoAI,etal.AcombinationofrecombinantmycobacteriumbovisBCGstrainsexpressingpneumococcalproteinsinducescellularandhumoralimmuneresponsesandprotectsagainstpneumococcalcolonizationandsepsis[J].ClinVaccineImmunol,2021,24(10):354-358.[21]SuzukiH,WatariA,HashiotoE,etal.C-terminalclostridiumperfringensenterotoxin-mediatedantigendeliveryfornasalpneumococcalvaccine[J].PLoSOne,2021,10(5):e0126352.[22]LuJ,SunT,WangD,etal.ProtectiveimmuneresponseselicitedbyfusionproteincontainingPsaAandPspAfragments[J].ImmunolInvest,2021,44(5):482-496.[23]YuJ,ChenX,LiB,etal.ApneumococcalvaccinecombinationwithtwoproteinscontainingPspAfamilies1and2canpotentiallyprotectagainstawiderangeofStreptococcuspneumoniaestrains[J].ImmunolRes,2021,66(4):528-536.[24]WangD,LuJ,YuJ,etal.ANovelPspAproteinvaccineintranasaldeliveredbybacterium-likeparticlesprovidesbroadprotectionagainstpneumococcalpneumoniainmice[J].OmmunolInvest,2021,47(4):403-415.[25]YuJ,LiB,ChenX,etal.ComparisonofimmunogenicityandprotectionoftwopneumococcalproteinvaccinesbasedonPsaAandPspA[J].InfectImmu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