DepartmentofLaboratoryMedicine第一部分

性能驗證

王全哲課件編號:JYK-K-03-012014年DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine性能驗證何時進行性能驗證性能驗證項目如何作性能驗證DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine何時做性能驗證CLIA`88法案：改進或更換系統(tǒng)時、改變試劑時、增加新項目時。ISO15189：進行能力驗證時，對設(shè)備、系統(tǒng)與方法進行性能驗證。《臨床實驗室管理辦法》臨床實驗室應(yīng)對檢測系統(tǒng)性能進行驗證。儀器進行系統(tǒng)性維修后。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine性能驗證包括哪些項目1

精密度2準確度3可報告范圍4參考區(qū)間5靈敏度6特異性DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine如何做性能驗證1

配套系統(tǒng)

2自建系統(tǒng)DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine配套系統(tǒng)1

精密度2準確度3可報告范圍4參考區(qū)間DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine自建檢測系統(tǒng)1精密度2準確度3可報告范圍4參考區(qū)間5靈敏度6特異性DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine精密度驗證定義：相同的檢測條件下，對某一標本進行重復(fù)檢測，所得測量值的離散程度。要求：包括批內(nèi)與日間精密度實驗DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine精密度驗證具體方法1.1批內(nèi)精密度：取同一份標本插入病人標本中，重復(fù)檢測20次，計算SD、CV值，可接受范圍：Tea/4為通過。1.2日間精密度，每日檢測同一份標本5次，非一日完成四次檢測，共20次，計算SD、CV，可接受范圍Tea/3為通過。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine準確度驗證定義：指測量結(jié)果與被測量值的接近程度。方法：①參考方法比較

②應(yīng)用參考物質(zhì)

③回收實驗。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine準確度驗證2.1參考方法比較取材：20個結(jié)果分布于可報告范圍內(nèi)的標本，使用參考方法與系統(tǒng)使用方法進行檢測，計算相對偏倚，符合廠家說明。2.2應(yīng)用參考物質(zhì)：參考物質(zhì)：質(zhì)控品、標準品（非系統(tǒng)使用批）、已通過能力驗證的質(zhì)控標準物質(zhì)（室間質(zhì)評品）。

可接受范圍：偏倚值在參考物質(zhì)允許的范圍為通過。2.3回收實驗：配制已知濃度的樣品，比較結(jié)果與預(yù)期值，可接受范圍90-110%。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine可報告范圍

可報告范圍等同于測量范圍，部分系統(tǒng)與線性范圍一致。測量范圍：測量誤差處于允許的極限（變異系數(shù)不大于10%）測量分布于高、低值界限內(nèi)的范圍?？蓤蟾娣秶簷z測系統(tǒng)對病人結(jié)果的檢測范圍。線性范圍：實驗系統(tǒng)的最終分析結(jié)果為可接受的線性的濃度范圍，此時非線性誤差應(yīng)低于允許誤差。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine線性范圍驗證驗證前的準備：

操作人員熟練操作系統(tǒng)，能對標本進行正確處理；儀器狀態(tài)：性能指標與標稱值相符，有較好的精密度不存在明顯攜帶污染率；

同批號合格試劑；

標本，無明顯干擾檢測結(jié)果的因素；

標準品，配套或經(jīng)驗證可用的；

標本數(shù)量，如為新建需9-11個濃度，如為驗證或評價，只需4-6個樣本。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine驗證方法：

標本制備：濃度范圍，預(yù)期測定值范圍內(nèi)并包括與臨床有關(guān)的重要評價濃度。

通常取最大濃度與最小濃度標本按比例配比法制備。樣品號編號1（ml）編號2（ml）編號3（ml）編號4（ml）編號5（ml）低濃度血清5.003.752.501.250.00高濃度血清0.001.252.503.755.00線性范圍驗證DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine線性范圍驗證

測量：每個樣本重復(fù)檢測3-4次，隨機檢測，雙盲測定，最好一天內(nèi)完成。樣品號第一次第二次第三次第四次均值12345DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine線性范圍驗證剔除離群值

方法：采用Crubbs法，單個離群值不需重測，多個值或數(shù)據(jù)過于分散應(yīng)查找原因，糾正后重測。（剔除水平的α*值應(yīng)不超過檢出水平的α值，除非另有約定，α*值應(yīng)為0.01）。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine線性范圍驗證數(shù)據(jù)處理

方法：采用SPSS或SAS。回歸分析：回歸方程的線性檢驗價數(shù)多項式Rdf一階Y=b0+b1X2二階Y=b0+b1X+b2X23三階Y=b0+b1X+b2X2+b3X34數(shù)學(xué)模型：一階、二階、三階方程如擬合最優(yōu)方程為多階，則驗證能否采用一階式方程，需采用t檢驗，計算t值，t=bi/Sei;計算n值，n=LxR-Rdf，雙邊檢驗，a=0.05,如b3、b2經(jīng)檢驗P>0.05無顯著性差異則可用一階方程，如P<0.05為有顯著性差異，則進行下一步檢驗，即“非線性程度判斷”—臨床標準的線性與非線性檢驗。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine線性范圍驗證“非線性程度判斷”—臨床標準的線性與非線性檢驗。計算ADL值，查ADL表，擬合方程為多階性，否則為不可接受的非線性。數(shù)據(jù)精密度檢驗DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine參考區(qū)間參考區(qū)間1驗證取20份標本，檢測如有95%結(jié)果在區(qū)間內(nèi)為合格，如未達到需擴大標本量60（大樣本驗證）。2參考區(qū)間的制定2.1個體選擇，考慮因素：飲酒、獻血、血壓、疾病、妊娠與哺乳、藥物、肥胖、吸毒、特殊職業(yè)、環(huán)境、飲食、近期有無手術(shù)、吸煙、遺傳因素、輸血史、濫用維生素、運動等。2.2分組：年齡、性別、血型、種族、晝夜節(jié)律、取樣時的狀態(tài)及時間、月經(jīng)周期、妊娠、運動、飲食、吸煙、職業(yè)、其它。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine參考區(qū)間

主體準備樣本采集樣本處理飲食進食與禁食藥物禁忌藥物攝取生物節(jié)律身體活動采集前休息壓力與情緒采集環(huán)境時間身體姿勢標本類型采集地點采集準備血流儀器和技術(shù)運送方式標本狀態(tài)分離儲存分析前準備試劑檢測系統(tǒng)DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine參考區(qū)間系統(tǒng)要求：質(zhì)評、質(zhì)控、精密度與準確度驗證、溯源性證明離群值剔除：D/R大于等于R/3。最小標本量120例，如需分組，每組120例。（90%置信區(qū)間）198例為99%置信區(qū)間。參考區(qū)間確定：正態(tài)分布：均值加減1.96S（95%數(shù)據(jù)分布）、均值加減2.58S（99%分布范圍）非正態(tài)分布：取P2，S到P98，S分組：如S2>1.5S1或S2/S2-S1<3或Z>Z*需分組。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine自建系統(tǒng)性能驗證定義：實驗室根據(jù)自已意愿選定儀器、試劑與操作程序等組成的檢測系統(tǒng)。驗證項目：分析靈敏度、準確度、精密度、可報告范圍、分析特異性（干擾）、校準與質(zhì)控方法。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine靈敏度驗證分析靈敏度包括：最低檢測限LLD、生物檢測限BLD、功能靈敏度FS功能靈敏度定義為：以天間重復(fù)CV為20%時對應(yīng)檢測限樣品具有的平均濃度。標本準備：用稀釋液作空白，將標準品圍繞最低檢測限制成濃度梯度制備液，分別檢測10次，空白日內(nèi)10次X均值SD制備液1日間10次X均值SDCV值制備液2X均值SDCV值制備液3X均值SD如：CV值=20%FSDepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine攜帶污染率取高低值標本各一份依次測高值3次(i1，i2，i3)、低值3次(j1，j2，j3)，計算各自的攜帶污染率:攜帶污染率(%)=(j1-j3)/(i3-j3)×100%。

特異性實驗將可疑的干擾的物質(zhì)加入到檢測標本（濃度），以有無偏倚為檢驗標準，如有干擾，確度干擾物濃度范圍。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine第二部分

臨床血液學(xué)分析質(zhì)量要求王全哲課件編號:JYK-K-03-012014年DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine質(zhì)量管理血液分析儀

儀器本底：檢測項目WBCRBCHbPlt檢測要求≤0.5x109/l≤0.05x1012/l≤2.0g/l≤10x109/l驗證方法：用稀釋液作為樣本連續(xù)檢測3次，最大值應(yīng)在此范圍內(nèi)。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine質(zhì)量管理血液分析儀

攜帶污染率驗證方法：取高低濃度樣本，連續(xù)進行檢測，先檢測高濃度樣本3次連，再檢測低濃度樣品3次。檢測項目WBCRBCHbPlt檢測要求≤3.0%≤2.0%≤2.0%≤4.0%檢測項目結(jié)果1結(jié)果2結(jié)果3高值H1H2H3低值L1L2L3DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine質(zhì)量管理樣本濃度要求檢測項目WBCRBCHbPlt高值>9.0x10*9/L>6.2x10*12/L>220g/L>900x10*9低值<3<1.5<50<30DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine質(zhì)量管理批內(nèi)精密度要求。取合格標本一份，重復(fù)檢測11次，取后10次檢測值，計算CV。檢測項目測量范圍變異系數(shù)WBC4-1010*9/L≤4%RBC3.5-5.510*12/L≤2%Hb110-160g/L≤1.5%Hct35-55%≤3%PLT100-30010*9/L≤5%MCV80-100fl≤2%MCH27-34pg≤2%MCHC320-360g/L≤2%批內(nèi)精密度日間精密度要求。室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)，剔除失控數(shù)據(jù)，統(tǒng)計CV。檢測項目變異系數(shù)WBC≤6%RBC≤2.5%Hb≤2%Hct≤4%PLT≤8%MCV≤2.5%MCH≤2.5%MCHC≤3%DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine質(zhì)量管理不同吸樣模式結(jié)果可比性；取五份臨床標本，不同模式檢沒測2次，計算結(jié)果均值的相對差異。檢測項目相對差異WBC≤5%RBC≤2%Hb≤2%Hct≤3%PLT≤7%MCV≤3%MCHMCHCDepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine質(zhì)量管理血液分析儀

攜帶污染率驗證方法：取高低濃度樣本，連續(xù)進行檢測，先檢測高濃度樣本3次連，再檢測低濃度樣品3次。檢測項目WBCRBCHbPlt檢測要求≤3.0%≤2.0%≤2.0%≤4.0%檢測項目結(jié)果1結(jié)果2結(jié)果3高值H1H2H3低值L1L2L3DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine第一部分

性能驗證

王全哲課件編號:JYK-K-03-012014年DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine性能驗證何時進行性能驗證性能驗證項目如何作性能驗證DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine何時做性能驗證CLIA`88法案：改進或更換系統(tǒng)時、改變試劑時、增加新項目時。ISO15189：進行能力驗證時，對設(shè)備、系統(tǒng)與方法進行性能驗證?！杜R床實驗室管理辦法》臨床實驗室應(yīng)對檢測系統(tǒng)性能進行驗證。儀器進行系統(tǒng)性維修后。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine性能驗證包括哪些項目1

精密度2準確度3可報告范圍4參考區(qū)間5靈敏度6特異性DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine如何做性能驗證1

配套系統(tǒng)

2自建系統(tǒng)DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine配套系統(tǒng)1

精密度2準確度3可報告范圍4參考區(qū)間DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine自建檢測系統(tǒng)1精密度2準確度3可報告范圍4參考區(qū)間5靈敏度6特異性DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine精密度驗證定義：相同的檢測條件下，對某一標本進行重復(fù)檢測，所得測量值的離散程度。要求：包括批內(nèi)與日間精密度實驗DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine精密度驗證具體方法1.1批內(nèi)精密度：取同一份標本插入病人標本中，重復(fù)檢測20次，計算SD、CV值，可接受范圍：Tea/4為通過。1.2日間精密度，每日檢測同一份標本5次，非一日完成四次檢測，共20次，計算SD、CV，可接受范圍Tea/3為通過。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine準確度驗證定義：指測量結(jié)果與被測量值的接近程度。方法：①參考方法比較

②應(yīng)用參考物質(zhì)

③回收實驗。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine準確度驗證2.1參考方法比較取材：20個結(jié)果分布于可報告范圍內(nèi)的標本，使用參考方法與系統(tǒng)使用方法進行檢測，計算相對偏倚，符合廠家說明。2.2應(yīng)用參考物質(zhì)：參考物質(zhì)：質(zhì)控品、標準品（非系統(tǒng)使用批）、已通過能力驗證的質(zhì)控標準物質(zhì)（室間質(zhì)評品）。

可接受范圍：偏倚值在參考物質(zhì)允許的范圍為通過。2.3回收實驗：配制已知濃度的樣品，比較結(jié)果與預(yù)期值，可接受范圍90-110%。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine可報告范圍

可報告范圍等同于測量范圍，部分系統(tǒng)與線性范圍一致。測量范圍：測量誤差處于允許的極限（變異系數(shù)不大于10%）測量分布于高、低值界限內(nèi)的范圍?？蓤蟾娣秶簷z測系統(tǒng)對病人結(jié)果的檢測范圍。線性范圍：實驗系統(tǒng)的最終分析結(jié)果為可接受的線性的濃度范圍，此時非線性誤差應(yīng)低于允許誤差。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine線性范圍驗證驗證前的準備：

操作人員熟練操作系統(tǒng)，能對標本進行正確處理；儀器狀態(tài)：性能指標與標稱值相符，有較好的精密度不存在明顯攜帶污染率；

同批號合格試劑；

標本，無明顯干擾檢測結(jié)果的因素；

標準品，配套或經(jīng)驗證可用的；

標本數(shù)量，如為新建需9-11個濃度，如為驗證或評價，只需4-6個樣本。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine驗證方法：

標本制備：濃度范圍，預(yù)期測定值范圍內(nèi)并包括與臨床有關(guān)的重要評價濃度。

通常取最大濃度與最小濃度標本按比例配比法制備。樣品號編號1（ml）編號2（ml）編號3（ml）編號4（ml）編號5（ml）低濃度血清5.003.752.501.250.00高濃度血清0.001.252.503.755.00線性范圍驗證DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine線性范圍驗證

測量：每個樣本重復(fù)檢測3-4次，隨機檢測，雙盲測定，最好一天內(nèi)完成。樣品號第一次第二次第三次第四次均值12345DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine線性范圍驗證剔除離群值

方法：采用Crubbs法，單個離群值不需重測，多個值或數(shù)據(jù)過于分散應(yīng)查找原因，糾正后重測。（剔除水平的α*值應(yīng)不超過檢出水平的α值，除非另有約定，α*值應(yīng)為0.01）。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine線性范圍驗證數(shù)據(jù)處理

方法：采用SPSS或SAS?；貧w分析：回歸方程的線性檢驗價數(shù)多項式Rdf一階Y=b0+b1X2二階Y=b0+b1X+b2X23三階Y=b0+b1X+b2X2+b3X34數(shù)學(xué)模型：一階、二階、三階方程如擬合最優(yōu)方程為多階，則驗證能否采用一階式方程，需采用t檢驗，計算t值，t=bi/Sei;計算n值，n=LxR-Rdf，雙邊檢驗，a=0.05,如b3、b2經(jīng)檢驗P>0.05無顯著性差異則可用一階方程，如P<0.05為有顯著性差異，則進行下一步檢驗，即“非線性程度判斷”—臨床標準的線性與非線性檢驗。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine線性范圍驗證“非線性程度判斷”—臨床標準的線性與非線性檢驗。計算ADL值，查ADL表，擬合方程為多階性，否則為不可接受的非線性。數(shù)據(jù)精密度檢驗DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine參考區(qū)間參考區(qū)間1驗證取20份標本，檢測如有95%結(jié)果在區(qū)間內(nèi)為合格，如未達到需擴大標本量60（大樣本驗證）。2參考區(qū)間的制定2.1個體選擇，考慮因素：飲酒、獻血、血壓、疾病、妊娠與哺乳、藥物、肥胖、吸毒、特殊職業(yè)、環(huán)境、飲食、近期有無手術(shù)、吸煙、遺傳因素、輸血史、濫用維生素、運動等。2.2分組：年齡、性別、血型、種族、晝夜節(jié)律、取樣時的狀態(tài)及時間、月經(jīng)周期、妊娠、運動、飲食、吸煙、職業(yè)、其它。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine參考區(qū)間

主體準備樣本采集樣本處理飲食進食與禁食藥物禁忌藥物攝取生物節(jié)律身體活動采集前休息壓力與情緒采集環(huán)境時間身體姿勢標本類型采集地點采集準備血流儀器和技術(shù)運送方式標本狀態(tài)分離儲存分析前準備試劑檢測系統(tǒng)DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine參考區(qū)間系統(tǒng)要求：質(zhì)評、質(zhì)控、精密度與準確度驗證、溯源性證明離群值剔除：D/R大于等于R/3。最小標本量120例，如需分組，每組120例。（90%置信區(qū)間）198例為99%置信區(qū)間。參考區(qū)間確定：正態(tài)分布：均值加減1.96S（95%數(shù)據(jù)分布）、均值加減2.58S（99%分布范圍）非正態(tài)分布：取P2，S到P98，S分組：如S2>1.5S1或S2/S2-S1<3或Z>Z*需分組。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine自建系統(tǒng)性能驗證定義：實驗室根據(jù)自已意愿選定儀器、試劑與操作程序等組成的檢測系統(tǒng)。驗證項目：分析靈敏度、準確度、精密度、可報告范圍、分析特異性（干擾）、校準與質(zhì)控方法。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine靈敏度驗證分析靈敏度包括：最低檢測限LLD、生物檢測限BLD、功能靈敏度FS功能靈敏度定義為：以天間重復(fù)CV為20%時對應(yīng)檢測限樣品具有的平均濃度。標本準備：用稀釋液作空白，將標準品圍繞最低檢測限制成濃度梯度制備液，分別檢測10次，空白日內(nèi)10次X均值SD制備液1日間10次X均值SDCV值制備液2X均值SDCV值制備液3X均值SD如：CV值=20%FSDepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine攜帶污染率取高低值標本各一份依次測高值3次(i1，i2，i3)、低值3次(j1，j2，j3)，計算各自的攜帶污染率:攜帶污染率(%)=(j1-j3)/(i3-j3)×100%。

特異性實驗將可疑的干擾的物質(zhì)加入到檢測標本（濃度），以有無偏倚為檢驗標準，如有干擾，確度干擾物濃度范圍。DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine第二部分

臨床血液學(xué)分析質(zhì)量要求王全哲課件編號:JYK-K-03-012014年DepartmentofLaboratoryMedicDepartmentofLaboratoryMedicine質(zhì)量管理血液分析儀

儀器本底：檢測項目WBCRBCHbPlt檢測要求≤0.5x109/l≤0.05x1012/l≤2.0g/l≤10x109/l驗證方法：用稀釋液作為樣本連續(xù)檢測3次，最大值應(yīng)在此范圍內(nèi)。DepartmentofLaborato