FAA固定液

70%酒精↓80%酒精

85%酒精95%酒精100%酒精擬南芥石蠟切片方法總結(jié)花一、取材橫切：建議取完整的花簇進(jìn)行處理，包埋及切片時(shí)都保持完整的花簇形態(tài)，不要讓單個(gè)的花朵掉離花簇?？奢^好的保持花簇上每朵花的完整性，可以看到連續(xù)的花期?？v切：前期都取完整花簇進(jìn)行處理，浸蠟、包埋、切片時(shí)則分離成單朵處理，最小的幾朵花可成簇處理。二、固定首先，將材料從植株上剪下，泡入FAA或者卡諾氏固定液中。取一針筒注射器，在針筒中加入3-4ml固定液（與泡材料的固定液同），將材料夾入，然后用針筒注射器進(jìn)行真空抽氣操作（左手握住針筒，右手推動(dòng)推進(jìn)器，推動(dòng)液體排出針筒內(nèi)空氣，左手大拇指堵住針筒上插注射器針頭的插口,右手向外拉推進(jìn)器，如此反復(fù)），盡量抽盡材料內(nèi)空氣，然后將材料放入同一固定液保存。三、脫水70%酒精----30分鐘↓80%酒精----30分鐘↓85%酒精----20分鐘↓95%酒精----20分鐘↓100%酒精----5分鐘100%酒精+少量龍膽紫固體(GUS材料不加)-5分鐘四、透明及滲蠟（脫酒精，緊接著上部過(guò)程）加入1/3體積的純二甲苯混勻-5分鐘↓加入1/3體積的純二甲苯混勻-5分鐘↓加入1/3體積的純二甲苯混勻-5分鐘↓純二甲苯20分鐘↓純二甲苯25分鐘↓換新的純二甲苯，削蠟塊放入其中，室溫下過(guò)夜（蠟塊最好不要壓到材料）五、升溫浸蠟

將裝著二甲苯、蠟塊和材料的試管放到恒溫箱中，將溫度調(diào)到37度，等溫度升到37度后繼續(xù)上調(diào)升溫。到37度→到42度→到47度→到50度→到52度→到54度→到56度→到58度→到60度→到61度→到62度→到63度（不要超過(guò)63度）各個(gè)溫度等級(jí)最好稍做停留，如果有事的話(huà)可以適當(dāng)延長(zhǎng)停留時(shí)間，但高溫時(shí)不宜停留超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)操作太久的時(shí)間。升到63度后，保持20-30分鐘，繼續(xù)下步操作,將材料從試管中夾出（所用純石蠟與滲蠟時(shí)所用蠟塊石蠟同）：純石蠟----1小時(shí)↓純石蠟----1小時(shí)↓最好是0.5-1cm的方體，然后將其粘到小木塊上，以備切片。粘好后，確保切面是正四方形，如不是繼續(xù)修塊。八、切片

將粘上材料蠟塊的小木塊固定到切片機(jī)上，盡量使切面與水平面垂直。切面上的兩條與水平線(xiàn)平行的邊也與刀刃線(xiàn)平行。切片時(shí)應(yīng)該保證刀刃的鋒利，切出來(lái)的蠟帶應(yīng)該平整且連續(xù)。把處理好的載有蠟帶的玻片從恒溫箱取出，將其泡入純二甲苯中：純二甲苯----30分鐘↓純二甲苯----30分鐘↓純二甲苯----30分鐘取出等二甲苯揮發(fā)干凈，即可進(jìn)行下一步操作.注意在整個(gè)過(guò)程中要保持玻片有材料的一面不碰到東西，以防材料脫落。葉取材：取較為成熟的葉，幼小的嫩葉不適合于做石蠟切片。脫水：70%酒精----30分鐘↓70%酒精----30分鐘↓80%酒精----30分鐘↓80%酒精----30分鐘85%酒精----15分鐘↓85%酒精----15分鐘↓95%酒精----15分鐘↓95%酒精----15分鐘↓100%酒精----10分鐘↓100%酒精+少量龍膽紫(GUS材料不加)-10分鐘浸蠟：純石蠟----2小時(shí)↓純石蠟----2小時(shí)↓純石蠟----2小時(shí)莖脫水：70%酒精----2小時(shí)↓70%酒精----2小時(shí)↓80%酒精----2小時(shí)↓80%酒精----2小時(shí)↓85%酒精----1小時(shí)↓85%酒精----1小時(shí)↓95%酒精----1小時(shí)↓95%酒精----1小時(shí)↓100%酒精----30分鐘↓根取材：建議取完整的根系進(jìn)行處理，包埋及切片時(shí)都保持完整的根系形態(tài)。完整的根系在切片時(shí)將得到橫切，縱切以及各個(gè)角度的切片結(jié)果。脫水：70%酒精----過(guò)夜↓8