1鑒別檢查含量測(cè)定八大類藥物的分析

——按結(jié)構(gòu)分類

李煥丹

<結(jié)構(gòu)→性質(zhì)→分析方法

2第一章

羧酸及其酯類藥物的分析第一節(jié)芳酸類

苯環(huán)+羧基第二節(jié)脂肪酸類

脂肪鏈+羧基羧基可游離、成鹽或成酯?②①

3第一節(jié)芳酸及其酯類藥物的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)分類：

水楊酸類

苯甲酸類

4（1）水楊酸類結(jié)構(gòu)特征：

羧基直接與苯環(huán)相連，且鄰位有酚羥基1.基本結(jié)構(gòu)與典型藥物

5游離、成鹽OR成酯？

7游離、成鹽OR成酯？

82.性質(zhì)大部分為具有一定熔點(diǎn)的固體（1）溶解性大多微溶或（幾乎）不溶于水，鈉鹽易溶于水（2）酸性（3）水解性（4）基團(tuán)特性和分解特性（5）光譜特征

9（2）酸性具游離羧基，其pKa在3～6之間，屬中等強(qiáng)度的酸或弱酸（鹽酸＞芳酸＞碳酸＞酚）水楊酸>阿司匹林>苯甲酸

pKa2.953.494.26>HAc>H2CO3>苯酚pKa4.766.389.95

10（3）水解性由于酯鍵酸性條件下，不完全水解堿性條件下，完全水解應(yīng)用：

A.水解產(chǎn)物的性質(zhì)——鑒別；

B.水解產(chǎn)生雜質(zhì)

C.水解消耗定量氫氧化鈉的性質(zhì)

——水解后剩余滴定法測(cè)定含量

11（4）基團(tuán)或元素特性A.酚羥基：與Fe3+顯色——鑒別B.（潛在）芳伯氨基：重氮化-偶合反應(yīng)C.含硫元素：熱分解后產(chǎn)生的硫化氫，與醋酸鉛生成黑色硫化鉛——鑒別

12（5）光譜特征共軛體系和特征官能團(tuán)應(yīng)用：

1.紫外特征光譜: 鑒別、含量均勻度檢查、溶出度/釋放度測(cè)定

2.紅外特征光譜: 鑒別

13+醋酸(臭)水楊酸↓白H2SO4△二、鑒別試驗(yàn)1.水解反應(yīng)

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例阿司匹林Ch.P.（2010）【鑒別】（2）取本品約0.5g，加碳酸鈉試液10ml，煮沸2分鐘后，放冷，加過量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并發(fā)生醋酸的臭氣。

152.與三氯化鐵反應(yīng)（1）水楊酸類的反應(yīng)

水楊酸的水溶液加三氯化鐵試液，即生成紫堇色配位化合物，反應(yīng)宜在中性或弱酸性（pH值4~6）條件下進(jìn)行。

16FeCl3pH4~6紫堇色水楊酸

17（1）直接反應(yīng)：

水楊酸（2）間接反應(yīng)：

對(duì)氨基水楊酸鈉、阿司匹林、雙水楊酯、貝諾酯

18水楊酸

Ch.P.（2010）【鑒別】（1）取本品的水溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫堇色。對(duì)氨基水楊酸鈉

Ch.P.（2010）【鑒別】（1）取本品約10mg，加水10ml溶解后，加稀鹽酸2滴使成酸性，加三氯化鐵試液1滴，應(yīng)顯紫紅色；阿司匹林Ch.P.（2010）【鑒別】（1）取本品約0.1g，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫堇色。

19

20

21丙磺舒↓米黃pH7OH-或中性↓赭色→苯甲酸（2）苯甲酸類NaOH

22例苯甲酸Ch.P.（2010）【鑒別】（1）取本品約0.2g，加0.4%氫氧化鈉溶液15ml，振搖，濾過，濾液中加三氯化鐵試液2滴，即生成赭色沉淀。例丙磺舒Ch.P.（2010）【鑒別】（1）取本品約5mg，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液0.2ml，用水稀釋至2ml（pH值約5.0~6.0），加三氯化鐵試液1滴，即生成米黃色沉淀。

233.重氮化-偶合反應(yīng)(芳香第一胺反應(yīng))原理凡具有芳伯氨基或潛在芳伯氨基藥物，在酸性溶液中與亞硝酸鈉生成重氮鹽，再在堿性下可與β-萘酚生成偶氮染料（紅~橙黃色）直接：對(duì)氨基水楊酸鈉間接：貝諾酯

25貝諾酯的鑒別

264.分解產(chǎn)物的反應(yīng)顯硫酸鹽的反應(yīng)華物

27（1）

λmax與λmin

（2）

λmax與A

（3）λmax與A1/A2

6.IR

本類的原料藥大多采用5.UV法

28三、特殊雜質(zhì)檢查藥物名稱雜質(zhì)結(jié)構(gòu)式雜質(zhì)名稱阿司匹林游離水楊酸對(duì)氨基水楊酸鈉間氨基酚

291.阿司匹林中特殊雜質(zhì)的檢查（1）合成工藝CO2H+乙?；?(CH3CO)2O+CH3COOH

30（2）檢查項(xiàng)目游離水楊酸溶液的澄清度有關(guān)物質(zhì)

31

限制阿司匹林原料中無羧基的特殊雜質(zhì)的量（酚、苯酚、醋酸苯酯、水楊酸苯酯和乙酰水楊酸苯酯）。Ch.P.（2010）【檢查】溶液的澄清度

取本品0.50g，加溫?zé)嶂良s45℃的碳酸鈉試液10ml溶解后，溶液應(yīng)澄清。

1）溶液澄清度

32Ch.P.（2005）比色法2）游離水楊酸缺點(diǎn)：供試液制備過程中產(chǎn)生新的SA

阿司匹林

Fe3+水楊酸對(duì)照紫堇色Fe3+比色

33例阿司匹林Ch.P.（2005）【檢查】游離水楊酸取本品0.1g，加乙醇1ml溶解后，加冷水適量使成50ml，立即加新制的稀硫酸鐵銨溶液[……]1ml，搖勻；30秒鐘內(nèi)如顯色，與對(duì)照液（精密稱取水楊酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml，搖勻，再加水使成1000ml，精密量取1ml，加乙醇1ml、水48ml與上述新制的稀硫酸鐵銨溶液1ml，搖勻）比較，不得更深。（0.1%）。

34

Ch.P.（2010）取本品約0.1g，精密稱定，置10ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液適量，振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（臨用新制）；取水楊酸對(duì)照品約10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。照高效液相色譜法（附錄ⅤD）試驗(yàn)。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20∶5∶5∶70）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為303nm。理論板數(shù)按水楊酸峰計(jì)算不低于5000，阿司匹林峰與水楊酸峰的分離度應(yīng)符合要求。立即精密量取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中如有與水楊酸峰保留時(shí)間一致的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，不得過0.1%。

35Ch.P.（2010）HPLC法用1%冰醋酸甲醇溶液制備供試液分離模式?定量方法？

離子抑制色譜法外標(biāo)法

36限量

原料：0.1%阿司匹林片：0.3%阿司匹林腸溶片：1.5%阿司匹林腸溶膠囊：1.0%阿司匹林泡騰片：3.0%阿司匹林栓：3.0%

37HPLC法用于雜質(zhì)檢查(1)外標(biāo)法(2)加校正因子的主成分自身對(duì)照法(3)不加校正因子的主成分自身對(duì)照法(4)面積歸一化法P97

38主要檢查除“水楊酸”以外的水楊酸的衍生物，如水楊酸酐、乙酰水楊酸酐、水楊酰水楊酸和乙酰水楊酰水楊酸檢查方法：

HPLC的不加校正因子的主成份自身對(duì)照法。3）有關(guān)物質(zhì)

39取本品約0.1g，精密稱定，置10ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，為供試品溶液；精密量取1ml，置200ml量瓶中，稀釋至刻度，為對(duì)照溶液。分別進(jìn)樣10ul，記錄色譜圖，供試品溶液中如有雜質(zhì)峰，除水楊酸峰外，其他各雜質(zhì)峰面積的和不大于對(duì)照溶液主峰面積。

40

412.對(duì)氨基水楊酸鈉中間氨基酚等有關(guān)物質(zhì)的檢查雜質(zhì)來源：①未完原料

②脫羧生成(酸性、溫度）危害：能被繼續(xù)氧化生成有色的聯(lián)苯醌，影響外觀、有溶血作用。檢查：HPLC法

①間氨基酚：外標(biāo)法

②其他有關(guān)物質(zhì)：不加校正因子的主成分自身對(duì)照法

423.甲芬那酸中特殊雜質(zhì)的檢查Ch.P（2010）中要求檢查：銅鹽AAS有關(guān)物質(zhì)HPLC（2010版）2,3-二甲基苯胺GC（2010版）

43GC測(cè)定法(1)內(nèi)標(biāo)法(2)外標(biāo)法(3)面積歸一化法(4)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法√

44四、含量測(cè)定1.酸堿滴定法（中和法）（1）直接滴定法①原理（pKa3～6）反應(yīng)摩爾比1:1

45②方法阿司匹林Ch.P.（2010）取本品約0.4g，精密稱定，加中性乙醇（對(duì)酚酞指示液顯中性）20ml，溶解后，用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml氫氧化鈉液(0.1mol/L)相當(dāng)于18.02mg的C9H8O4。

46

注意在中性乙醇中滴定（利于供試品的溶解并能防止酯鍵的水解）振搖下快速滴定（防水解）本法只適于純度較高（即SA限量檢查合格）的原料藥的測(cè)定

47本法為直接滴定法，測(cè)定結(jié)果按下式計(jì)算：

計(jì)算方法特點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)：簡便、快速

缺點(diǎn)：酯鍵水解干擾

48計(jì)算題稱取阿司匹林供試品0.3955g，溶于中性乙醇，用酚酞為指示劑，以氫氧化鈉滴定液（0.1015mol/L）滴定到終點(diǎn)時(shí)，消耗氫氧化鈉滴定液（0.1015mol/L）21.56ml，每lml的氫氧化鈉滴定液（0.1mo1/L）相當(dāng)于18.02mg的C9H8O4。計(jì)算阿司匹林的百分含量。

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50酯類的一般含量測(cè)定方法阿司匹林USP：取本品約1.5g，精密稱定，置燒瓶中，加氫氧化鈉滴定液（0.5mo1/L）50.0m1，混合，緩緩煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mo1/L）滴定剩余的氫氧化鈉，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的氫氧化鈉滴定液（0.5mol/L）相當(dāng)于45.04mg的C9H8O4。（2）水解后剩余滴定法

51水解：回滴：反應(yīng)摩爾比1:2+

CH3COONa+

2NaOH→2NaOH（過量）＋H2SO4＝Na2SO4＋2H2O

52空白試驗(yàn)的作用防止氫氧化鈉受熱時(shí)吸收CO2生成碳酸鈉，降低酸回滴時(shí)的消耗量，使測(cè)定結(jié)果偏高

53方法特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：消除了酯鍵水解的干擾缺點(diǎn)：酸性雜質(zhì)干擾

54水楊酸二乙胺冰醋酸作溶劑高氯酸的冰醋酸溶液作滴定劑結(jié)晶紫作指示劑

（3）非水堿量法

552.紫外分光光度法（1）直接紫外分光光度法例丙磺舒片Ch.P.（2010）【含量測(cè)定】取本品（規(guī)格為0.25g/片）10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于丙磺舒60mg），置200ml量瓶中，加乙醇150ml與鹽酸溶液（9→100）4ml，置70℃水浴上加熱30分鐘，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置100ml量瓶中，加鹽酸溶液（9→100）2ml，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法（附錄ⅣA）在249nm的波長處測(cè)定吸光度，按C13H19NO4S的吸收系數(shù)（）為338計(jì)算，即得。10片重→平均片重取樣量W→V（ml）（溶解體積）↓

5ml→100ml（稀釋倍數(shù)n或D）

↑供試液濃度Cx

57UV法用于含量測(cè)定（1）吸收系數(shù)法

（2）對(duì)照法

（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線法（4）計(jì)算分光光度法（5）比色法P135

58片劑、膠囊劑、注射用無菌粉末：紫外分光光度法的吸收系數(shù)法

59片劑、膠囊劑、注射用無菌粉末：紫外分光光度法的對(duì)照品對(duì)照法計(jì)算題丙磺舒片的含量測(cè)定：取本品（規(guī)格為0.25g/片）10片，精密稱定，重量為2.738g，研細(xì)，精密稱取0.0667g，置200ml量瓶中，加乙醇150ml與鹽酸溶液(9→100)4ml，置70℃水浴上加熱30分鐘，放冷，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置100ml量瓶中，加鹽酸溶液(9→100)2ml,用乙醇稀釋至刻度，搖勻，在249nm的波長處測(cè)定吸收度為0.512，按C13H19NO4S的吸收系數(shù)（）為338計(jì)算，求算本品標(biāo)示量的百分含量。

62（2）柱分配色譜-紫外分光光度法USP阿司匹林膠囊和栓劑

固定相：NaHCO3

洗脫液：冰醋酸-三氯甲烷280nm測(cè)定，對(duì)照法定量

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成鈉鹽三氯甲烷洗脫中性、堿性雜質(zhì)用冰醋酸-三氯甲烷洗脫280nm處測(cè)定A阿司匹林游離、水楊酸酸性強(qiáng)于醋酸，被保留樣品碳酸氫鈉硅藻土

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3.HPLC分離模式：

離子對(duì)色譜法（對(duì)氨基水楊酸鈉）

離子抑制色譜法例：丙磺舒的含量測(cè)定

流動(dòng)相中進(jìn)入冰醋酸？定量方法？例：阿司匹林栓

Ch.P.（2010）注意：栓劑的前處理方法

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測(cè)定法取本品5粒，精密稱定，置小燒杯中，在40～50℃水浴上微溫熔融，在不斷攪拌下冷卻至室溫，精密稱取適量（約相當(dāng)于阿司匹林0.1g），置50ml量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液適量，在40～50℃水浴中充分振搖使阿司匹林溶解，放冷，用1%冰醋酸的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻1小時(shí)，取出，迅速濾過，取續(xù)濾液作為供試品貯備液。精密量取供試品貯備液5ml，置100ml量瓶中，用1%冰醋酸的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取10l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿司匹林對(duì)照品，精密稱定，加1%冰醋酸的甲醇溶液振搖使溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

66測(cè)定結(jié)果按下式計(jì)算：

67第二節(jié)脂肪酸及其酯的分析脂肪鏈+羧基（游離、成鹽OR成酯）一、結(jié)構(gòu)和性質(zhì)1.基本結(jié)構(gòu)與典型藥物（1）芳基烷酸類

芳基乙酸類芳基丙酸類

68鄰氨基苯乙酸類