1、關于真核生物轉(zhuǎn)錄特點與加工第一張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月轉(zhuǎn)錄因子與反式作用因子轉(zhuǎn)錄因子與反式作用因子: 調(diào)節(jié)基因表達的蛋白為轉(zhuǎn)錄因子；它們與特異的順式作用元件相互作用,并激活另一基因的轉(zhuǎn)錄第二張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月TATATF II DTF II ATF II BRNA-pol II/TF II FTF II EPIC12345轉(zhuǎn)錄起始復合物結合順序第三張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月轉(zhuǎn)錄后的加工原核RNA不需加工，邊轉(zhuǎn)錄邊翻譯真核RNA需要加工rRNAtRNAmRNA5加帽3加尾 剪接在轉(zhuǎn)錄過程中轉(zhuǎn)錄后進行第四張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022

2、年6月真核生物轉(zhuǎn)錄后的加工意義：轉(zhuǎn)錄生成的前體RNA,無生物學活性,需加工變?yōu)槌墒?、有活性的RNA 加工種類：剪切與剪接、末端添加核苷酸、修飾、RNA編輯第五張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月一、mRNA前體的加工 （一）生成特點： 原核 ：mRNA是多順反子(polycistronic),每分子RNA中含幾種蛋白質(zhì)信息，RNA壽命短，轉(zhuǎn)錄沒完時翻譯即開始 例:乳糖操縱子，含Z,Y,A三個基因,分別編碼半乳糖苷酶、透過酶及乙?；D(zhuǎn)移酶 第六張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月真核：單順反子,一個mRNA僅編碼一種蛋白質(zhì) 外顯子: 在真核生物基因中編碼蛋白質(zhì)的序列 內(nèi)含子:非編碼蛋

3、白的序列,因其插于外顯子之間又稱插入序列,居間序列 hnRNA: 為mRNA的前體,轉(zhuǎn)錄物中外顯子與內(nèi)含子間隔排列，需經(jīng)剪接加工后生成mRNA 第七張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（二） mRNA前體加工過程 真核： 5末端帽子 部位：核內(nèi) 3端多聚A尾 部位：核內(nèi),胞質(zhì)有酶也可進行 剪接作用 部位：胞核 甲基化(甲基化發(fā)生在剪接之前,在非編碼區(qū)分子中含1-2個m6A ) RNA編輯(某些mRNA的核苷酸序列,在生成轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物后還需插入、刪除或取代一些核苷酸殘基,方能生成具有正確翻譯功能的模板,遺傳信息在mRNA水平上的改變過程，稱為RNA編輯) 原核：多順反子mRNA在RNase作用

4、下轉(zhuǎn)變?yōu)閱为毜捻樂醋拥诎藦?，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月5加帽pi5pppG磷酸酶ppi5pGpppG5GpppG甲基化酶CH3mGpppGOHOH帽1帽0帽2NNNNOH2NCH3+OHHCH2HOPOPOPOPPPN1N2N3OOHOOHOOHOCH3OCH32OH79H甲基鳥苷5，5-三磷酸第九張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月mRNA 5末端帽子特征的生物學功能：I: 使mRNA免遭核酸酶的破壞，保持其結構的穩(wěn)定性；II: 利于蛋白質(zhì)起始因子的識別，從而促進翻譯的起始。第十張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月3加尾AAUAAAAAAAAAAAA.加尾AATAAA

5、GTGTGTG-AAUAAAGUGUGUGAAUAAAGUGUGUG酶切轉(zhuǎn)錄的終止加尾信號GC豐富序列polyA尾（約20200個A）AAAAAA第十一張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 高等真核生物（不包括酵母）的mRNA的共同特征：poly(A)添加位點上游11-30個核苷酸區(qū)域內(nèi)存在高度保守的AAUAAA序列。 絕大部分真核生物 mRNA 3端含poly(A) 尾巴poly(A)尾巴生物學功能： I: 保持mRNA的穩(wěn)定性，防止被降解； II: 與翻譯起始有關。第十二張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月應用一：Poly(A用來從總RNA中分離mRNA第十三張，PPT共二十五

6、頁，創(chuàng)作于2022年6月 可設計寡聚Oligo (dT)片段合成cDNA應用二：mRNA: 5 NNNN.NNNNNNAAAAA 3 TTTTT 5 cDNA: 3 NNNN.NNNNNNTTTTT 5第十四張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月斷裂基因：真核生物的基因由若干個編碼區(qū)和非編碼區(qū)互相隔開但又連續(xù)鑲嵌而成外顯子（exon): 基因中出現(xiàn)在mRNA的序列內(nèi)含子（intron）： 基因中不出現(xiàn)于mRNA而被剪接掉的序列核內(nèi)不均一RNA （hnRNA）：真核生物中編碼蛋白質(zhì)基因的初級轉(zhuǎn)錄本，包括5帽子、3poly(A)尾、外顯子、內(nèi)含子，經(jīng)剪接加工成為mRNA第十五張，PPT共二十五

7、頁，創(chuàng)作于2022年6月剪接剪接:在細胞核內(nèi), hnRNA剪切掉內(nèi)含子,將多個外顯子連接為成熟mRNA的過程為剪接 例:同一轉(zhuǎn)錄本, 在不同的組織, 因剪接差異產(chǎn)生各自不同的mRNA剪接的本質(zhì)：磷酸酯鍵的轉(zhuǎn)移剪接特點 ：剪接部位的結構為內(nèi)含子末端的特定序列，分布在內(nèi)含子的三個部位，5端剪切點為GU;3端剪切點為AG；靠近3端含A序列的分支點 第十六張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月mRNA的剪接： hnRNA被剪接體作用，剪除內(nèi)含子、連接外顯子，產(chǎn)生成熟的mRNA的過程第十七張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月外顯子內(nèi)含子DNAmRNA轉(zhuǎn)錄形成套索RNA，外顯子靠近剪接體去除套索

8、RNA，外顯子連接成熟mRNAmRNA的剪接第十八張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月套索結構外顯子外顯子內(nèi)含子內(nèi)含子5端斷開前一個外顯子的3末端攻擊下后個外顯子的5末端前后外顯子的連接第十九張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月二、tRNA前體的加工 1、切除多余的核苷酸：RNase P切除5端多余的核苷酸；RNase D切除3端多余的核苷酸2、剪切內(nèi)含子：核酸內(nèi)切酶切除內(nèi)含子,連接酶進行連接3、修飾與3末端加-CCA: 修飾包括甲基化,脫氨基,還原反應等，在核苷酸基轉(zhuǎn)移酶催化下完成3末端添加CCA 第二十張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月tRNA的加工內(nèi)含子編碼區(qū)內(nèi)切核酸

9、酶外切核酸酶PPP53-OH 3DNA內(nèi)含子初級轉(zhuǎn)錄物3端加CCA-OH3P 除去內(nèi)含子（內(nèi)切酶與連接酶）CCA-OH 3成熟 tRNA5CCA-OH內(nèi)含子5和3端的酶切3加上CCA去掉內(nèi)含子特異部位堿基的加工第二十一張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十二張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月三、rRNA前體的加工 （一）特點： 1、rRNA拷貝多,原核5-10個拷貝;真核:果蠅260個拷貝;Hela細胞1100個拷貝 2、rRNA基因之間以縱向串聯(lián)的方式重復排列第二十三張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）加工過程 1、剪切作用：需核酸酶參與2、甲基化修飾：修飾在堿基上 3、自我剪接：一種核酶的作用 5S的加工變化