1、酵母細胞中海藻糖的提取和鑒定實驗目的掌握從酵母中提取海藻糖的方法；掌握旋轉薄膜蒸發(fā)器的原理和操作；掌握薄層層析的原理和操作。實驗材料試劑：60%乙醇溶液；固體試劑：粉末狀活性炭；樹脂：717強堿性陰離子交換樹脂，732強酸性陽離子交換樹脂。儀器：旋轉薄膜蒸發(fā)儀海藻糖是由兩個葡萄糖分子通過半縮醛羥基縮合而成的非還原性雙糖，它的分子式為C12H22O112H2O，相對分子質量約為378。海藻糖易溶于水，熱乙醇，不溶于丙酮；海藻糖廣泛存在于自然界，尤其在酵母等真菌中含量較高；海藻糖對酸、熱較穩(wěn)定;海藻糖作為一種應激代謝物，能夠保護生物體抵抗惡劣環(huán)境，在體外也可以保護生物大分子。 背 景 知 識工作原

2、理：水泵或者油泵將系統(tǒng)的壓力降低，恒速旋轉的蒸發(fā)瓶在加熱槽（水?。┲泻銣丶訜?，瓶內(nèi)的液體隨著蒸發(fā)瓶的旋轉在瓶內(nèi)壁形成薄膜，不僅使液體受熱均勻，而且增大了蒸發(fā)面積，提高了蒸發(fā)效率。應用：適用于在常壓濃縮時未達溶劑的沸點，即已受熱分解、氧化或聚合的溶質。旋轉薄膜蒸發(fā)原理：利用各組分在某一種物質（如硅膠）中的吸附或者溶解性能（即分配）不同，使各組分的溶液在流經(jīng)該物質時進行反復的吸附或者分配作用，從而使各組分分離。應用：可快速分離和定性分析少量化合物。 硅膠GF254：硅膠適用于酸性和中性化合物的分離和分析。硅膠中添加了煅石膏（一種粘合劑）和熒光物質，可在254nm紫外光下觀察到綠色熒光。薄 層 層

3、析點樣基線 溶劑前沿L0L1RfL1/L0 比移值的計算實驗步驟熱乙醇溶液浸提海藻糖（2組合并起來浸提） 稱取 10g 活性干酵母，加入100mL 60%乙醇水溶液，80度，水浴45min；5000rpm離心15min，收集上清（吸取2mL上清于 dorf管中，備用）?；钚蕴棵撋s 按照1%（w/v）的比例在上清中加入活性炭，40度，攪拌10min，5000rpm離心15min，收集上清（吸取2mL上清于 dorf管中，備用）。濃縮去醇（幾組合并起來濃縮） 60度，減壓濃縮糖液并去除乙醇，濃縮到體積約為一半時，結束濃縮。陰陽離子交換樹脂除雜 量取約20mL717型濕樹脂，加入上清，攪拌約5m

4、in，傾出上清，再加入約20mL732型濕樹脂，約5min，傾出上清（吸取2mL上清于 dorf管中，備用）。沉淀海藻糖 測量糖液的體積，室溫下，加入2倍體積的丙酮，攪拌均勻后，室溫下沉淀海藻糖。 收集海藻糖 5000rpm離心15min，收集沉淀，沉淀用約3mL蒸餾水溶解。薄層層析 配制展開劑：正丁醇：乙醇：水=2：1：1（v：v：v），混合均勻后，倒入層析缸，讓蒸汽充滿層析缸。用毛細管點樣 樣品：提取的海藻糖溶液，1.5mg/mL標準海藻糖溶液， 2.0mg/mL標準海藻糖溶液待溶劑前沿至薄層板邊緣約1cm后，停止層析。取出薄層板，吹干，均勻地噴15%硫酸溶液，置烘箱80度顯色。用薄層色譜掃描儀在480nm下掃描薄層板，通過比較標準品和樣品的積分面積，計算海藻糖