1、1. 除起始和終止,原核和真核生物的轉(zhuǎn)錄還有什么不同.原核生物中的 RNA聚合酶全酶由五個(gè)亞基構(gòu)成，即 “23曠8亞基與轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的識(shí) 別有關(guān)，而在轉(zhuǎn)錄合成開(kāi)始后被釋放，余下的部分（ a 2 3）3被稱(chēng)為核心酶，與 RNA鏈 的聚合有關(guān)。真核生物中的RNA聚合酶分為三種：RNApol I存在于核仁，對(duì)a-鵝膏蕈 堿不敏感，用于合成 rRNA前體；RNA poll!存在于核基質(zhì)，對(duì) a-鵝膏蕈堿極敏感，用 于合成HnRNA ; RNA polin存在于核基質(zhì)，對(duì) 生鵝膏蕈堿敏感，用于合成 tRNA前體、 snRNA 及 5S rRNA 。2. 基因的轉(zhuǎn)錄受多個(gè)方面的調(diào)控,請(qǐng)列舉出三個(gè)方面基因轉(zhuǎn)錄

2、激活調(diào)節(jié)基本要素：順式作用元件：順式作用元件（cis-actingelement）又稱(chēng)分子內(nèi)作用元件，指存在于DNA分子上的一些與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控有關(guān)的特殊順序。反式作用因子：反式作用因子（trans-actingfactor）又稱(chēng)為分子間作用因子，指一些與基因表達(dá)調(diào)控有關(guān)的蛋白質(zhì)因子。反式作用因子與順式作用元件之間的共同作用，才能夠達(dá)到對(duì)特定基因進(jìn)行調(diào)控的目的。順式作用元件與反式作用因子之間的相互作用：大多數(shù)調(diào)節(jié)蛋白在與DNA 結(jié)合之前，需先通過(guò)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，形成二聚體或多聚體，然后再通過(guò)識(shí)別特定的順式作用元件，而與DNA 分子結(jié)合。這種結(jié)合通常是非共價(jià)鍵結(jié)合。3. 列舉幾個(gè)對(duì)重組克隆

3、體的篩選方法及其原理重組 DNA 的篩選和鑒定（篩）：對(duì)含有重組體的宿主細(xì)胞進(jìn)行篩選并作鑒定。根據(jù)重組體的表型進(jìn)行篩選：對(duì)于帶有抗藥基因的質(zhì)粒重組體，可采用插入滅活法進(jìn)行篩選。根據(jù)標(biāo)志互補(bǔ)進(jìn)行篩選：當(dāng)宿主細(xì)胞存在某種基因及其表達(dá)產(chǎn)物的缺陷時(shí)，可采用此方法篩選重組體。即在載體DNA 分子中插入相應(yīng)的缺陷基因，如宿主細(xì)胞重新獲得缺陷基因的表達(dá)產(chǎn)物，則說(shuō)明該細(xì)胞中帶有重組體。根據(jù) DNA限制酶譜進(jìn)行分析：經(jīng) 過(guò)粗篩后的含重組體的細(xì)菌，還需進(jìn)行限制酶譜分析進(jìn)一步鑒定。用核酸雜交法進(jìn)行 分析鑒定：采用與目的基因部分互補(bǔ)的DNA 片段作為探針，與含有重組體的細(xì)菌菌落進(jìn)行雜交，以確定重組體中帶目的基因。獲得

4、帶目的基因的細(xì)菌后，可將其不斷進(jìn)行增殖， 從而得到大量的目的基因片段用于分析研究。如在目的基因的上游帶有啟動(dòng)子順序，則目的基因還可轉(zhuǎn)錄表達(dá)合成蛋白質(zhì).4. 一已知序列基因, 大小8Kb， 設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)如何將其重組到表達(dá)載體并獲得目的蛋白重組DNA 技術(shù)又稱(chēng)為基因工程（genetic engineering）或分子克隆（molecular cloning）,是指采用人工方法將不同來(lái)源的DNA 進(jìn)行重組，并將重組后的DNA 引入宿主細(xì)胞中進(jìn)行增殖或表達(dá)的過(guò)程。1 載體和目的基因的分離（分）：對(duì)載體DNA 和目的基因分別進(jìn)行分離純化，得到其純品。載體：常用的載體 （vector）主要包括質(zhì)粒（plasm

5、id）、噬菌體（phage）和病毒（virus）三大類(lèi)。這些載體均需經(jīng)人工構(gòu)建，除去致病基因，并賦予一些新的功能，如有利于進(jìn)行篩選的標(biāo)志基因、單一的限制酶切點(diǎn)等。質(zhì)粒：是存在于天然細(xì)菌體內(nèi)的一種獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外的雙鏈環(huán)狀DNA ， 具有獨(dú)立復(fù)制的能力，通常帶有細(xì)菌的抗藥基因。噬菌體：可通過(guò)轉(zhuǎn)染方式將其DNA送入細(xì)菌體內(nèi)進(jìn)行增殖。常用的為人工構(gòu)建的入噬菌體載體，當(dāng)目的基因與噬菌體DNA 進(jìn)行重組時(shí)，可采用插入重組方式，也可采用置換重組方式。病毒：常用的為SV40,通過(guò)感染方式將其 DNA送入哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行增殖。目的基因：直接從染色體DNA 中分離： 僅適用于原核生物基因的分離。人工合成：

6、根據(jù)已知多肽鏈的氨基酸順序，利用遺傳密碼表推定其核甘酸順序再進(jìn)行人工合成。適應(yīng)于編碼小分子多肽的基因。從 mRNA 合成 cDNA： 采用一定的方法釣取特定基因的mRNA ， 再通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄酶催化合成其互補(bǔ)DNA（ cDNA） ， 除去 RNA 鏈后，再用DNA聚合酶合成其互補(bǔ) DNA鏈，從而得到雙鏈 DNA。從基因文庫(kù)中篩選：將某一種基因DNA 用適當(dāng)?shù)南拗泼盖袛嗪?，與載體 DNA 重組， 再全部轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，得到含全部基因組DNA 的種群，稱(chēng)為G 文庫(kù) （genomic DNA library） 。將某種細(xì)胞的全部mRNA 通過(guò)逆轉(zhuǎn)合成cDNA ，然后轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，得到含全部表達(dá)基因的種群，

7、稱(chēng)為C-文庫(kù)（cDNA library）。C-文庫(kù)具有組織細(xì)胞特異性。利用 PCR合成：如已知目的基 因兩端的序列，則可采用聚合酶鏈反應(yīng)（ polymerase chain reaction, PCR）技術(shù)，在體外 合成目的基因。2 載體和目的基因的切斷（切）： 通常采用限制性核酸內(nèi)切酶（restriction endonuclease），簡(jiǎn)稱(chēng)限制酶，分別對(duì)載體DNA 和目的基因進(jìn)行切斷，以便于重組。能夠識(shí)別特定的堿基順序并在特定的位點(diǎn)降解核酸的核酸內(nèi)切酶稱(chēng)為限制酶。限制酶所識(shí)別的順序往往為4-8 個(gè)堿基對(duì)，且有回文結(jié)構(gòu)。由限制酶切斷后的末端可形成平端、3'-突出粘性末端和5'

8、-突出粘性末端三種情況。形成粘性末端（cohesive end）者較有利于載體 DNA和目的基因的重組。3載體和目的基因的重組（接）：即將帶有切口的載體與所獲得的目的基因連接起來(lái)，得到重新組合后的 DNA分子。粘性末端連接法：載體與目的基因通過(guò)粘性末端進(jìn)行 互補(bǔ)粘合，再加入 DNA連接酶，即可封閉其缺口，得到重組體。人工接尾法：即同 聚物加尾連接法。在末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶的催化下，將脫氧核糖核苷酸添加于載體或目的基因的3'-端，如載體上添加一段polyG ，則可在目的基因上添加一段polyC ，通過(guò)堿基互補(bǔ)進(jìn)行粘合后，再由DNA連接酶連接。人工接頭連接法：將人工連接器（即一段含有多種限制酶

9、切點(diǎn)的DNA 片段）連接到載體和目的基因上，即有可能使用同一種限制酶對(duì)載體和目的基因進(jìn)行切斷，得到可以互補(bǔ)的粘性末端。4 重組 DNA 的轉(zhuǎn)化和擴(kuò)增（轉(zhuǎn)）： 將重組 DNA 導(dǎo)入宿主細(xì)胞進(jìn)行增殖或表達(dá)。重組質(zhì)?？赏ㄟ^(guò)轉(zhuǎn)化方式導(dǎo)入宿主細(xì)胞，入噬菌體作為載體的重組體，則需通過(guò)轉(zhuǎn)染方式將重組噬菌體DNA 導(dǎo)入大腸桿菌等宿主細(xì)胞。重組 DNA 導(dǎo)入宿主細(xì)胞后，即可在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)以擴(kuò)增宿主細(xì)胞。5 .重組DNA的篩選和鑒定（篩）：對(duì)含有重組體的宿主細(xì)胞進(jìn)行篩選并作鑒定。根據(jù)重組體的表型進(jìn)行篩選：對(duì)于帶有抗藥基因的質(zhì)粒重組體，可采用插入滅活法進(jìn)行篩選。根據(jù)標(biāo)志互補(bǔ)進(jìn)行篩選：當(dāng)宿主細(xì)胞存在某種基

10、因及其表達(dá)產(chǎn)物的缺陷時(shí)，可采用此方法篩選重組體。即在載體DNA 分子中插入相應(yīng)的缺陷基因，如宿主細(xì)胞重新獲得缺陷基因的表達(dá)產(chǎn)物，則說(shuō)明該細(xì)胞中帶有重組體。根據(jù) DNA 限制酶譜進(jìn)行分析：經(jīng)過(guò)粗篩后的含重組體的細(xì)菌，還需進(jìn)行限制酶譜分析進(jìn)一步鑒定。用核酸雜交法進(jìn)行分析鑒定：采用與目的基因部分互補(bǔ)的DNA 片段作為探針，與含有重組體的細(xì)菌菌落進(jìn)行雜交，以確定重組體中帶目的基因。獲得帶目的基因的細(xì)菌后，可將其不斷進(jìn)行增殖，從而得到大量的目的基因片段用于分析研究。如在目的基因的上游帶有啟動(dòng)子順序，則目的基因還可轉(zhuǎn)錄表達(dá)合成蛋白質(zhì)5. G 蛋白的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)G蛋白是一類(lèi)和GTP或GDP結(jié)合的，位于細(xì)胞膜胞液

11、面的外周蛋白，由三個(gè)亞基組成，它們是a亞基，3亞基，丫亞基。G蛋白有兩種構(gòu)象，一種以a 3刁1聚體存在并與 GDP結(jié)合， 為非活化型，另一種構(gòu)象是 a亞基與GTP結(jié)合并導(dǎo)致3匚聚體脫落，為活化型。G蛋白類(lèi)型及功能(1) GS蛋白激活腺甘酸環(huán)化酶(2) Gi蛋白抑制腺甘酸環(huán)化酶(3) GP蛋白激活磷脂酰肌醇特異的磷脂酶C(4) GO蛋白大腦中主要的 G蛋白，可能調(diào)節(jié)離子通道GT蛋白激活視覺(jué)G蛋白偶聯(lián)型受體是具有七個(gè)跨膜螺旋的受體，在結(jié)構(gòu)上面它包括七個(gè)跨膜區(qū)段，它們與配體結(jié)合后，通過(guò)與受體偶聯(lián)的 G蛋白的介導(dǎo)，使第二信使物質(zhì)增多或減少，轉(zhuǎn)而改變膜上 的離子通道，引起膜電位發(fā)生變化。其作用比離子通道

12、型受體緩慢，這類(lèi)受體與G蛋白之間的偶聯(lián)關(guān)系也頗為復(fù)雜；一種受體可以和多種 G蛋白偶聯(lián)，激活多種效應(yīng)系統(tǒng)；也可同 時(shí)和幾種受體偶聯(lián)或幾種G蛋白與一種效應(yīng)系統(tǒng)聯(lián)系而使來(lái)自不同受體的信息集中于同一效應(yīng)系統(tǒng)6. cAMP介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑cAMP 信號(hào)通路(cAMP signal pathway)又稱(chēng)PKA系統(tǒng)(protein kinase A system, PKA),是環(huán)核甘酸系統(tǒng)的一種。在這個(gè)系統(tǒng)中， 細(xì)胞外信號(hào)與相應(yīng)受體結(jié)合，通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)第二信使cAMP的水平而引起反 應(yīng)的信號(hào)通路。信 號(hào)分子通常是激素，對(duì)cAMP水平的調(diào)節(jié)，是靠腺甘酸環(huán)化酶進(jìn)行的。該通路是由質(zhì)膜上的五種3 / 21成分組成

13、：激活型受體（stimulate receptor, RS）,抑制型受體（inhibitereceptor,Ri）,激活型和抑制型調(diào)節(jié)G蛋白（Gs和Gi）和腺甘酸環(huán)化酶Co7. 谷氨酰胺在體內(nèi)的作用谷氨酰胺是五碳氨基酸，有兩個(gè)氨基，生理pH條件下，竣基帶負(fù)電荷，氨基帶正電荷，分子靜電荷為零，屬于中性氨基酸。生理作用：1,胃腸道官腔細(xì)胞的基本能量來(lái)源 。2,免疫系統(tǒng)的重要燃料，可增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的功能。3,參與合成谷胱甘肽（一種重要的抗氧化劑）。4,增長(zhǎng)肌肉，改善腦機(jī)能，維持腎臟，胰腺，膽囊和肝臟的正常功能。8. 乙酰輔酶A在脂類(lèi)代謝中的作用脂肪酸的3氧化：體內(nèi)大多數(shù)的組織細(xì)胞均可以此途徑氧化利用脂

14、肪酸。其代謝反應(yīng)過(guò) 程可分為三個(gè)階段：（1）活化：在線(xiàn)粒體外膜或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)行此反應(yīng)過(guò)程。由脂肪酸硫激酶（脂酰CoA合成酶）催化生成脂酰CoA。每活化一分子脂肪酸，需消耗兩分子ATP。（2）進(jìn)入：借助于兩種肉堿脂肪酰轉(zhuǎn)移酶（酶I和酶n）催化的移換反應(yīng)，脂酰CoA由肉堿（肉毒堿）攜帶進(jìn)入線(xiàn)粒體。肉堿脂肪酰轉(zhuǎn)移酶I是脂肪酸3氧化的關(guān)鍵酶。 伊氧化：由四個(gè)連續(xù)的酶促反應(yīng)組成：脫氫：脂肪酰 CoA在脂月酰CoA脫氫酶的催化 下，生成FADH2和“，-怖脂肪酰CoA。水化：在水化酶的催化下，生成 L- 3羥脂肪 酰CoAo再脫氫：在 L-伊羥脂肪酰CoA脫氫酶的催化下，生成伊酮脂肪酰CoA和NADH+H+

15、。硫解：在硫解酶的催化下，分解生成1分子乙酰CoA和1分子減少了兩個(gè)碳原子的脂肪酰 CoA。后者可繼續(xù)氧化分解，直至全部分解為乙酰CoA。3.三竣酸循環(huán)：生成的 乙酰CoA進(jìn)入三竣酸循環(huán)徹底氧化分解。酮體的生成：酮體主 要在肝臟的線(xiàn)粒體中生成，其合成原料為乙酰CoA,關(guān)鍵酶是HMG-CoA合成酶。其過(guò)程為：乙酰CoA乙酰乙酰CoA fHMG -CoA乙酰乙酸。生成的乙酰乙酸再通過(guò)加氫 反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)?，羥丁酸或經(jīng)自發(fā)脫竣生成丙酮。脂肪酸的合成：脂肪酸合成的原料是葡萄糖氧化分解后產(chǎn)生的乙酰CoA。膽固醇的合成：膽固醇合成部位主要是在肝臟和小腸的胞液和微粒體。其合成所需原料 為乙酰CoA。每合成一分子

16、的膽固醇需 18分子乙酰CoA ,54分子ATP和10分子NADPH。9. 饑餓時(shí)機(jī)體代謝變化糖代謝的變化：糖原合成減少，糖原分解作用增強(qiáng)，糖異生作用增強(qiáng)。 脂代謝的變化：脂肪分解增強(qiáng)，脂肪酸氧化增強(qiáng)，酮體化生成增多.10. 遺傳相對(duì)保守型及其變異性的意義及其機(jī)理遺傳相對(duì)保守性，其分子基礎(chǔ)在復(fù)制保真性上，包括已知三方面：依照堿基配對(duì)規(guī)律的半保留復(fù)制、DNA poil的校讀、修復(fù)機(jī)制和 DNA poim的堿基選擇作用。因此，遺傳信 息代代相傳，作為基因組（全套基因）傳代，是相對(duì)穩(wěn)定的，物種的變化是漫長(zhǎng)過(guò)程的積累， 如果不用人工手段去干預(yù)， 是不可能在幾個(gè)世代之內(nèi)就見(jiàn)得到的。生物的自然突變頻率很低

17、，例如在lo”水平?？紤]到生物基因組的龐大，自然突變是不容低估的。例如同一物種的個(gè)體 差別、器官組織的分化、從長(zhǎng)遠(yuǎn)意義上說(shuō)，生物進(jìn)化，都是突變?cè)斐傻?。突變都是DNA分子上可傳代的各種變化（點(diǎn)突變、缺失、插入、框移、重排 ）。其后果需具體情況具體分析， 不可能籠統(tǒng)地簡(jiǎn)化為有利或有害。當(dāng)然，更新的技術(shù)可用誘變或其他（例如基因工程）手段改造物種，建立有益于人類(lèi)的突變體。本人參加09年北醫(yī)生化考試，回憶一些題，希望對(duì)學(xué)弟學(xué)妹有用！一共十道大題每題 8-10分1 .分離mRNA的原理大多數(shù)真核細(xì)胞mRNA的3'端通常具有由20-30個(gè)腺甘酸組成的polyA尾巴，寡聚胸 腺?lài)娺迕撗鹾颂呛烁剩∣li

18、goT ）可以與之配對(duì)結(jié)合，這就是提取 mRNA最基本的原理。 具體到實(shí)驗(yàn)手段上，現(xiàn)在磁珠法、纖維素柱層析法都有在用。磁珠法一般是用生物素 標(biāo)記OligoT ,親和素標(biāo)記磁珠（生物素和 親和素間具有高度親和 力）。實(shí)驗(yàn)時(shí)生物素標(biāo)記的OligoT與mRNA的polyA高效雜交形成復(fù)合體，此復(fù)合體 又與標(biāo)有親和素的磁珠 結(jié)合。用磁性分離架就可以將這堆復(fù)合物分離出 來(lái)。最后用無(wú)RNase去離子水 將mRNA從復(fù)合物中洗 脫下來(lái)即可。寡聚dT纖維素柱層析法的大致流程： 總RNA流經(jīng)寡聚dT纖維素柱時(shí)，在高鹽緩沖液 中，帶polyA尾的mRNA被特異地結(jié)合在柱上。降低 鹽濃度，mRNA被洗脫。一般過(guò) 兩

19、次柱后，就可得到較高純度的mRNA o2 . Rb蛋白是怎樣調(diào)節(jié)細(xì)胞周期生長(zhǎng)Rb基因位于人類(lèi)染色體 13q14 ,其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 Rb蛋白是主要的轉(zhuǎn)錄信號(hào)連接物，在細(xì) 胞周期中起制動(dòng)器功能。cyclin D 是它能與轉(zhuǎn)錄因子 E2F結(jié)合并阻止相應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)，從而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)Rb調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的基礎(chǔ)。cyclin D1-CDK4 復(fù)合物可看做 G1期Rb蛋白激酶，它能結(jié)合Rb的N末端，磷酸化 Rb蛋白，使轉(zhuǎn)錄因子釋放，導(dǎo)致 G1 /S轉(zhuǎn)化。3 .原核生物與真核生物蛋白質(zhì)合成的異同點(diǎn)真核生物蛋白質(zhì)合成與轉(zhuǎn)錄不同時(shí)進(jìn)行，要轉(zhuǎn)錄完成后才開(kāi)始合成蛋白質(zhì)，而原核生物的蛋白質(zhì)合成往往和轉(zhuǎn)錄同時(shí)進(jìn)行，還沒(méi)有轉(zhuǎn)錄完

20、成蛋白質(zhì)就已經(jīng)開(kāi)始合成了。4 . DNA重組的過(guò)程及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用5.PCR反應(yīng)中的退火溫度是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵因素之一，退火溫度是以什么作為參考值？熔解溫度(Tm)是引物的一個(gè)重要參數(shù)。這是當(dāng)50 %的引物和互補(bǔ)序列表現(xiàn)為雙鏈DNA分子時(shí)的溫度.Tm對(duì)于設(shè)定PCR退火溫度是必需的。在理想狀態(tài)下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火，同時(shí)還要足夠高，以減少非特異性結(jié)合。 合理的退火溫度從 55 C到70 c o退火溫度一般設(shè)定比引物的Tm低5 Co計(jì)算退火溫度的方法：1 .退火溫度=4X (G + C) +2X (A + T) ( 58)只是粗算，有時(shí)不靈，但比較簡(jiǎn)便。2 .用prime

21、r5 (or oligo6 )計(jì)算，引物配對(duì)好后，primer5可以顯示Tm ,我認(rèn)為這個(gè)值就是退火溫度，我的經(jīng)驗(yàn)再加 2 or 3度最好。3 .合成引物的單子上也有個(gè)Tm,減去58也可，但有些公司提供的Tm就是方法1計(jì)算的。6 .癌基因只有在腫瘤中存在.”這句話(huà)對(duì)嗎？為什么？不對(duì)。 癌基因是指人類(lèi)或其他動(dòng)物細(xì)胞（以及致癌病毒）固有的一類(lèi)基因。又稱(chēng)轉(zhuǎn)化基因，它們一旦活化便能促使人或動(dòng)物的正常細(xì)胞發(fā)生癌變。癌基因是一類(lèi)會(huì)引起細(xì)胞癌變的基因。其實(shí)，原癌基因有其正常的生物學(xué)功能，主要是刺激細(xì)胞正常的生長(zhǎng)，以滿(mǎn)足細(xì)胞更新的要求。只是當(dāng)原癌基因發(fā)生突變后，才會(huì)在沒(méi)有接收到生長(zhǎng)信號(hào)的情況下仍然不斷地促使細(xì)

22、胞生長(zhǎng)或使細(xì)胞免于死亡，最后導(dǎo)致細(xì)胞癌變。7 .試述下列實(shí)驗(yàn)的原理和應(yīng)用1 ） Northern blot 2）western blot 3）RT-PCR8.發(fā)現(xiàn)A基因的蛋白是一種調(diào)控因子，可能對(duì)胰島b細(xì)胞的某些基因有調(diào)控作用，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)來(lái)證明 A 基因的功能。填空人有-個(gè)基因， 其中編碼基因占-%， 基因組中最多的為-RNA聚合酶2的CTD區(qū)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)-,功能-簡(jiǎn)答，1,已知一段插入的 DNA序列，要在前面加6個(gè)組氨酸，后面也加6個(gè)組氨酸以便于純化，設(shè)計(jì)一對(duì)引物，有18個(gè)核昔酸可與一直DNA配對(duì)2, 一個(gè)載體，上有Pst I, EcoRI兩個(gè)酶切位點(diǎn)，四環(huán)素抗性標(biāo)記， 和復(fù)制起點(diǎn)， 總長(zhǎng)為40

23、61bp ， 用 Pst I 切割載體和要插入的目的片段再連接，問(wèn) （ 1 ） 長(zhǎng)出的菌落都是重組子嗎？ 怎么鑒別？（2） 挑取三個(gè)重組質(zhì)粒， 分別用 EcoR I 切割 ，跑瓊脂糖電泳后得到如下條帶，已知載體上EcoR I與Pst I之間相距750bp,目的片段上有一 EcoRI 酶切位點(diǎn)， 距其中一端250bp ，L1 L2 L3 Marker- 5000- 300015001000500 問(wèn) ， 1， 2， 3 泳道的差別是怎么造成的？3， 酵母雙雜交原理及應(yīng)用4， 忘了三 ， 問(wèn)答1， 紫外線(xiàn)曬傷易引起皮膚癌， 為什么 ？ 體內(nèi)正常的修復(fù)方式？2,小RNA功能?舉例說(shuō)明3， 轉(zhuǎn)錄后加工

24、？ 有人認(rèn)為“轉(zhuǎn)錄后加工并不確切”， 你怎么認(rèn)為？4， 真和基因中含大量非編碼序列如轉(zhuǎn)座子， 內(nèi)含子 ， 這些非編碼序列真的是“垃圾 ”嗎 ？（2）幾年來(lái)小分子RNA 與基因表型遺傳學(xué)有很大突破， 有人認(rèn)為“ 中心法則”已經(jīng)過(guò)時(shí)應(yīng)該被取代，你有什么想法？2001 年北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)試卷1、 簡(jiǎn)述膜受體的代謝通路。2、 簡(jiǎn)述谷氨酸代謝可以轉(zhuǎn)變的物質(zhì)。3、 寫(xiě)出油酸在體內(nèi)氧化生成CO2 和水的過(guò)程。4、 簡(jiǎn)述癌基因的概念、 功能以及激活的機(jī)理。5、 請(qǐng)敘述操縱子的概念以及乳糖操縱子的調(diào)控原理。6、說(shuō)明ATP在糖、脂、核甘酸代謝的作用。7、 真核和原核生物合成體系有哪些區(qū)別。8、舉例說(shuō)明重組D

25、NA技術(shù)在上的應(yīng)用。2002 年北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)（ 博 ）1 .人類(lèi)基因組的概念， 內(nèi)容和意義。2 .transgene的概念，如何重組，定位，篩選，檢測(cè)？3 .圖示PKA.PKC.TPK信號(hào)傳導(dǎo)中的作用。4 .蛋白質(zhì)變性與DNA變性的區(qū)別與應(yīng)用5 .肝臟在生物代謝中的作用， 如果肝臟發(fā)生嚴(yán)重?fù)p傷， 可能會(huì)發(fā)生什么改變？6 .比較酶的別構(gòu)調(diào)節(jié)與化學(xué)修飾調(diào)節(jié)的異同， 及各自在代謝中的作用。7 .舉5 例輔酶 ， 他們的結(jié)構(gòu)， 組成及催化的反應(yīng)式。8 .有一種a-酮酸參與了糖，尿素，氨基酸，核甘酸代謝，是哪一種。寫(xiě)出它從 葡萄糖開(kāi)始的反應(yīng)過(guò)程， 參與尿素代謝的過(guò)程， 以及參與核苷酸代謝的過(guò)程

26、。2003 年北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)（ 博 ）1、 、 結(jié)合實(shí)例說(shuō)明“生物信息大分子”的概念 。 都包括哪些類(lèi)物質(zhì)分子。 簡(jiǎn)要說(shuō)明其執(zhí)行“信息功能 ”的要素 。2、 何謂 “基本轉(zhuǎn)錄因子 ”， 寫(xiě)出 6 個(gè)以上的名稱(chēng)。 根據(jù)你的理解， 判斷 “類(lèi)固醇激素受體屬于基本轉(zhuǎn)錄因子”是否正確， 為什么 ？ 請(qǐng)簡(jiǎn)要說(shuō)明類(lèi)固醇激素受體調(diào)節(jié)基因表達(dá)的機(jī)制。3、 解釋 “同工酶 ”概念 ， 簡(jiǎn)要說(shuō)明嚴(yán)格區(qū)分同工酶策略。 寫(xiě)出設(shè)計(jì)酶活性測(cè)定體系的注意事項(xiàng) 。4、 解釋 “維生素 ”概念 ， 丙酮酸脫氫酶系中包括那些維生素？ 各以何種形式參加酶系組成寫(xiě)出維生素D 在體內(nèi)主要代謝過(guò)程。5、 寫(xiě)出膽固醇合成的原料，

27、限速酶 ， 在血液內(nèi)主要運(yùn)輸形式， 以及 6 中以上在體內(nèi)重要轉(zhuǎn)化物的名稱(chēng)。6、 以填空形式考苯丙氨酸和落氨酸的分解代謝過(guò)程。7、 端粒 ， 端粒酶的概念， 其特殊的生物學(xué)功能。8、 肝臟生物轉(zhuǎn)化的概念， 特點(diǎn) ， 反應(yīng)類(lèi)型。 膽紅素在肝內(nèi)轉(zhuǎn)化后的產(chǎn)物， 以何種形式排出體外 。9、 血漿蛋白質(zhì)主要成分及生理功能。2004年北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)（ 博 ）論述題 （ 不全 ）（8 選 5）1、 果汁含檸檬酸豐富,問(wèn)體內(nèi)能轉(zhuǎn)化為哪些有機(jī)物?2、 原癌基因的類(lèi)型及抑癌基因3、 生物氧化與生物轉(zhuǎn)化區(qū)別聯(lián)系4、一種基因編碼的DNA跑帶出既有單條、又有雙條，問(wèn)為何解釋?zhuān)?、DNA Tm的意義及加離子后有何

28、變化？2004年北京醫(yī)科大學(xué)生化試卷1. 請(qǐng)列舉三種根據(jù)分子大小進(jìn)行蛋白質(zhì)分離純化的方法， 并簡(jiǎn)述其原理（ 15 分 ）2. DNA的螺旋結(jié)構(gòu)模型有哪些特征？這種模型有何生物學(xué)意義？ （15分）3. 下列物質(zhì)能否進(jìn)行糖異生？ 為什么 ？ 可用箭頭圖表示。（20 分 ）乳酸 、 脂肪 、 亮氨酸4. 請(qǐng)舉例說(shuō)明酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑在臨床上的應(yīng)用， 并簡(jiǎn)述其作用機(jī)理。（10分）5. 苯酮酸尿癥患者從幼年開(kāi)始就可能會(huì)出現(xiàn)尿臭、 弱智 、 白化等臨床癥狀， 請(qǐng)從生化角度解釋患者出現(xiàn)這些癥狀的分子機(jī)理， 并提出針對(duì)該病的治療原則。（15 分 ）6. 請(qǐng)從至少5 個(gè)方面比較真核生物與原核生物的蛋白質(zhì)合成體系過(guò)

29、程有何差別。（ 15分 ）7. 請(qǐng)敘述體內(nèi)物質(zhì)代謝過(guò)程中乙酰 C。A的來(lái)源與去路（10分）8. 以腎上腺素為例敘述其調(diào)節(jié)糖原代謝信號(hào)傳導(dǎo)通路。（15）9. 解釋真核基因promotes和enhancers概念，描述二者DNA的典型結(jié)構(gòu)特性，敘述二者功能上的關(guān)系20 分 ）10. 已知人體細(xì)胞中大約近25 萬(wàn)種蛋白質(zhì)， 而人類(lèi)基因組計(jì)劃（ HGP） 公布的人類(lèi)基因有3.5 萬(wàn)至 4.5 萬(wàn)個(gè) ， 上述差異對(duì)你有何起始？ 請(qǐng)結(jié)合基因表達(dá)調(diào)控原理 ， 對(duì)上述事實(shí)給予可能的解釋。（15 分 ）2005 年北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)（ 博 ）1、 鈣離子參與的兩條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路2、 糖來(lái)源缺乏， 6、 12、

30、 24 小時(shí) ， 糖 、 脂肪 、 氨基酸的代謝變化。3、某種蛋白質(zhì)可通過(guò)PKA蛋白激酶,簡(jiǎn)述其受體結(jié)構(gòu)及可能的轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。4、DNA突變類(lèi)型及其引起因素和修復(fù)機(jī)制。5、 基因表達(dá)調(diào)控。6、人體內(nèi)可能存在AFP受體嗎？如果存在，它可能的傳導(dǎo)途徑是什么？7、 關(guān)于鑒定一個(gè)基因的作用。2006年北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)（ 專(zhuān)基 ）（ 博 ）1、試述（基因表達(dá)調(diào)控中）DNA與蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用.（10分）2、 什么是組蛋白的乙?；?以及其意義. （10分 ）組蛋白乙?；揎検腔虮碛^轉(zhuǎn)錄調(diào)控的重要機(jī)制.組蛋白翻譯后修飾所引起的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)重塑在真核生物基因表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用.組蛋白乙酰

31、化主要由組蛋白乙?；福?histoneacetylases, HAT s） 和組蛋白去乙?；?（ Histonedeacetylases, HDACs ） 催化完成,組蛋白乙酰化反應(yīng)多發(fā)生在核心組蛋白N端堿性氨基酸集中區(qū)的特定 Lys殘基.于此，將乙酰輔酶A的乙?；D(zhuǎn)移到Lys的NH+3 ,中和掉一個(gè)正電荷. 這樣可減弱DNA 與組蛋白的相互作用.HATs 通過(guò)在組蛋白賴(lài)氨酸殘基乙?；?激活基因轉(zhuǎn)錄,而 HDACs 使組蛋白去乙酰化,抑制基因轉(zhuǎn)錄.組蛋白乙?；腿ヒ阴；c基因的表達(dá)調(diào)控密切相關(guān)，HATs和HDACs之間的動(dòng)態(tài)平衡控制著染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和基因組蛋白乙酰化在細(xì)胞生長(zhǎng) 、分化過(guò)程中的

32、作用，對(duì)于理解生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、衰老的分子 機(jī)理及其調(diào)節(jié)具有重要意組蛋白乙?；?、去乙?；c人類(lèi)疾病組蛋白乙酰化與基因活化以及DNA復(fù)制相關(guān),組蛋白的去乙?；突虻氖Щ钕嚓P(guān)。乙?；D(zhuǎn)移酶(HATs)主要是在組蛋白H3、H4的N端尾上的賴(lài)氨酸加上乙 ?；?，去乙酰化酶(HDACs)則相反，不同位置的修飾均需要特定的酶來(lái)完 成。乙酰化酶家族可作為輔激活因子調(diào)控轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，參與DNA損傷修復(fù)，還可作為DNA結(jié)合蛋白。去乙?；讣易鍎t和染色體易位、轉(zhuǎn) 錄調(diào)控、基因沉默、細(xì)胞周期、細(xì)胞分化和增殖以及細(xì)胞凋亡相關(guān)。CREB 結(jié)合蛋白(CREB binding protein,CBP)、E1A 結(jié)合蛋

33、白 p300(E1A binding protein p300,EP300)和鋅指蛋白 220(zinc finger 220,ZNF220)均為乙?；D(zhuǎn)移酶 。CBP 是 cAMP 應(yīng)答元件結(jié)合蛋白的輔激活蛋白,通過(guò)乙?；M蛋白使和cAMP應(yīng)答元件作用的啟動(dòng)子開(kāi)始轉(zhuǎn)錄，它的突變導(dǎo)致Rubinstein Taybi綜合征，患者智力低下、面部畸形、拇指和拇趾粗大、身材矮小。CBP和EP300均可抑制腫瘤的形成，在小鼠瘤細(xì)胞中確定了 CBP的突變，在結(jié)腸和乳房瘤細(xì)胞系中確定了EP300的突變，另外ZNF220異常和人的急性進(jìn)行性髓性白血病相關(guān)。如果突變導(dǎo)致錯(cuò)誤的激活去乙?；富蝈e(cuò)誤的和去乙?；赶?/p>

34、互作用，將可能導(dǎo)致疾病的發(fā)生。甲基化 CpG-結(jié)合蛋白-2(methyl cytosine binding protein-2,MeCP2)可募集去 乙?；傅郊谆腄NA區(qū)域，使組蛋白去乙?；瘜?dǎo)致染色質(zhì)濃縮，MeCP2的突變導(dǎo)致Rett綜合征.患者出生即發(fā)病、智力發(fā)育遲緩、伴孤獨(dú)癥。若阻礙去乙?；傅墓δ埽瑒t可抑制癌細(xì)胞的增殖和分化，可用于急性早幼粒細(xì)胞性白血病，急性淋巴 細(xì)胞性白血病和 非何杰金氏淋巴瘤 的治療。染色質(zhì)重塑異常引發(fā)的人類(lèi)疾病是由于重塑復(fù)合物中的關(guān)鍵蛋白發(fā)生突變，導(dǎo)致染色質(zhì)重塑失敗，即核小體不能正確定位，并使修復(fù)DNA損傷的復(fù)合物，基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄裝置等不能接近DNA,從而影響基因

35、的正常表達(dá)。如果突變導(dǎo)致抑癌基因或調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的蛋白出現(xiàn)異常將導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。乙酰化酶的突變導(dǎo)致正?；虿荒鼙磉_(dá)，去乙?；傅耐蛔兓蛞恍┖腿ヒ阴；赶嚓P(guān)的蛋白的突變使去乙酰化酶錯(cuò)誤募集將引發(fā)腫瘤等疾病。3、DNA與RNA進(jìn)行剪接的區(qū)別及意義.（10分）4、核酸的理化性質(zhì)及其在實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用 .（10 分）核酸的最大吸收峰 260nm左右，可用于DNA或RNA的定量，判斷核酸樣品的純度，判 斷DNA是否變性。在某些理化因素作用下，DNA變性，DNA雙鏈解開(kāi)成兩條單鏈。變性DNA在適當(dāng)?shù)臈l件下兩條彼此分開(kāi)的單鏈重新締合成雙鏈復(fù)性?？捎糜诤怂岬碾s交：Southern雜交Northern 雜交。分子雜交

36、是用于研究和分離特殊基因和RNA勺重要分子生物 學(xué)技術(shù)。5、以6磷酸果糖?t酶為例，考關(guān)于變構(gòu)調(diào)節(jié)方面和化學(xué)修飾調(diào)節(jié)方面的內(nèi)容。（15分） 6、考關(guān)于酮體的原料，調(diào)節(jié)，等方面的內(nèi)容.（15分）酮體（Ketone bodies）是在機(jī)體饑餓、禁食或某些病理狀態(tài)（如糖尿?。┫庐a(chǎn)生的一類(lèi)化合物，它包括丙酮、乙酰乙酸和伊羥丁酸三種化合物酮體（ketone bodies）在肝臟內(nèi)合成，原料為乙酰coa既可來(lái)糖，也可來(lái)自脂酸。當(dāng)糖的供應(yīng)充足，糖和脂肪的分解均衡時(shí)，乙酰coa主要進(jìn)入三竣酸循環(huán)（TCA）氧化，或用以合成脂酸，只有少量可生成酮體，因而酮體是正常的中間代謝產(chǎn)物。在長(zhǎng)期饑餓或糖尿病時(shí)，糖的供應(yīng)或利

37、用不足，脂肪的分解占優(yōu)勢(shì)，這是肝臟內(nèi)有相當(dāng)一部分乙酰coa被合成酮體，正常情況下體內(nèi)生成酮體的速率約0.25mmol/分或36克/24小時(shí)；長(zhǎng)期饑餓時(shí)增加到1-2mmol/分或40-280克/24小時(shí)。未控制的糖尿病時(shí)酮體生成速度可達(dá)3mmol/分或430克/24小時(shí)。酮體分子小，又是水溶性，很容易自肝臟釋放血液而被其他組織利用。心肌，腎臟等利用酮體甚至更優(yōu)于葡萄糖。這時(shí)酮體可成為其重要的能量來(lái)源。正常情況下腦組織 依賴(lài)葡萄糖提供能量。由于血腦屏障，腦組織不能利用與蛋白質(zhì)結(jié)合的游離脂酸。在長(zhǎng)期饑餓時(shí)，腦組織能逐漸適用利用酮體作為能源，由酮體提供的能量可以滿(mǎn)足腦組織50-70%的需要，這是酮體代

38、謝的重要生理意義所在。機(jī)體在上述狀態(tài)時(shí)，膽庾動(dòng)員加強(qiáng)，大量的脂肪酸被肝細(xì)胞吸收和氧化;而同時(shí)為了維 持血糖濃度的穩(wěn)定,體內(nèi)的 糖異生也得到激活。糖異生的原料 草酰乙酸被大量消耗,影 響到草酰乙酸所參與的另一代謝途徑三竣酸循環(huán)，大量中間物乙酰CoA得不到消耗、出現(xiàn)堆積，并因此生成酮體。7、維生素D為什么既可以看作維生素，又可以看作激素.以及它的代謝和調(diào)節(jié)。（10分）維生 素D既被看作維生素，又被當(dāng)作一種荷爾蒙，因?yàn)樗蔷S生素中的極少數(shù)例外。絕大多數(shù)維生素人體無(wú)法自己合成 ，而必須通過(guò)食物或者藥劑補(bǔ)充來(lái)攝取，而維生素D卻可以由紫外照射的皮膚（陽(yáng)光直射就可以）合成。當(dāng)然，從食物中一樣可以補(bǔ)充維生素D

39、o天然來(lái)源包括祐魚(yú)肝臟中的油脂以及其它咸水魚(yú)包括大比目魚(yú)、劍魚(yú)、金槍魚(yú)、沙丁魚(yú)以及青魚(yú)等等的魚(yú)肝油中。維生素D的作用機(jī)制。維生素D的前體（生成維生素D的原料）存在于皮膚中，當(dāng)陽(yáng)光直 射時(shí)會(huì)發(fā)生反應(yīng)轉(zhuǎn)化為維生素 D3, D3分子被運(yùn)送到肝臟并且轉(zhuǎn)化為維生素 D的另一種形式 25位單脫氧膽固醇，這種形式的效用更大。然后25位單脫氧膽固醇又被轉(zhuǎn)運(yùn)到腎形礦脈并在那里被轉(zhuǎn)化為1， 25 位二羥膽鈣化（ 甾 ） 醇 ， 這種形式是維生素D 最有效的狀態(tài)。 然后維生素 D 將和甲狀旁腺激素以及降血鈣素協(xié)同作用來(lái)平衡血液中鈣離子和磷的含量， 特別是增強(qiáng)人體對(duì)鈣離子的吸收能力。8、 什么是生物轉(zhuǎn)化,以脂肪泄,肝

40、掌,脂肪肝為例說(shuō)明肝臟在代謝中的作用.（10 分 ）9、 考肌酸和磷酸肌酸的題（ 10 分 ） 北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部2007 生物化學(xué)（ 專(zhuān)基 ）（ 博 ） 選擇1 ， 和核酸相關(guān)的糖代謝磷酸戊糖途徑2， 基因相關(guān)3， 共價(jià)調(diào)節(jié)4, ALA合酶的部位5， 合成腎上腺素的氨基酸6， 剪切體二10 個(gè)大題 （ 選八道 ）1 ， 真核生物基因復(fù)制過(guò)程中通過(guò)何種機(jī)制防止基因縮短（ 就是想讓大家說(shuō)說(shuō)端粒酶的問(wèn)題 ）。2， 基因組學(xué)， 蛋白組學(xué)， 遺傳組學(xué)概念及應(yīng)用。3, DNA與DNA相互作用。4， 舉例說(shuō)明蛋白與蛋白之間的相互作用。5， 核內(nèi)受體。6， 谷氨酸的結(jié)構(gòu)， 分子 。7， tRNA。8， 某種肝內(nèi)

41、酶蛋白的分離提純的幾種方法的應(yīng)用（ 實(shí)驗(yàn)題 ）。9， 基因表達(dá)的調(diào)控及各因素之間的相互作用。10， 哪種物質(zhì)直接參與糖、 氨 、 核苷酸代謝？ 在鳥(niǎo)氨酸循環(huán)中直接參與的一步反應(yīng)是什么？ 幾種物質(zhì)和糖轉(zhuǎn)化的可行性分析2008年北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)（專(zhuān)基）（博）1、DNA損傷的類(lèi)型，原因和修復(fù)機(jī)制。DNA分子的損傷類(lèi)型有多種 。UV照射后DNA分子上的兩個(gè)相鄰的胸腺喀咤 （T）或胞喀咤（C） 之間可以共價(jià)鍵連結(jié)形成環(huán)丁酰環(huán)，這種環(huán)式結(jié)構(gòu)稱(chēng)為二聚體 。胸腺喀咤二聚體的形成是 UV對(duì)DNA分子的主要損傷方式 。X射線(xiàn)、丫射線(xiàn)照射細(xì)胞后，由細(xì)胞內(nèi)的水所產(chǎn)生的自由基既可使DNA分子雙鏈間氫鍵斷裂,也可使

42、它的單鏈或雙鏈斷裂 ?；瘜W(xué)物中的博萊霉素、甲基磺酸甲烷等烷化劑也能造成鏈的斷裂。絲裂霉素C可造成DNA分子單鏈間的交聯(lián)，這種情況常發(fā)生在兩個(gè)單鏈的對(duì)角的鳥(niǎo)喋吟之間。鏈的交聯(lián)也往往帶來(lái) DNA分子的斷裂。DNA分子還可以發(fā)生個(gè)別堿基或核甘酸的變化。例如堿基結(jié)構(gòu)類(lèi)似物 5-澳尿噴咤等可以取代個(gè)別堿基，亞硝酸能引起堿基的氧化脫氨反應(yīng)，原黃素（普魯黃）等口丫咤類(lèi)染料和甲基氨基偶氮苯等芳香胺致癌物可以造成個(gè)別核甘酸對(duì)的增加或減少而引起移碼突變（見(jiàn)基因突變）。一種DNA損傷劑往往可以同時(shí)引起幾種類(lèi)型的損傷，其損傷效應(yīng)的大小和類(lèi)型與劑量及細(xì)胞所處的周期狀態(tài)有關(guān)。DNA損傷修復(fù)-修復(fù)方式光復(fù)活又稱(chēng)光逆轉(zhuǎn)。這是

43、在可見(jiàn)光 （波長(zhǎng)30006000埃）照射下由光復(fù)活酶識(shí)別并作用于二 聚體，利用光所提供的能量使環(huán)丁酰環(huán)打開(kāi)而完成的修復(fù)過(guò)程。光復(fù)活酶已在細(xì)菌、酵母菌、原生動(dòng)物、藻類(lèi)、蛙、鳥(niǎo)類(lèi)、哺乳動(dòng)物中的有袋類(lèi)和高等哺乳類(lèi)及人類(lèi)的淋巴細(xì)胞和皮膚成纖 維細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)。這種修復(fù)功能雖然普遍存在，但主要是低等生物的一種修復(fù)方式，隨著生物的進(jìn)化，它所起的作用也隨之削弱切除修復(fù)又稱(chēng)切補(bǔ)修復(fù)。最初在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)，包括一系列復(fù)雜的酶促DNA修補(bǔ)復(fù)制過(guò)程，主要有以下幾個(gè)階段：核酸內(nèi)切酶識(shí)別 DNA損傷部位，并在5/端作一切口 ，再在外切酶的作 用下從5/端到3/端方向切除損傷；然后在 DNA多聚酶的作用下以損傷處相對(duì)應(yīng)的互補(bǔ)

44、鏈為 模板合成新的 DNA單鏈片斷以填補(bǔ)切除后留下的空隙；最后再在連接酶的作用下將新合成的單鏈片斷與原有的單鏈以磷酸二酯鏈相接而完成修復(fù)過(guò)程。切除修復(fù)并不限于修復(fù)喀咤二聚體，也可以修復(fù)化學(xué)物等引起的其他類(lèi)型的損傷。從切除的對(duì)象來(lái)看，切除修復(fù)又可以分為堿基切除修復(fù)和核甘酸切除修復(fù)兩類(lèi)。堿基切除修復(fù)是先由糖基酶識(shí)別和去除損傷的堿基 ，在DNA單鏈上形成無(wú)喋吟或無(wú)噴咤的空位，這種空缺的堿基位置可以通過(guò)兩個(gè)途徑來(lái)填補(bǔ)：一是在插入酶的作用下以正確的堿基插入到空缺的位置上；二是在核酸內(nèi)切酶的催化下在空位的5/端切開(kāi)DNA鏈，從而觸發(fā)上述一系列切除修復(fù)過(guò)程。對(duì)于各種不同類(lèi)型的堿基損傷都有特異的糖基酶加以識(shí)別

45、。不同的核酸內(nèi)切 匪對(duì)于不同類(lèi)型損傷的識(shí)別也具有相對(duì)的特異性。切除修復(fù)功能廣泛存在于原核生物和真核生物中，也是人類(lèi)的主要修復(fù)方式，嚙齒動(dòng)物（如倉(cāng)鼠、小鼠）先天缺乏切除修復(fù)的功能。1978年生學(xué)者J.L.馬克斯發(fā)現(xiàn)真核生物與原核生物間由于染色質(zhì)結(jié)構(gòu)不同,切除修復(fù)的過(guò)程也不相同。真核生物的 DNA分子不象原核生物那樣是裸露的，而是纏繞在組蛋白上形成串珠狀的核小體結(jié)構(gòu)。真核生物中的嗒咤二聚體的切除分兩個(gè)階段：快速切除期，約需23小時(shí)，主要切除未與組蛋白結(jié)合的DNA部分的損傷。緩慢切除期，至少要持續(xù)35小時(shí)而且需要有某種控制因子去識(shí)別這種損傷，使DNA受損部分從核小體中暴露出來(lái)，然后經(jīng)過(guò)一系列步驟完成

46、切除修復(fù) , 然后修復(fù)的DNA 分子再纏繞在組蛋白上重新形成核小體。重組修復(fù)重組修復(fù)從DNA 分子的半保留復(fù)制開(kāi)始， 在嘧啶二聚體相對(duì)應(yīng)的位置上因復(fù)制不能正常進(jìn)行而出現(xiàn)空缺,在大腸桿菌中已經(jīng)證實(shí)這一DNA 損傷誘導(dǎo)產(chǎn)生了重組蛋白,在重組蛋白的作用下母鏈和子鏈發(fā)生重組,重組后原來(lái)母鏈中的缺口可以通過(guò)DNA 多聚酶的作用,以對(duì)側(cè)子鏈為模板合成單鏈 DNA 片斷來(lái)填補(bǔ),最后也同樣地在連接酶的作用下以磷酸二脂鍵連接新舊鏈而完成修復(fù)過(guò)程 。 重組修復(fù)也是嚙齒動(dòng)物主要的修復(fù)方式。 重組修復(fù)與切除修復(fù)的最大區(qū)別在于前者不須立即從親代的DNA 分子中去除受損傷的部分,卻能保證DNA 復(fù)制繼續(xù)進(jìn)行。 原母鏈中遺

47、留的損傷部分 , 可以在下一個(gè)細(xì)胞周期中再以切除修復(fù)方式去完成修復(fù)。重組修復(fù)的主要步驟有：1 復(fù)制含有TT 或其他結(jié)構(gòu)損傷的DNA 仍然可以正常的進(jìn)行復(fù)制， 但當(dāng)復(fù)制到損傷部位時(shí)， 子代 DNA 鏈中與損傷部位相對(duì)應(yīng)的位置出現(xiàn)切口， 新合成的子鏈比未損傷的DNA 鏈要短 。2 重組完整的母鏈與有缺口的子鏈重組， 缺口由母鏈來(lái)的核苷酸片段彌補(bǔ)。3 再合成重組后母鏈中的缺口通過(guò)DNA 多聚酶的作用合成核酸片段， 然后由連接酶是新片段與舊鏈連接， 至此重組修復(fù)完成。重組修復(fù)并沒(méi)有從親代DNA 中去除二聚體。 當(dāng)?shù)诙螐?fù)制時(shí)， 留在母鏈中的二聚體仍使復(fù)制不能正常進(jìn)行， 復(fù)制經(jīng)過(guò)損傷部位時(shí)所產(chǎn)生的切口， 仍舊要用同樣的重組過(guò)程來(lái)彌補(bǔ)， 隨著 DNA復(fù)制的繼續(xù)， 若干代以后， 雖然二聚體始終沒(méi)有除去， 但損傷的DNA 鏈逐漸 “稀釋 ”， 最后無(wú)損于正常生理功能， 損傷也就得到了修復(fù)。SOS 修復(fù) 是 SOS 反應(yīng)的一種功能。 SOS 反應(yīng)是 DNA 受到損