1、細(xì)菌的分布與外界因素細(xì)菌的分布與外界因素對細(xì)菌的影響對細(xì)菌的影響右江民族醫(yī)學(xué)院微生物與免疫學(xué)教研室右江民族醫(yī)學(xué)院微生物與免疫學(xué)教研室實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康? .掌握皮膚消毒方法掌握皮膚消毒方法. .掌握標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法（）的原理、操作掌握標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法（）的原理、操作方法、結(jié)果的判讀與解釋及臨床意義方法、結(jié)果的判讀與解釋及臨床意義. .掌握紙片擴(kuò)散法的質(zhì)量控制方法掌握紙片擴(kuò)散法的質(zhì)量控制方法. .熟悉人體皮膚、咽喉部細(xì)菌檢查方法熟悉人體皮膚、咽喉部細(xì)菌檢查方法. .熟悉紫外線滅菌方法熟悉紫外線滅菌方法. .了解空氣、水中細(xì)菌的檢查方法了解空氣、水中細(xì)菌的檢查方法. .了解高壓蒸汽滅菌方法了解高壓蒸汽滅

2、菌方法試驗內(nèi)容試驗內(nèi)容一、細(xì)菌的分布檢查一、細(xì)菌的分布檢查. .空氣中細(xì)菌的檢查空氣中細(xì)菌的檢查. .水中細(xì)菌的檢查水中細(xì)菌的檢查. .皮膚消毒試驗皮膚消毒試驗. .飛沫中細(xì)菌的檢查飛沫中細(xì)菌的檢查二、外界因素對細(xì)菌二、外界因素對細(xì)菌的影響的影響. .高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法. .紫外線殺菌試驗紫外線殺菌試驗 . .藥物敏感試驗藥物敏感試驗一、細(xì)菌的分布檢查一、細(xì)菌的分布檢查 了解微生物在自然界及正常人體的分布，了解微生物在自然界及正常人體的分布，對于在醫(yī)療實踐及某些科學(xué)實驗中樹立無對于在醫(yī)療實踐及某些科學(xué)實驗中樹立無菌觀念有著重要的意義。菌觀念有著重要的意義。 材料材料普通瓊脂平板普通瓊

3、脂平板血瓊脂平板血瓊脂平板 MHMH瓊脂平板瓊脂平板溫箱溫箱無菌棉簽等無菌棉簽等普通瓊脂平板普通瓊脂平板血瓊脂平板血瓊脂平板空氣中細(xì)菌的檢查（示教）空氣中細(xì)菌的檢查（示教） 左邊培養(yǎng)皿菌落是未被過濾空氣中的細(xì)菌，右邊是經(jīng)過濾空氣中留有的少量細(xì)菌 水中細(xì)菌的檢查（示教）水中細(xì)菌的檢查（示教） 取水樣取水樣1ml 注入無菌空平皿內(nèi)注入無菌空平皿內(nèi) 加加15mL已融化并冷卻至約已融化并冷卻至約45的培養(yǎng)基混勻的培養(yǎng)基混勻 倒置于倒置于溫箱培養(yǎng)溫箱培養(yǎng)18-18-h后觀察結(jié)果后觀察結(jié)果 1.1.分區(qū)標(biāo)記分區(qū)標(biāo)記 2.2.接種接種 3.3.培養(yǎng)培養(yǎng)皮膚細(xì)菌的檢查皮膚細(xì)菌的檢查：空白對照空白對照消毒后消毒

4、后消毒前消毒前常用的皮膚消毒劑常用的皮膚消毒劑飛沫中細(xì)菌的檢查飛沫中細(xì)菌的檢查用咳碟法用咳碟法將咽喉部將咽喉部細(xì)菌接種細(xì)菌接種于血平板于血平板二、外界因素對細(xì)菌的影響二、外界因素對細(xì)菌的影響 當(dāng)外界環(huán)境條件發(fā)生巨大改變，可導(dǎo)當(dāng)外界環(huán)境條件發(fā)生巨大改變，可導(dǎo)致微生物的主要代謝活動發(fā)生障礙，生致微生物的主要代謝活動發(fā)生障礙，生長停頓，甚至死亡。長停頓，甚至死亡。1.1.高壓蒸汽滅菌法（示教）高壓蒸汽滅菌法（示教） 原理：原理：利用密閉的金屬鍋，密閉加利用密閉的金屬鍋，密閉加熱使鍋內(nèi)蒸汽壓力增大，溫度隨之熱使鍋內(nèi)蒸汽壓力增大，溫度隨之升高，殺菌力增強(qiáng)。升高，殺菌力增強(qiáng)。高壓蒸汽滅菌器高壓蒸汽滅菌器手

5、提式高壓蒸手提式高壓蒸汽滅菌器汽滅菌器高壓蒸汽滅菌器高壓蒸汽滅菌器構(gòu)造：構(gòu)造：高壓蒸汽滅菌器高壓蒸汽滅菌器是一個雙層的金屬圓是一個雙層的金屬圓筒，兩層之間盛水，筒，兩層之間盛水，外層堅厚，其上方或外層堅厚，其上方或前方有金屬厚蓋。蓋前方有金屬厚蓋。蓋旁附有螺旋，借以緊旁附有螺旋，借以緊閉蓋門，使蒸汽不能閉蓋門，使蒸汽不能外溢，因而蒸汽壓力外溢，因而蒸汽壓力升高，其溫度亦相應(yīng)升高，其溫度亦相應(yīng)的增高。的增高。 1.1.加水至外筒內(nèi)，被滅菌物品放入內(nèi)筒。加水至外筒內(nèi)，被滅菌物品放入內(nèi)筒。2.2.蓋上滅菌器蓋，擰緊螺旋使之密閉。蓋上滅菌器蓋，擰緊螺旋使之密閉。3.3.加熱，同時打開排氣閥門，排凈其中

6、冷空氣，關(guān)加熱，同時打開排氣閥門，排凈其中冷空氣，關(guān)閉排氣閥。繼續(xù)加熱，待壓力表漸漸升至所需壓閉排氣閥。繼續(xù)加熱，待壓力表漸漸升至所需壓力時力時( (103.4kPa,121.3103.4kPa,121.3) )，保持壓力和溫度維持，保持壓力和溫度維持151530min30min。4.4.待壓力自行降至零時，慢慢打開排氣閥，排除余待壓力自行降至零時，慢慢打開排氣閥，排除余氣，開蓋取物。氣，開蓋取物。切不可在壓力尚未降低為零時突切不可在壓力尚未降低為零時突然打開排氣閥門，以免瓶內(nèi)液體等沖出外溢然打開排氣閥門，以免瓶內(nèi)液體等沖出外溢。 使用方法使用方法用用 途途 凡耐高溫和潮濕的物品，如培養(yǎng)基、凡

7、耐高溫和潮濕的物品，如培養(yǎng)基、生理鹽水、衣服、紗布、棉花、敷料、生理鹽水、衣服、紗布、棉花、敷料、玻璃器材、傳染性污物等都可應(yīng)用本法玻璃器材、傳染性污物等都可應(yīng)用本法滅菌。滅菌。 2 2、紫外線殺菌試驗、紫外線殺菌試驗 原理：原理：通過紫外線的照射，破壞及改變通過紫外線的照射，破壞及改變微生物的微生物的DNADNA結(jié)構(gòu)，使細(xì)菌當(dāng)即死亡或不結(jié)構(gòu)，使細(xì)菌當(dāng)即死亡或不能繁殖后代，達(dá)到殺菌的目的。能繁殖后代，達(dá)到殺菌的目的。優(yōu)點優(yōu)點 簡單便捷、廣簡單便捷、廣譜高效、無二次污譜高效、無二次污染、便于治理和實染、便于治理和實現(xiàn)自動化等優(yōu)點?，F(xiàn)自動化等優(yōu)點。缺點缺點穿透能力弱穿透能力弱特特 點點材材 料料普

8、通瓊脂平板普通瓊脂平板18-24h18-24h細(xì)菌培養(yǎng)物細(xì)菌培養(yǎng)物紫外線燈等紫外線燈等方方 法法 細(xì)菌接種于普通瓊脂平板上細(xì)菌接種于普通瓊脂平板上 打開皿蓋，放置于紫外燈下打開皿蓋，放置于紫外燈下約約30cm30cm處，用蓋子蓋住半邊處，用蓋子蓋住半邊做對照，照射半小時后蓋好做對照，照射半小時后蓋好蓋子。蓋子。 培養(yǎng)培養(yǎng)藥物敏感試驗藥物敏感試驗 目前臨床微生物實驗室進(jìn)行藥目前臨床微生物實驗室進(jìn)行藥敏試驗的方法主要有紙片擴(kuò)散法、敏試驗的方法主要有紙片擴(kuò)散法、稀釋法、抗生素濃度法、自動化稀釋法、抗生素濃度法、自動化儀器等儀器等標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法（）標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法（）原理：原理：將含有定量抗生素的濾紙片

9、貼在已接將含有定量抗生素的濾紙片貼在已接種了測試菌的瓊脂表面上，紙片中的藥物種了測試菌的瓊脂表面上，紙片中的藥物在瓊脂中擴(kuò)散，隨著擴(kuò)散距離的增加抗生在瓊脂中擴(kuò)散，隨著擴(kuò)散距離的增加抗生素的濃度呈對數(shù)減少素的濃度呈對數(shù)減少, ,在藥物濃度到達(dá)的范在藥物濃度到達(dá)的范圍內(nèi)對此藥敏感的細(xì)菌不能生長而形成透圍內(nèi)對此藥敏感的細(xì)菌不能生長而形成透明的抑菌圈，不同細(xì)菌形成的抑菌圈各不明的抑菌圈，不同細(xì)菌形成的抑菌圈各不相同，抑菌圈的大小反映了測試菌對該藥相同，抑菌圈的大小反映了測試菌對該藥的敏感程度，并與該藥物對測試菌的最低的敏感程度，并與該藥物對測試菌的最低抑菌濃度（抑菌濃度（MICMIC）呈負(fù)相關(guān)。）呈負(fù)

10、相關(guān)。材材 料料菌種：葡萄球菌、大腸桿菌菌液菌種：葡萄球菌、大腸桿菌菌液培養(yǎng)基：水解酪蛋白瓊脂（培養(yǎng)基：水解酪蛋白瓊脂（MHMH瓊脂）瓊脂）試劑：各種抗菌藥物紙片（試劑：各種抗菌藥物紙片（PENPEN、GENGEN、STRSTR、CHLCHL) )方方 法法 用滅菌棉試蘸取試驗菌涂用滅菌棉試蘸取試驗菌涂抹在抹在MHMH培養(yǎng)基表面，要均培養(yǎng)基表面，要均勻涂抹勻涂抹3 3次，室溫下待干燥次，室溫下待干燥 以無菌鑷子以無菌鑷子( (燒灼滅菌，注燒灼滅菌，注意鑷子要冷卻意鑷子要冷卻）取各抗生）取各抗生素紙片貼于表面素紙片貼于表面 培養(yǎng)培養(yǎng)各紙片中心距24mm,紙片距平板邊緣應(yīng)15mmPENGENSTRCHL結(jié)果判斷結(jié)果判斷 用毫米尺量取抑用毫米尺量取抑菌圈直徑，參考試驗菌圈直徑，參考試驗指導(dǎo)指導(dǎo)表表3-63-6的標(biāo)準(zhǔn)判的標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果，按敏感讀結(jié)果，按敏感（S S）、中介（）、中介（I I）、）、耐藥（耐藥（R R）報告。）報告。材材 料料 分分 配配分組分組兩人一組兩人一組菌種菌種金葡菌、大金葡菌、大腸桿菌各一支腸桿菌各一支培養(yǎng)基培養(yǎng)基2 2塊塊普通平板普通平板/ /組（組（皮膚細(xì)菌的檢查、紫皮膚細(xì)菌的檢查、紫外線殺菌試驗外線殺菌試驗）2 2塊塊MHMH平板平板/ /組（組（藥物敏感試驗藥物敏感試驗）1 1塊血平