1、銀杏葉中黃酮提取及含量測定一、實驗?zāi)康奶崛°y杏葉中的總黃酮并測定其含量。二、實驗原理銀杏系銀杏科銀杏屬落葉喬木，銀杏葉中含有多種生理活性成分，其中黃酮類化合物是重要的生理活性物質(zhì)，具有保肝護肝、預(yù)防治療心血管疾病、抗氧化、抗衰老等作用。因此，將銀杏葉作為高營養(yǎng)、保健功能價值的資源加以開發(fā)利用，這對于提高銀杏葉綜合利用率有重要意義。銀杏葉黃酮類化合物的提取方法目前研究的有水浸取法，成本低但浸取率低；有機溶劑浸取法中，乙醇浸取的效率高且無毒，是目前采用較多的方法；韓玉謙等采用超臨界流體萃取法，在70%乙醇溶液中加熱回流法和CO2超臨界流體萃取法提取銀杏葉中的活性成分，銀杏黃酮回收率為84.4%，是

2、常規(guī)萃取法回收率的2倍多；乙醇超聲波浸取法,黃酮提取率可達(dá)到86.7%。銀杏黃酮含量的測定常用分光光度法和高效液相色譜法。分光光度法自20世紀(jì)90年代以來一直是用來測定銀杏黃酮的一種重要方法,由于其成本低、便于操作等特點,是一種快捷有效的方法1。本實驗采用乙醇作溶劑進行索氏提取，建立了用Al(NO3)3顯色法對蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品和銀杏葉提取液進行光譜掃描測定銀杏葉總黃酮含量的方法2。三、實驗儀器和試劑材料：銀杏葉粉末50g試劑：標(biāo)準(zhǔn)蘆丁樣品，無水乙醇(600ml)，50mlAl(NO3)3(0.1mol/L)，儀器：紫外分光光度計、電子分析天平、水浴鍋、烘箱、燒杯、容量瓶（100ml1個、50ml1個

3、、10ml6個）、索氏提取器、減壓蒸餾裝置、錐形瓶、沸石等。四、實驗步驟1.1 提取銀杏葉中總黃酮（1）將銀杏葉洗凈,在103下烘干至恒重,用研缽搗碎制得銀杏葉粉（2）準(zhǔn)確稱取10.0g，置于索氏提取器中，按下列條件加熱回流提?。阂掖紳舛?0，料液比1：20（gml），回流溫度85，回流時間2h，平行進行13次實驗。（ 3）將圓底燒瓶中提取液倒入燒杯，加入一倍蒸餾水，再加入相同量的乙醚，混合均勻，倒入分液漏斗中，靜置20min，分層后，收集下層液體。（ 4）減壓蒸餾，回收乙醇，得到淡黃色黏液，干燥得到銀杏葉中總黃酮提取物。1.2 銀杏葉中總黃酮含量測定（1）蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：稱取00100g

4、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，放入燒杯中，加入80%的乙醇溶液使其溶解，置于100ml的容量瓶中，制成0.1g/L的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。定容，搖勻備用。（2）繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別移取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml蘆丁對照品溶液，于6個10ml容量瓶中，標(biāo)記16，分別加入2.0、1.6、1.2、 0.8、0.4、0ml的80%乙醇溶液，加入5%NaNO2溶液0.5ml，搖勻，放置 6min ，加入 0.5ml10%AL（NO 3）3，搖勻，放置6min ，加入 4%NaOH溶液4.0ml,加入80%乙醇定容，搖勻，放置20min。在波長510nm處分別測定其吸光度，以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪

5、制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(3)取2ml分層后的下層液體置于50ml容量瓶中，用80%乙醇定容，搖勻，按同一方法顯色后，在波長510nm處測其吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計算出銀杏葉中黃酮的濃度，根據(jù)稀釋倍數(shù)計算出銀杏葉中黃酮的總含量。五、數(shù)據(jù)記錄及分析：實驗數(shù)據(jù)結(jié)果如下：123456濃度00.040.080.120.160.2C/g/L吸光度A00.060.0140.0250.0470.083樣品吸光度A=0.037,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，得樣品中黃酮的含量濃度C=0.120g/L,再乘其稀釋的倍數(shù)，則可得其相對應(yīng)的濃度，因為稀釋了50倍，經(jīng)計算，銀杏葉總提取液中含量：50*25*0.120g/L=0.15g,

6、又因為稱取銀杏葉粉末10.0g,所以測得銀杏葉中黃酮含量為0.15g/10.0g=1.5%。六、結(jié)果與討論1、不同時期的銀杏葉中黃酮含量是否一致？查找文獻了解到銀杏葉中黃酮含量最高的時期為葉子發(fā)黃的10月份,而青葉中含量則較少。2、談?wù)剬Ρ敬螌嶒灥氖斋@與感想團隊合作很重要，從開始查找文獻到實驗工程中，處處都表明了團隊合作的重要性，小組組員合作完成了本次實驗。研究性實驗的開展很有必要，這鍛煉了我們自主學(xué)習(xí)的能力，提高了我們的實驗技能，在此感謝我們的指導(dǎo)老師和實驗員，我們獲益匪淺。參考文獻1 鄧桂春,王鑫,趙麗艷,等.分光光度法測定銀杏葉中黃酮的含量,遼寧大學(xué)化學(xué)科學(xué)與工程學(xué)院,遼寧沈陽110036;2 董宏博，崔桂花，趙文秀銀，杏葉中總黃酮的提取工藝和含量測定的研究吉林醫(yī)藥學(xué)院，吉林吉林132013；3 龐允1,楊建秀2,劉子蘭1,銀杏葉中黃酮的