1、    P53蛋白在口腔鱗狀細胞癌 發(fā)生過程中的表達及意義        提要本研究采用微波處理暴露抗原，通過免疫組化LSAB方法對NOM 6例，OPL 28例，OSCC 34例中P53蛋白表達進行觀察，其結果NOM無表達；在OPL中的表達率為82隨著上皮異常增生的程度加重，表達率呈上升趨勢（P0.05）；而在OSCC中表達率為65，隨著腫瘤的分級增加，表達率呈下降趨勢（P0.05）。結果表明，P53蛋白在OPL和OSCC中呈異常表達，并與OPL程度和OSCC分級有

2、關，提示P53基因在OSCC發(fā)生發(fā)展過程中具有一定作用。關鍵詞正?？谇徽衬た谇话┣皳p害口腔鱗狀細胞癌P53蛋白 The expression of P53 oncoprotein in normal,premalignant,and malignant lesions of oral mucosal epitheliumYin Cao,et al.Stomatological Hsopital of Guangdong Province,Guangzhou 510260.AbstractThe objective of the study was to investigate the effe

3、cts of P53 protein on the malignant development of mucosal epithelium.The level of P53 protein expression was determined immunohistochemically in normal oral mucosa(NOM),oral precancerous lesions(OPL),and oral sequmous cell carcinoma(OSCC).P53 protein expression was negative in NOM,while P53 protein

4、 positive staining was found in 23/28(82%) of OPL,and in 22/34(65%) of OSCC.Thus,the overexpression of P53 is involved in early stage as well as in later stage of tumorigenesis,and is closely related to the degree of tumor.The results indicate that P53 gene plays a role in the development and progre

5、ssion of OSCC.Key wordsNormal oral mucosa(NOM) Oral precancerous lesion(OPL) Oral squamous cell carcinoma(OSCC)P53 protein本研究采用微波處理暴露抗原，通過免疫組織化學方法對正?？谇徽衬ぃ∟ormal oralmucosa,NOM）、口腔癌前損害（Oral precancerous lesion,OPL）和口腔鱗狀細胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC）中P53蛋白表達進行觀察和分析，以期為口腔粘膜癌變機制的研究提供依據(jù)。材料和方法1.試劑

6、：DAKO-P53,DO-7單克隆抗體（DAKO公司，1：200）；LSAB試劑盒（DAKO公司，1：150）；DAB顯示劑（Sinma公司，1：150）。2.標本：選擇NOM6例，OPL28例，OSCC34例，所有標本均經(jīng)10中性福爾馬林固定，石蠟包埋。一般情況見表1。表168例觀察標本的一般情況病 理 診 斷病 理 分 級例數(shù)NOM06OPL輕9中6重13OSCC13156上述關于OPL診斷分類參考WHO1978的標準，OPL上皮異常增生分輕、中、重度；OSCC分級參考WHO1971年的標準，分、級。3.實驗方法：將每個標本連續(xù)病理切片3張（5m），其中，一張作HE染色，一張作空白對照，一

7、張作P53蛋白免疫組化染色。常規(guī)脫蠟，脫水，置3過氧化氫甲醇溶液中孵育30分鐘，將切片置入蒸餾水，微波爐內(nèi)處理10分鐘（功率550W），待切片冷卻后，按免疫組化ABC法常規(guī)操作。空白對照組以PBS代替I抗，其余步驟同免疫組化。4.觀察內(nèi)容：P53蛋白表達分布情況：陽性細胞為胞核呈棕黃色顆粒；P53陽性表達率變化情況：統(tǒng)計處理（2檢驗）。 結果1.P53蛋白陰性染色：NOM和陰性對照切片2.OPL的P53蛋白陽性染色。（1）1OPL的中度上皮異常增生，P53陽性細胞位于基底層和上皮淺層輕度上皮異常增生：位于基底層，陽性細胞著色淺，數(shù)量少。中度上皮異常增生：陽性細胞位于基底層和基底旁層。重度上皮異

8、常增生：陽性細胞位于基底層和上皮淺層。胞核著色變深，數(shù)量劇增。3.OSCC的P53蛋白陽性染色：陽性細胞分布在癌巢周和侵襲前沿區(qū)，胞核著色明顯變深，數(shù)量劇增（2、3、4）2OSCC級陽性細胞呈散發(fā)型分布3OSCC級陽性細胞呈灶型分布4OSCC級陽性細胞呈泛染型分布（1）級：主要呈散發(fā)型分布（2）級：主要呈灶染型分布（3）級：主要呈泛染型分布4.P53蛋白表達情況（表2）。表2P53蛋白在NOM、OPL和OSCC中表 達 情 況（68例）病理診斷病理分級例數(shù)陽性例數(shù)陽性率NOM0600OPL輕96中65重1312OSCC131115962表2顯示OPL組總的P53蛋白陽性表達率約為82，不同異常

9、增生之間差異有顯著性（P0.05）?？傏厔菔请S著上皮異常增生程度加重；OSCC組P53蛋白表達陽性率約為65，在、分級中差異有顯著性（P0.05）?？傏厔軵53蛋白表達的陽性率呈下降趨勢。 討論本研究結果，P53蛋白在NOM無表達，在OPL表達率82，隨著上皮異常增生程度加重，表達率呈上升趨勢，而在OSCC中表達率65，在、分級中表達率呈下降趨勢，結果顯示，P53蛋白在OPL和OSCC中均呈異常表達，其表達率與癌前損害程度和腫瘤分級有關。關于P53基因在腫瘤惡變初期階段，還是晚期發(fā)揮作用，目前尚有爭議。Ogden等報導，在正常、良性及癌前病變的口腔及宮頸粘膜中P53蛋白無表達，認為P53蛋白的

10、異常表達與癌變的晚期有關1。但近來Regezi等研究認為，P53蛋白表達與OSCC發(fā)生的早期有關2。本研究P53蛋白在OPL和OSCC均有較高的表達率，提示P53基因在OSCC發(fā)生發(fā)展過程中具有一定作用，其作用機制有待進一步深入研究。目前關于P53蛋白在OPL和OSCC中表達研究結果不十分一致。陳謙明等報導，P53蛋白在OPL中表達率90，在OSCC中表達率613。而Matsuda等報導，P53蛋白在OPL表達率10，在OSCC中表達率354?？偟膩碚f，國內(nèi)學者高于國外學者的結果。其原因可能與標本固定，P53單抗種類、微波處理抗原與否、免疫組化方法選擇，以及種族等原因有關。因此，我們認為，關于

11、P53蛋白在OSCC發(fā)生發(fā)展過程表達的免疫組化研究，有待進一步標準化，系統(tǒng)化和定量化。*廣東省衛(wèi)生廳資助項目作者單位：殷操，胡雁，隆光培，黃澤民510260廣州，廣東省口腔醫(yī)院沈麗佳暨南大學醫(yī)學院口腔病理教研室參考文獻1Ogden GR,Kiddie RA,Lunny DP,et al.Assessment of P53 protein expression in normal,benign,and malignant oral mucosa.J Pathol,1992;166:389.2Regezi JA,Zarbo RJ,Pisanty S,et al.P53 protein expression in sequential biopsies of oral dysplasia and in situ carcinomas.J Oral Pathol Med,1995;24:18-22.3陳謙明，楊光華，付繼梁等，口腔粘膜鱗狀細胞癌發(fā)生過程中P53基因突變與P53蛋白異常表達不一致的意義.中華口腔醫(yī)學雜志，1996；31（4）：244.4Matsuda