1、選修1生物技術(shù)與實(shí)踐一、果酒和果醋的制作1 .果酒制作的微生物是呼吸類型反應(yīng)式溫度2 .果醋制作的微生物是呼吸類型反應(yīng)式溫度3 .實(shí)驗(yàn)流程圖實(shí)驗(yàn)裝置裝置如何使用制果酒時(shí)先通氣后斷氣是為什么果酒制作裝置能直接用于制果醋嗎4 .葡萄是先沖洗還是先去梗為什么能洗得太干凈嗎（家庭/工廠）5 .裝瓶時(shí)留有1/3的空間是為什么6 .用簡易裝置制作果酒適時(shí)擰松瓶蓋目的是能完全擰開嗎到發(fā)酵后期產(chǎn)氣是越來越多還是越來越少7 .如何防止發(fā)酵液被污染8 .果酒如何檢測(cè)鑒定酒精的重銘酸鉀容易如何配置如何使用顏色如何變化果醋如何檢測(cè)果醋的pH比酒精高還是低9 .葡萄酒一般呈紅色的原因 二、腐乳的制作1 .腐乳制作的微生

2、物主要是什么原理是什么溫度腐乳表面的“皮”是什么2 .腐乳制作的大致流程是什么3 .腐乳制作的豆腐選擇有什么講究4 .加鹽的作用是鹽的用量是多少鹽加的時(shí)候要注意什么5 .加酒的作用是含量一般控制在多少酒加少了會(huì)怎樣酒加多了會(huì)怎樣6 .香辛料的作用是什么7 .如何防止腐乳制作過程中雜菌污染 三、微生物的分離和培養(yǎng)1 .什么是培養(yǎng)基培養(yǎng)基中一般包含什么成分為滿員一些微生物的特殊要求，培養(yǎng)基配制還需要注意什么2 .培養(yǎng)基按狀態(tài)分為哪幾類培養(yǎng)基的狀態(tài)取決于什么成分培養(yǎng)基按功能分為哪幾類3 .什么是消毒常用方法適用范圍4 .什么是滅菌常用方法適用范圍5 .固體培養(yǎng)基配制的一般步驟6 .培養(yǎng)基能倒入平板后

3、再滅菌嗎倒平板時(shí)，為什么要冷卻到50 c左右如何估計(jì)溫度錐形瓶瓶口要通過火焰，為什么倒平板是培養(yǎng)皿蓋能完全打開嗎平板冷凝后為何要倒置如何檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否徹底滅菌（平板是否合格） 不小心將培養(yǎng)基濺到皿蓋與皿底間的平板還能用嗎7 .平板劃線操作時(shí)，接種環(huán)在什么時(shí)候灼燒為什么灼燒后為何要冷卻再劃線第二次及其后的劃線為何總是從上 一次劃線的末端開始第二區(qū)域的第一次劃線沒有菌落生長可能是什么原因8 .微生物純化常用方法有哪兩種哪種適合計(jì)數(shù)稀釋涂布平板法在涂布前，需要將涂布器作何處理才可以涂布 將1g 土樣加到9mL水中是稀釋了多少倍將10g 土樣加到90mL水中是稀釋了多少倍將1g 土樣加到99mL水中是

4、稀釋了多少倍將菌液稀釋103、106倍如何操作9 .測(cè)定微生物數(shù)量常用方法有什么是菌落菌落數(shù)為多少的平板適合計(jì)數(shù)只要在30300之間就可以用來計(jì)數(shù)嗎計(jì)算公式如果在 106稀釋度下涂布了 5個(gè)平板，每個(gè)平板涂布了菌液，得到菌落數(shù)分別是31、63、65、64、299,則10mL菌液中大約有多少菌統(tǒng)計(jì)的數(shù)目比實(shí)際數(shù)目低還是高為什么 10.微生物的篩選原理是什么什么是選擇培養(yǎng)基 11.設(shè)置對(duì)照的目的是如何設(shè)置對(duì)照12 .分解尿素的微生物用什么培養(yǎng)基篩選如何鑒定13 .纖維素酶是一種什么樣的酶分解纖維素的微生物用什么培養(yǎng)基篩選如何鑒定如何判斷微生物分解纖維素 的能力大小四、酶的研究與應(yīng)用1 .加酶洗衣粉

5、是指什么常加什么酶加酶洗衣粉能在pH小于7的水中發(fā)揮作用嗎洗衣服的時(shí)候加點(diǎn)白醋能使加酶洗衣粉更好地發(fā)揮作用嗎2 .加酶洗衣粉效果較好的原因是什么加的酶都是直接分解污漬的嗎3 .影響洗衣粉中酶活性的因素有哪些表面活性劑能讓酶活性變強(qiáng)嗎科學(xué)家是如何解決此類難題的影響加酶洗 衣粉洗滌效果的因素有哪些4 .什么是固定化技術(shù)固定化技術(shù)有何優(yōu)點(diǎn)固定化酶常用什么方法固定化細(xì)胞常用什么方法固定化細(xì)胞與固定化酶相比有什么優(yōu)勢(shì)化學(xué)結(jié)合法固定化酶會(huì)影響酶的活性嗎5 .固定化酵母細(xì)胞：包埋法用的載體有何特點(diǎn)常用的載體有哪些如何將酵母細(xì)胞活化海藻酸鈉在加熱溶化的時(shí)候要注意什么溶化后的海藻酸鈉能與酵母細(xì)胞直接混合嗎CaC

6、2溶液的作用是什么如何評(píng)價(jià)凝膠珠的質(zhì)量五、DNA的粗提取與鑒定1 . DNA粗提取的基因思路是什么2 . DNA在不同濃度的 NaCl溶解度有何規(guī)律在什么濃度下，DNA的溶解度最小如何控制NaCl的濃度使DNA溶解或析出DNA能溶于蒸儲(chǔ)水嗎3 .什么樣的實(shí)驗(yàn)材料適合提取DNA哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞適合嗎4 .為什么加入蒸儲(chǔ)水能使雞血細(xì)胞破裂5 .植物材料提取加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么6 .去除濾液中的雜質(zhì)可以有哪幾個(gè)方案實(shí)驗(yàn)室獲得高純度的DNA常用什么化學(xué)試劑7 .讓DNA從濾液中析出為何要用冷卻的95%酒精8 . DNA如何鑒定該試劑使用時(shí)如何操作顏色如何變化 六、植物有效成分的提取1 .植

7、物芳香油提取的方法有哪些各種提取方法適用的范圍是什么2 .水蒸氣蒸儲(chǔ)法的的原理是什么有哪些分類3 .用水蒸氣蒸儲(chǔ)法提取玫瑰精油的原理是什么提取流程是怎么樣的需要什么裝置怎么去除玫瑰精油中的水分4 .橘皮精油不用水蒸氣蒸儲(chǔ)法的原因是什么，用什么方法提取橘皮精油提取的流程是什么關(guān)鍵措施有哪些，有 什么作用怎么實(shí)現(xiàn)油水分離5 .胡蘿卜素的作用有哪些哪些材料可以用來提取胡蘿卜素6 .胡蘿卜素的特性有哪些根據(jù)此特性用什么方法來提取提取流程是怎樣的每一步操作需要注意的事項(xiàng)有哪些， 每一步操作的目的是什么7 .提取胡蘿卜素選用萃取劑的原則是什么選用什么萃取劑8 .影響萃取效率的主要因素是什么還有哪些因素也會(huì)

8、影響萃取效率9 .胡蘿卜素提取裝置是怎樣的有哪些安全措施怎么濃縮提取物10 .怎么鑒定提取的胡蘿卜素選修3現(xiàn)代生物科技專題專題1基因工程1 .基因工程又叫其原理是什么用于育種時(shí)有何優(yōu)點(diǎn)2 .不同生物的 DNA能拼接的原因是什么轉(zhuǎn)基因能在受體細(xì)胞中表達(dá)是因?yàn)槭裁? . “分子手術(shù)刀”是指什么簡稱在基因工程中用于該酶主要從哪獲得作用部位是哪里該酶識(shí)別的序列長度是 多少切割的結(jié)果是什么限制酶在選擇的時(shí)候有什么依據(jù)為何通常用兩種限制酶同時(shí)切割目的基因和運(yùn)載體4 . “分子縫合針”是指什么作用是什么可以分為哪兩類作用部位是哪里作用有何特點(diǎn)DNA聚合酶有何作用5 . “分子運(yùn)輸車”是指什么常用的運(yùn)載體有哪

9、些什么是質(zhì)粒質(zhì)粒需具備什么條件才能充當(dāng)“分子運(yùn)輸車”天 然的質(zhì)粒能直接做運(yùn)載體嗎6 .基因工程的基本操作程序主要包括哪四個(gè)步驟核心步驟是哪一步7 .什么是目的基因試舉例。獲得方法有哪3種8 .什么是基因文庫什么是基因組文庫什么是cDNA文庫cDNA文庫與基因組文庫有什么區(qū)別如何從基因文庫中獲取目的基因（什么是基因庫）9 . PCR的中文名稱是什么原理應(yīng)用的前提需要的條件有PCR過程需要解旋酶嗎模板鏈解旋所需能量是由ATP提供的嗎PCR大致過程經(jīng)過哪 3步每一步的溫度要求一樣嗎擴(kuò)增的結(jié)果是PCR用于提取目的基因時(shí)，循環(huán)幾次能得到等長的目的基因片段循環(huán)n次可以得到等長的目的基因片段多少個(gè)PCR在選

10、擇引物時(shí)有什么要求循環(huán)n次，需要加入某種引物多少個(gè)10 .什么樣的目的基因適合用化學(xué)方法合成11 . 一個(gè)完整的基因表達(dá)載體應(yīng)該包括哪些元件分別有什么作用畫出示意圖并標(biāo)注。（什么是起始密碼子什 么是終止密碼子）12 .什么是轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞常用方法有哪些分別適用于什么植物有何優(yōu)缺點(diǎn)13 .轉(zhuǎn)化動(dòng)物細(xì)胞一般用什么方法通常選用什么細(xì)胞作為受體細(xì)胞14 .轉(zhuǎn)化微生物細(xì)胞一般采用什么方法選擇大腸桿菌作為受體細(xì)胞有何優(yōu)勢(shì)如何使大腸桿菌處于感受態(tài)15 .目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是什么如何檢測(cè)以什么作為探針如何檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄 出了 mRNA檢測(cè)目的基因是否翻譯成了蛋白質(zhì)用什么方法16 .

11、除了分子水平的檢測(cè)，有時(shí)還要進(jìn)行什么水平的檢測(cè)例如17 .植物基因工程有哪些應(yīng)用試舉例說明。18 .動(dòng)物基因工程有哪些應(yīng)用試舉例說明。19 .基因工程獲得的藥物有哪些試舉例說明。20 .什么是基因治療要去除或改造缺陷基因嗎該方法是治療什么疾病最有效的手段一般有哪兩種方法21 .蛋白質(zhì)工程崛起的緣由是什么22 .蛋白質(zhì)工程的目標(biāo)是什么基本途徑是畫出流程圖。蛋白質(zhì)工程為何被稱為第二代基因工程有何應(yīng)用實(shí)例 專題2細(xì)胞工程1 .什么是細(xì)胞工程根據(jù)操作對(duì)象不同，可分為哪兩類2 .什么是脫分化愈傷組織的細(xì)胞有什么特點(diǎn)3 .植物組織培養(yǎng)的大致過程是什么基本原理是什么4 .什么是全能性細(xì)胞為何具有全能性是不是

12、所有細(xì)胞都具有全能性未離體的組織細(xì)胞不能表現(xiàn)全能性的原因 是什么5 . “胡蘿卜組織培養(yǎng)”要無菌操作的目的是什么切取含有形成層部分的原因是什么6 .植物組織培養(yǎng)的基本條件有哪些7 .植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基一般含有哪些成分對(duì)培養(yǎng)條件有何要求一定要避光培養(yǎng)嗎植物組織培養(yǎng)過程中需要 換培養(yǎng)基嗎生長素與細(xì)胞分裂素比例不同如何影響愈傷組織分化8 .什么是植物體細(xì)胞雜交基本原理是什么屬于哪種變異類型有何優(yōu)點(diǎn)實(shí)例9 .什么是原生質(zhì)體如何獲得如何判斷原生質(zhì)體制備是否成功誘導(dǎo)融合一般采用什么方法誘導(dǎo)融合成功的標(biāo)志 是如何判斷雜種細(xì)胞是否再生細(xì)胞壁（什么是原生質(zhì)層）10 .微型繁殖采用的是什么技術(shù)有哪些特點(diǎn)11 .

13、作物脫毒一般選用什么部分的細(xì)胞原因是什么（抗毒苗是用什么育種方法獲得的）12 .人工種子的組成是什么能用原生質(zhì)體或愈傷組織制作人工種子嗎人工種皮一般含有哪些成分人工種子有 哪些優(yōu)點(diǎn)13 .單倍體育種通常經(jīng)過哪2個(gè)關(guān)鍵步驟其原理是什么有何優(yōu)點(diǎn)14 .突變體如何獲得的如何加以利用15 .細(xì)胞產(chǎn)物的獲得需要將外植體培養(yǎng)成植株嗎實(shí)例16 .什么是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基本原理是什么17 .將成塊動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞的方法是什么用胃蛋白酶來達(dá)到分散目的嗎酶解的消化過程需要控制時(shí)間嗎分散成單個(gè)細(xì)胞的目的是什么18 .什么是細(xì)胞貼壁對(duì)培養(yǎng)器具有何要求19 .什么是接觸抑制如何解除癌細(xì)胞有接觸抑制嗎為什么20 .什么

14、是原代培養(yǎng)什么是傳代培養(yǎng)細(xì)胞分裂一次就一代嗎細(xì)胞傳至10-50代左右時(shí)可能會(huì)發(fā)生什么變化21 .動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)如何創(chuàng)設(shè)無菌、無毒的環(huán)境對(duì)營養(yǎng)有何特殊要求對(duì)溫度和pH有何要求對(duì)氣體環(huán)境有何要求22 .動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)有何實(shí)際應(yīng)用23 .什么是動(dòng)物核移植有哪兩各類型哪種更容易基本原理是什么克隆動(dòng)物屬于無性還是有性繁殖有何優(yōu)點(diǎn)是對(duì)供體100%的復(fù)制嗎24 .動(dòng)物體細(xì)胞核移植的大致過程是怎樣的供體細(xì)胞一般選用傳代10代以內(nèi)的原因是什么選擇幼齡動(dòng)物的原因是什么受體細(xì)胞一般選擇什么細(xì)胞有何優(yōu)點(diǎn)受體細(xì)胞去核的目的是什么25 .體細(xì)胞核移植技術(shù)有哪些應(yīng)用試舉例。還存在哪些問題26 .什么是動(dòng)物細(xì)胞融合最常用的誘導(dǎo)劑

15、是什么基本原理是什么大致過程是怎樣的融合的動(dòng)物細(xì)胞能發(fā)育成 完整個(gè)體嗎27 .單克隆抗體制備過程中小鼠需作何處理目的是什么細(xì)胞兩兩融合的結(jié)果有幾種兩次篩選的目的分別是什 么獲得抗體的方法有哪兩種28 .雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是什么有何應(yīng)用 專題3胚胎工程1 .什么是胚胎工程包括哪些常用技術(shù)2 .哺乳動(dòng)物精子的發(fā)生場(chǎng)所是哪里雄性動(dòng)物的生殖細(xì)胞的增殖時(shí)期是什么時(shí)候精子的發(fā)生過程大體經(jīng)過哪3個(gè)階段成熟精子的各部分是由什么分化而來3 .卵子的發(fā)生場(chǎng)所是哪里卵原細(xì)胞從何即開始增殖減數(shù)第一次分裂在什么時(shí)候完成的減數(shù)第二次分裂是在什么時(shí)候完成的兩次分裂是連續(xù)的嗎判斷卵子是否受精的標(biāo)志是什么為什么

16、一般只看到兩個(gè)極體4 . 一個(gè)卵泡中能形成幾個(gè)成熟的卵子排卵是指卵子從卵泡中排出，還是指卵泡從卵巢中排出剛排出的卵是成熟的卵子嗎它在母體的什么部位與精子受精5 .什么是受精作用包括哪兩個(gè)階段場(chǎng)所是哪里6 .受精前精子要作何準(zhǔn)備卵子要做何準(zhǔn)備畫出一個(gè)具備受精能力的卵母細(xì)胞示意圖。7 .防止多精入卵的兩道屏障分別是什么受精作用的實(shí)質(zhì)是什么完成的標(biāo)志是什么8 .受精卵的分裂方式是什么什么是卵裂期其特點(diǎn)是什么什么是桑棋胚桑棋胚的細(xì)胞屬于什么細(xì)胞胚胎細(xì)胞在什么時(shí)期開始分化構(gòu)成囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層細(xì)胞分別會(huì)發(fā)育成什么什么是孵化原腸胚已經(jīng)有了什么分化細(xì)胞分化在什么時(shí)期達(dá)到最大限度1 .試管牛是有性生殖還是

17、無性生殖克隆動(dòng)物呢2 .卵母細(xì)胞的采集哪 3種方法采集的卵母細(xì)胞能直接與獲能的精子受精嗎3 .精子的采集方法有哪3種采集的精子需作何處理有哪兩種方法分別適用于什么動(dòng)物4 .體外受精需要在什么溶液中進(jìn)行大致過程是怎樣的5 .哺乳動(dòng)物胚胎的培養(yǎng)液一般含有什么成分（六菜一湯）1 .什么是胚胎移植可供移植的胚胎有哪些來源該過程誰是供體誰是受體胚胎移植實(shí)際上是個(gè)什么過程其實(shí)質(zhì) 是什么胚胎工程的最后一道“工序”是6. 一般胚胎發(fā)育到什么程度可供移植人的胚胎一般在哪個(gè)發(fā)育階段移植2 .胚胎移植的優(yōu)勢(shì)是什么生理學(xué)基礎(chǔ)包括哪4個(gè)方面內(nèi)容3 .牛胚胎移植過程對(duì)供體和受體分別有何要求需要對(duì)供體和受體作何處理該過程用

18、到的激素是什么為了獲得 更多的早期胚胎還需要對(duì)供體作何處理用到的激素是什么什么是沖卵胚胎的保存需要什么條件4 .什么是胚胎分割胚胎分割技術(shù)屬于無性繁殖還是有性繁殖什么樣的胚胎適合進(jìn)行胚胎分割囊胚階段的胚胎 要進(jìn)行分割要特別注意什么鑒定性別取哪部分的細(xì)胞滋養(yǎng)層也需要均等分割嗎5 .胚胎干細(xì)胞的來源有哪些胚胎干細(xì)胞在形態(tài)和功能上分別有何特性有何應(yīng)用專題4生物技術(shù)的安全性和倫理問題1 .面對(duì)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的利和弊，我們的正確做法是什么2 .對(duì)待克隆人，我國政府的態(tài)度是什么什么是設(shè)計(jì)試管嬰兒3 .我國政府對(duì)待生物武器的態(tài)度是什么專題5生態(tài)工程1 .生態(tài)工程的目的是什么生態(tài)工程的優(yōu)點(diǎn)是什么2 .生態(tài)工程所遵

19、循的基本原理有哪些試舉例說明。選修1生物技術(shù)與實(shí)踐一、果酒和果醋的制作1 .果酒制作利用的微生物是酵母菌，該菌是兼性厭氧型的真菌（真核）。有氧條件：C6H12O6+6O2+6H2O- 6CO2+12H2O +能量（條件：酶）；無氧條件： C6H12。6-2C2H5OH+2CO2+能量（條件：酶，場(chǎng)所：細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)）。酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在1825C,pH大約在。2 .果醋制作利用的微生物是醋酸菌，該菌是一種好氧型細(xì)菌（原核），即使短時(shí)間中斷通入氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。糖源充足時(shí)：C6H1206f 3CH3COOH；缺少糖源時(shí)： C2H5OH +O2 -CH3COOH+H2O。醋酸菌的最適生

20、長溫度為3035 C , pH大約在。3 .實(shí)驗(yàn)流程：挑選葡萄沖洗榨汁一酒精發(fā)酵（果酒）一醋酸發(fā)酵（果醋）。裝置各部分功能：充氣口：在釀酒時(shí)先打開，后關(guān)閉；在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣。排氣口：在酒精發(fā)酵時(shí)用來排出C02的。出料口：用來取樣和出料的。制果酒時(shí)先通氣是為了讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖，建立種群優(yōu)勢(shì)；后斷氣是為了讓酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精。果酒制作 裝置保持通氣并提高溫度可用于制作果醋。4 .葡萄應(yīng)先沖洗再去梗，避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機(jī)會(huì)。家庭制作葡萄酒時(shí)，葡萄不能清洗得太干凈, 因?yàn)橹凭七^程需要的酵母菌來自葡萄表面的野生酵母菌。5 . 裝瓶時(shí)留有 1/3 的

21、空間是為了防止發(fā)酵液溢出污染瓶口，并且酵母菌可以有氧呼吸大量繁殖。6 . 用簡易裝置制作果酒適時(shí)擰松瓶蓋目的是放出CO2 ，防止爆瓶。不能擰開，防止雜菌污染。7 .防止發(fā)酵液被污染：榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈（可以用70%的酒精）；每次排氣時(shí)只需擰松瓶蓋，不要完全打開瓶蓋。8 .果酒檢測(cè)：嗅味和品嘗；顯微鏡觀察酵母菌；酸性條件下，重銘酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。果醋檢測(cè)：觀察菌膜的形成；嗅味和品嘗；檢測(cè)和比較醋酸發(fā)酵前后的pH;顯微鏡觀察發(fā)酵液中是否有醋酸菌。9 . 葡萄酒一般呈深紅色的原因：紅葡萄皮的色素進(jìn)入發(fā)酵液。二、腐乳的制作1 .腐乳制作的微生物主要是毛霉（還有青霉、酵母、曲霉等）。原理

22、：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。溫度： 1518 。表面的“皮”是毛霉的匍匐菌絲。2 .腐乳制作的流程：讓豆腐上長出毛霉一加鹽腌制一加鹵湯裝瓶一密封腌制。3 . 腐乳制作的豆腐一般選擇含水量 70%左右的豆腐，含水量過高不易成形，含水量過低不利于毛霉生長。4 .加鹽的作用是：析出豆腐中的水分，使豆腐塊變硬；抑制微生物生長，發(fā)避免豆腐塊腐敗變質(zhì)。（調(diào)味；浸提毛霉菌絲中的蛋白酶）。鹽的用法用量：逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。5 . 加酒可以抑制微生物的生長，同時(shí)能使腐乳具有獨(dú)特的香味。含量一般

23、控制在 12%左右。酒精含量過高，腐乳成熟的時(shí)間將會(huì)延長；酒精含量過低，不足以抑制微生物生長，可能導(dǎo)致豆腐腐敗。6 . 香辛料可以調(diào)制腐乳的風(fēng)味，也具有防腐殺菌的作用。7 .防止雜菌污染：玻璃瓶要洗凈并煮沸消毒；裝瓶時(shí)，操作要迅速小心，瓶口要密封；密封時(shí)，最好將瓶口通過酒精燈火焰，防止瓶口被污染。三、微生物的分離和培養(yǎng)1. 培養(yǎng)基是人們按照微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。一般成分：水、碳源（提供碳元素的物質(zhì)）、氮源（提供氮元素的物質(zhì)）和無機(jī)鹽。培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對(duì) pH 、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。2. 培養(yǎng)基按狀態(tài)分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基，可根據(jù)是否加入

24、瓊脂來判斷。按 功能可分為基本培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。3. 消毒是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包括芽抱和抱子）。消毒方法：煮沸消毒 法：日常生活中的物品消毒；巴氏消毒法：對(duì)于一些不耐高溫的液體，如牛奶；化學(xué)試劑消毒法：如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等。4. 滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽抱和抱子。滅菌方法：灼燒滅菌：如接種環(huán)、接種針或 其他金屬用具；干熱滅菌：如玻璃器皿、金屬用具等；高壓蒸汽滅菌：如培養(yǎng)基、玻璃器皿等。5. 固體培養(yǎng)基配制的一般步驟：計(jì)算-稱量溶化-滅菌-倒平板。6. 培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到 50 左右

25、時(shí)（因?yàn)榄傊?44 以下會(huì)凝固），才能用來倒平板。可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。錐形瓶瓶口要通過火焰灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。平板冷凝后倒置是因?yàn)槠桨謇淠?，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。將空白平板置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，若無雜菌生長即為合格的培養(yǎng)基。在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。7. 平板劃線操作

26、時(shí),操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，要從上一次劃線的末端開始劃線是因?yàn)閯澗€后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少

27、，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。8. 微生物純化常用的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，后者適合計(jì)數(shù)。將未稀釋的菌液吸取 1mL 加入到 9mL 無菌水中即可稀釋 10 倍。9. 測(cè)定微生物數(shù)量常用方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板菌落計(jì)數(shù)法等。菌落是由一個(gè)細(xì)胞繁殖 而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體。一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。每克樣品中的菌株數(shù)=（C+V） X M, C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)， V 代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（ mL ）， M 代表稀釋倍數(shù)。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩 個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。10

28、. 實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、 pH 等），同時(shí)抑制或阻止其他微生 物生長。在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培 養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。11. 設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。微生物計(jì)數(shù)時(shí)，通常設(shè)置空白對(duì)照來排除培養(yǎng)基污染帶來的誤差。12. 分解尿素的微生物可以用以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基篩選。在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)， pH 升高。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果

29、pH 升高，指示劑將變紅。13. 纖維素酶是一種復(fù)合酶， 一般認(rèn)為它至少包括三種組分， 即 C1 酶、 CX 酶和葡萄糖苷酶， 前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。篩選纖維素分解菌可以采用剛果紅染色法。剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅 - 纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。四、酶的研究與應(yīng)用1. 加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉。目前常用的酶制劑有：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶，其中，應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。2. 加酶洗衣粉可以使

30、污漬中的大分子水解成小分子，從而使污跡容易從衣物上脫 落，因而具有更好的去污能力。3. 溫度、酸堿度和表面活性劑都會(huì)影響酶的活性，將酶直接加入洗衣粉中，酶很快就會(huì)失活?？茖W(xué)家通過基因工程生產(chǎn)出了能夠耐酸、耐堿、忍受表面活性劑和較高溫度的酶，并且通過特殊化學(xué)物質(zhì)將酶包裹使其與洗衣粉的其他成分隔離。4. 固定化酶和固定化細(xì)胞技術(shù)是利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)。這樣使酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離，還可以反復(fù)利用。包括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。酶更適合采用化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法固定化，而細(xì)胞多采用包埋法固定化。5. 固定化酵母細(xì)胞分析：酵母活化：讓處于休眠狀態(tài)的酵母菌

31、重新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)。海藻酸鈉：要小火或不間斷加熱并不斷攪拌，冷卻到室溫再與酵母細(xì)胞混合。CaC2溶液：使海藻酸鈉形成凝膠珠（Ca2+能穩(wěn)定海藻酸鈉凝膠的結(jié)構(gòu)，是一種交聯(lián)劑）。凝膠珠質(zhì)量：凝膠珠呈現(xiàn)球形或橢球形，顏色呈淡黃色（如果凝膠珠不是球形或橢球形，說明海藻酸鈉濃度過高；如果凝膠珠顏色過淺呈白色，說明海藻酸鈉的濃度偏低，固定的酵母細(xì)胞數(shù)目較少。五、 DNA 的粗提取與鑒定粗提取的基因思路是利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)等方面的差異，提取DNA,去除其他成分。在濃度為L 的 NaCl 溶液中溶解度最低，在蒸餾水和 2mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度都較高。3 .將DN

32、A與蛋白質(zhì)分離有3種方案：通過控制NaCl的濃度使 DNA溶解或析出；直接在濾液中加入嫩肉粉，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能夠分解蛋白質(zhì)；將濾液放在6075 c的恒溫水浴箱中保溫。4 . 提取 DNA 的實(shí)驗(yàn)材料：原則上，凡是含有 DNA 的生物材料都可以考慮，但是，選用 DNA 含量相對(duì)較高的生物組織，成功的 可能性更大。動(dòng)物材料常選用雞血紅細(xì)胞，植物材料常選用菜花。5 . 在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水（雞血細(xì)胞就會(huì)吸水破裂），同時(shí)用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可。6 . 利用植物材料提取 DNA 時(shí)，需要加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分地?cái)嚢韬脱心?，過濾后收集研磨液。洗滌劑能夠瓦解細(xì) 胞膜，食

33、鹽能夠溶解 DNA 。7 .實(shí)驗(yàn)室獲得高純度的DNA常用十六烷基溟化錢（CTAB）、十二烷基硫酸鈉（SDS5）或吐溫等化學(xué)試劑。8 .冷卻的95%酒精的作用：抑制核酸水解酶活性，防止 DNA分子降解；降低分子運(yùn)動(dòng)，易于形成沉淀析出；低溫有利于 增加 DNA 分子柔韌性，減少斷裂。鑒定：將 DNA 溶于 2mol/L 的 NaCl 溶液中，然后加入二苯胺試劑，沸水中加熱變藍(lán)。二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用。六、植物有效成分的提取1 .蒸儲(chǔ)法 壓榨法 萃取法。蒸微法一般用于難溶于水，揮發(fā)性較強(qiáng)，化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定加熱不易分解的物質(zhì)提取。壓榨法一般 用于難溶于水，化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，受熱易分解，或者原料加熱易焦糊的

34、物質(zhì)提取。萃取法一般用于提取物難溶于水，易溶于有 機(jī)溶劑的物質(zhì)提取。2 .水蒸氣蒸儲(chǔ)法的原理是利用水蒸氣將揮發(fā)性較強(qiáng)的的植物芳香油攜帶出來，形成油水混合物，冷卻后，混合物又會(huì)重新分出 油層和水層。水蒸氣蒸儲(chǔ)法分為：水中蒸儲(chǔ)、水上蒸儲(chǔ)、水氣蒸儲(chǔ)。3 .玫瑰精油的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，能隨水蒸氣一同蒸儲(chǔ)。流程詳見教材P73,圖6-1。提取需要蒸儲(chǔ)裝置、冷凝裝置、油水分離裝置三部分。剛蒸儲(chǔ)得到的產(chǎn)物是乳白色的乳濁液，為油水混合物，先加入NaCl增大鹽溶液濃度，即可出現(xiàn)油水分離，放出分液漏斗下方的水層，再加入一些無水硫酸鈉即可除去殘余水分，得到玫瑰精油了。4 .橘皮精油的有效成 分在

35、用水蒸氣蒸儲(chǔ)時(shí)會(huì)發(fā)生部分水解，同時(shí)使用水中蒸儲(chǔ)時(shí)會(huì)發(fā)生原料焦糊的問題。提取流程詳見教材P74,圖6-4。為了提高橘皮精油的出油率，需要先將橘皮干燥去水，并用石灰水浸泡。浸泡后的橘皮需要用流水漂洗去除石灰水。為使橘皮油易與水分離，需要加入相當(dāng)于橘皮質(zhì)量的NaHCO3和5%Na2SO4,并調(diào)節(jié)pH至78。5 .胡蘿卜素在人或動(dòng)物體內(nèi)被氧化成兩分子維生素A。微生素 A可以治療夜盲癥，幼兒發(fā)育不良，還可以作為食用色素，治療癌細(xì)胞等。工業(yè)上一般從植物、巖藻、發(fā)酵的微生物中提取胡蘿卜素。6 .胡蘿卜素是橘黃色結(jié)晶，化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不溶于水，難溶于乙醇，易溶于石油醛等有機(jī)溶劑。故采用有機(jī)溶劑萃取的方法提取

36、胡蘿卜素。提取流程詳見教材P78,圖6-6。胡蘿卜的粉碎和干燥都是為了提高萃取效率，粉碎越小越好，干燥要注意控制時(shí)間和溫度不要太高，干燥時(shí)間太長和溫度太高會(huì)導(dǎo)致胡蘿卜素分解。萃取過程要注意萃取劑的性質(zhì)和用量還有用水浴加 熱控制萃取溫度，以及用冷凝回流裝置防止萃取劑揮發(fā)引發(fā)爆炸危險(xiǎn)。萃取結(jié)束需要過濾去除不溶物，后經(jīng)過濃縮裝置的濃縮 就可以得到胡蘿卜素了。7 .因?yàn)楹}卜素不溶于水，難溶于乙醇，故采用有機(jī)溶劑提取，并且使用水不溶性有機(jī)溶劑。由于胡蘿卜素化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，為 了提高萃取效率可以采用高沸點(diǎn)的石油酷有機(jī)溶劑。8 .萃取的效率主要取決于萃取劑的性質(zhì)和使用量，同時(shí)還受到原料顆粒大小、緊密程度、含

37、水量、萃取的溫度和時(shí)間等條件的影響。9 .萃取裝置詳見教材P78圖6-7提取裝置和教材P74圖6-2蒸儲(chǔ)濃縮裝置。需要水浴加熱和冷凝回流裝置來防止萃取劑的揮發(fā)引發(fā)爆炸。萃取液的濃縮可以直接使用蒸儲(chǔ)裝置。10 .鑒定胡蘿卜素用紙層析法。選彳3現(xiàn)代生物科技專題專題1基因工程重組技術(shù)的基本工具1 .基因工程又叫 DNA重組技術(shù)，原理是基因重組。優(yōu)點(diǎn)是可以打破物種界限，定向改造生物的性狀。2 .不同生物的 DNA能拼接的原因是 DNA都是雙螺旋結(jié)構(gòu)、都由四種脫氧核昔酸組成。轉(zhuǎn)基因能在受體細(xì)胞中表達(dá)是因 為地球上的所有生物幾乎共用同一套遺傳密碼子。3 .“分子手術(shù)刀”是指限制性核酸內(nèi)切酶，簡稱限制酶。在

38、基因工程中用于切割目的基因和運(yùn)載體。該酶主要從原核生物中獲得。作用部位是兩個(gè)核昔酸之間的磷酸二酯鍵。該酶識(shí)別的序列長度是4、5、6、8個(gè)核昔酸，切割的結(jié)果是產(chǎn)生平末端或黏性末端。4 . “分子縫合針”是指 DNA連接酶，作用是連接雙鏈DNA片段?？梢苑譃?EcoliDNA連接酶和 T4DNA連接酶兩類,前者只能連接黏性末端，后者能連接黏性末端和平末端。作用部位是磷酸二酯鍵。DNA聚合酶的作用是將脫氧核昔酸聚合成DNA長鏈。5 . “分子運(yùn)輸車”是指運(yùn)載體，常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒、入噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒等。質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核 DNA之外的，并具有自我復(fù)制能力的很小的雙鏈

39、環(huán)狀DNA分子。作為載體的質(zhì)粒應(yīng)該具備的條件：能在受體細(xì)胞中自我復(fù)制，穩(wěn)定保存；有一個(gè)或多個(gè)限制酶切點(diǎn)，便于插入目的基因；具有某些標(biāo)記基因， 便于篩選；必須是安全的，不會(huì)對(duì)受體細(xì)胞有害?；蚬こ痰幕静僮鞒绦? .基因工程的基本操作程序主要包括四個(gè)步驟：獲取目的基因；構(gòu)建表達(dá)載體（核心）；導(dǎo)入受體細(xì)胞；目 的基因檢測(cè)與鑒定。2 .目的基因主要是編碼蛋白質(zhì)的基因，如，與生物抗逆性相關(guān)的基因、與優(yōu)良品質(zhì)相關(guān)的基因。獲得方法有：從基 因文庫中獲取目的基因；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因；用化學(xué)方法直接人工合成。3 .將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生

40、物的不同的基因，稱為基因文庫。若包含了一種生物的所有基因，這種基因文庫叫做基因組文庫；若只包含了一種生物的一部分基因， 這種基因文庫叫做部分基因文庫，如cDNA文庫?？梢愿鶕?jù)目的基因的有關(guān)信息，如基因的核昔酸序列、基因的功能等特性從基因文庫中獲取目的基因。（基因庫是一個(gè)種群中所有個(gè)體所含有的全部基因）。4 . PCR的中文名稱是多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，原理是DNA復(fù)制。應(yīng)用的前提是要有一段已知目的基因的核昔酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。需要的條件：熱穩(wěn)定 DNA聚合酶（Taq酶）、*M板、4種脫氧核昔酸、2種引物。大致過程經(jīng)過 變性-復(fù)性-延伸 3個(gè)步驟。擴(kuò)增的結(jié)果是目的基因呈指數(shù)形式擴(kuò)增（約為小

41、，其中n為擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)）。5 .基因比較小，核昔酸序列已知，可以通過DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成。6 .一個(gè)完整的基因表達(dá)載體應(yīng)該包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因。啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNAo終止子也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停下來。標(biāo)記基因的作用是便于重組載體的鑒定和選擇。（起始密碼子是指mRNA上的3個(gè)堿基，作為翻譯的起點(diǎn)；終止密碼子是翻譯的終點(diǎn)）7 .目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過客中，稱為轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞常用的方法： 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：適用于雙子葉植物、裸子植

42、物和少數(shù)單子葉植物，比較經(jīng)濟(jì)有效。基因槍法：適用于單子葉植物， 但成本較高?；ǚ酃芡ǖ婪ǎ哼m用于被子植物，比較簡便經(jīng)濟(jì)。8 .轉(zhuǎn)化動(dòng)物細(xì)胞一般用顯微注射法，常用受精卵作為受體細(xì)胞。9 .轉(zhuǎn)化微生物細(xì)胞一般受用感受態(tài)法：用Ca2+ （一般用CaC2溶液）處理微生物，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中的DNA分子的生理狀態(tài)。選用大腸桿菌作為受體是因?yàn)槠浞敝晨?、為單?xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少。10 .目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因。檢測(cè)方法是DNA分子雜交，通常選用單鏈的 DNA作為探針。檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA的方法是 DNA-RNA分子雜交。檢測(cè)目的

43、基因是否翻譯成蛋白質(zhì)的方法是抗原-抗體雜交。11 .除了分子水平的檢測(cè)，有時(shí)還要進(jìn)行個(gè)體水平的檢測(cè)，例如，轉(zhuǎn)基因抗蟲棉還需要做抗蟲實(shí)驗(yàn)?；蚬こ痰膽?yīng)用1 .植物基因工程的應(yīng)用實(shí)例有：抗蟲；抗病；抗逆；改良品質(zhì)。2 .動(dòng)物基因工程的應(yīng)用實(shí)例有：提高生長速度；改良品質(zhì)；生產(chǎn)藥物；作器官供體。3 .基因工程獲得的藥物有：胰島素、白細(xì)胞介素、干擾素、乙肝疫苗等。（干擾素是白細(xì)胞產(chǎn)生的一種糖蛋白）。4 .基因治療是把正常人的基因?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能，從而達(dá)到治療疾病的目的，這是治療遺傳病的最有效的手段。分為兩類：體外基因治療：在體外完成轉(zhuǎn)基因再輸入患者體內(nèi)；體內(nèi)基因治療：直接向人 體

44、組織細(xì)胞中轉(zhuǎn)移基因。蛋白質(zhì)工程的崛起1 .蛋白質(zhì)工程崛起的緣由是：基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)，這些天然蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能符合 特定物種生存的需要，卻不一定完全符合人類生產(chǎn)和生活的需要。2 .蛋白質(zhì)工程的目標(biāo)是根據(jù)人們對(duì)蛋白質(zhì)功能的特定需求，對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分子設(shè)計(jì)。它的基因途徑是：從預(yù)期 的蛋白質(zhì)功能出發(fā)-設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)-推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列-找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核昔酸序列（基因）。蛋白 質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行 改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類生產(chǎn)和生活的需求。蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基

45、礎(chǔ)上，延伸出來的第二 代基因工程。應(yīng)用實(shí)例：速效型胰島素、蛋白質(zhì)電子原件等。專題2細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程1 .細(xì)胞工程是指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法，通過細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平上的操作，按照人的意愿改 變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品的一門綜合科學(xué)技術(shù)。根據(jù)操作對(duì)象不同，可以分為植物細(xì)胞工程和動(dòng)物細(xì)胞工 程。2 .脫分化是已經(jīng)分化的細(xì)胞失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過程。愈傷組織細(xì)胞特點(diǎn)：細(xì)胞排列疏松 而無規(guī)則，高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。3 .植物組織培養(yǎng)就是在無菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予 適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)

46、其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。大致過程：外植體經(jīng)脫分化形成愈傷組織，愈 傷組織再分化形成胚狀體或叢芽，再經(jīng)生長成為完整植株?；驹硎侵参锛?xì)胞的全能性。4 .細(xì)胞的全能性是指已經(jīng)分化的細(xì)胞仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。理論上具有某種生物全部遺傳信息的任何一個(gè) 細(xì)胞都具有全能性。未離體的組織細(xì)胞不能表現(xiàn)全能性的原因是基因進(jìn)行了選擇性表達(dá)。5 . “胡蘿卜組織培養(yǎng)”要無菌操作的目的是防止雜菌與培養(yǎng)物爭(zhēng)奪營養(yǎng)，雜菌產(chǎn)生的有害物質(zhì)會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)物死亡。切 取胡蘿卜塊時(shí)強(qiáng)調(diào)要切取含有形成層部分，原因是這部分容易誘導(dǎo)形成愈傷組織。6 .植物組織培養(yǎng)的基本條件有離體、無菌、一定的營養(yǎng)、溫度、pH、光

47、照等。7 .植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基一般含有無機(jī)營養(yǎng)成分、有機(jī)營養(yǎng)成分、激素（生長素和細(xì)胞分裂素）、瓊脂四部分。還要 注意控制好溫度、pH、光照（誘導(dǎo)愈傷組織一般要避光）等。8 .植物體細(xì)胞雜交就是將不同種的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技 術(shù)?；驹硎羌?xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性。屬于染色體（數(shù)目）變異。優(yōu)點(diǎn)是可以克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的 障礙。實(shí)例有白菜-甘藍(lán)、胡蘿卜-羊角芹等。9 .原生質(zhì)體是指去掉細(xì)胞壁的植物細(xì)胞。獲得方法是用纖維素酶和果膠酶處理。去壁時(shí)應(yīng)該在等滲或高滲溶液中進(jìn)行， 防止原生質(zhì)體吸水漲破。誘導(dǎo)融合的方法一般有兩類：物理方法：離心、振

48、動(dòng)、電擊等；化學(xué)方法：用聚乙二醇 作為誘導(dǎo)劑。誘導(dǎo)成功的標(biāo)志是雜種細(xì)胞再生細(xì)胞壁（可通過觀察雜種細(xì)胞是否會(huì)吸水漲破來判斷成功與否）。10 .微型繁殖采用的是植物組織培養(yǎng)技術(shù)，優(yōu)點(diǎn)有高效性、可以保持親本的優(yōu)良特性。11 .作物脫毒一般選用植物的莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)，原因是該部分可能不帶病毒。（抗毒苗是通過基因工程獲得的）。12 .人工種子是以植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等為材料，經(jīng)過人工薄膜包裝得到的種子。人工種 皮一般含有適量養(yǎng)分、無機(jī)鹽、有機(jī)碳源、農(nóng)藥、抗生素、有益菌、植物生長調(diào)節(jié)劑等。人工種子的優(yōu)點(diǎn)有可以完 全保持優(yōu)良品種的遺傳特性；不受季節(jié)、氣候和地域限制；可以方便地貯藏和運(yùn)

49、輸。13 .單倍體育種的 2個(gè)關(guān)鍵步驟：花藥離體培養(yǎng)（獲得單倍體）；人工誘導(dǎo)染色體加倍（使單倍體可育）。其原理 是染色體（數(shù)目）變異。優(yōu)點(diǎn)是可以明顯縮短育種年限（一般得到是純合體）。14 .在作物育種中，可以對(duì)植物的愈傷組織進(jìn)行化學(xué)或物理的誘變處理，促使其發(fā)生突變，再通過分化形成植物，從這 些植物中篩選出高抗、高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的突變體，就可以培育成新品種。15 .細(xì)胞產(chǎn)物的獲得一般需要將外植體培養(yǎng)到愈傷組織階段即可，不需要培養(yǎng)成植株。實(shí)例有人參皂玳、紫草素等。動(dòng)物細(xì)胞工程1 .動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是從動(dòng)物機(jī)體取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長 和增殖?；驹硎羌?xì)胞

50、增殖。2 .將成塊動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞的方法是用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理。目的是解除細(xì)胞間的接觸抑制，還有利于 細(xì)胞從培養(yǎng)液中獲得營養(yǎng)物質(zhì)。3 .懸液中分散的細(xì)胞很快會(huì)貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。這要求培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒，易于貼附。4 .當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。解除方法是用胰 蛋白酶或膠原蛋白酶處理。癌細(xì)胞沒有接觸抑制，是由癌細(xì)胞表面糖蛋白減少所致。10505 .人們通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。一般來說，細(xì)胞在傳到 代左右時(shí)，增殖會(huì)逐漸緩慢，以至于完全停止，部分細(xì)胞的細(xì)胞核型

51、可能會(huì)發(fā)生變化。目前使用的或冷凍保存的正常 細(xì)胞通常為10代以內(nèi)，以保持細(xì)胞正常的二倍體核型。6 .動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：無菌、無毒的環(huán)境：培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理、培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素、定 期更換培養(yǎng)液。營養(yǎng)：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，特別要加入血清、血漿等一些天然成分。溫度和pH:哺乳動(dòng)物多以±C為宜，pH為。氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2 （ CQ的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH）。7 .動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用實(shí)例：獲得生物制品：如病毒疫苗、干擾素等；檢測(cè)有毒物質(zhì)；用于生理、病理、藥理 研究。8 .動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核

52、的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚 胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。分為胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植兩種類型。由于動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程序 低，恢復(fù)全能性相對(duì)容易。基本原理是動(dòng)物細(xì)胞核的全能性?？寺?dòng)物屬于無性繁殖，優(yōu)點(diǎn)是可以保持供體親本的優(yōu) 良特性。克隆動(dòng)物并不是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物100%的復(fù)制，因?yàn)楹送膺€有少量DNA,另外，后代個(gè)體的表現(xiàn)還受環(huán)境影響。9 .動(dòng)物體細(xì)胞核移植：供體細(xì)胞一般選用傳代10代以內(nèi)的，是因?yàn)?10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。一般選擇幼齡動(dòng)物的、分化程度低的組織細(xì)胞作為供體更易于培養(yǎng)。受體細(xì)胞一般選擇MII期的卵母細(xì)胞（因?yàn)镸II期卵母細(xì)胞核的位置靠近

53、第一極體，用微型吸管可一并吸出細(xì)胞核與第一極體；卵母細(xì)胞中含有核全能性表達(dá)所需的 營養(yǎng)物質(zhì)）。10 .體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用實(shí)例：加速家畜遺傳改良進(jìn)程、保護(hù)瀕危物種、作為生物反應(yīng)器、作為器官移植供體等。存在的問題有：成功率仍然比較低，克隆動(dòng)物還存在健康問題。11 .動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。基本原理是細(xì)胞膜的流動(dòng)性。優(yōu)點(diǎn)是突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。誘導(dǎo)融合常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒、電激等。12 .單克隆抗體制備過程中小鼠需作免疫處理，目的是讓其體內(nèi)形成相應(yīng)的效應(yīng)B細(xì)胞。細(xì)胞兩兩融合的結(jié)果有3種：B-B、瘤-

54、瘤、雜交瘤。需要兩次篩選：第一次篩選是為了獲得雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選是為了獲得能產(chǎn)生單一性抗體的 雜交瘤細(xì)胞。13 .雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是既能產(chǎn)生抗體又能無限增殖。單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高、并可能大量制備。具 體應(yīng)用有：作為診斷試劑：如“早早孕診斷試劑盒”，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。用于治療疾病和運(yùn) 載藥物：如“生物導(dǎo)彈”，借助單克隆抗體的導(dǎo)向作用。專題3胚胎工程 體內(nèi)受精和早期胚胎發(fā)育1 .胚胎工程是指對(duì)動(dòng)物早期胚胎或配子所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù)，如體外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎 干細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)。2 .哺乳動(dòng)物精子的發(fā)生場(chǎng)所是睪丸，雄性動(dòng)物生殖細(xì)胞的增殖時(shí)期是從

55、初情期（相當(dāng)于人的青春期）開始直到生殖機(jī)能衰退。精子的發(fā)生過程大體經(jīng)過3個(gè)階段：第一階段：精原細(xì)胞經(jīng)過數(shù)次有絲分裂，產(chǎn)生大量的精原細(xì)胞，部分形成初級(jí)精母細(xì)胞；第二階段：初級(jí)精母細(xì)胞連續(xù)進(jìn)行兩次細(xì)胞分裂形成精細(xì)胞；第三階段：精細(xì)胞變形成為精 子。細(xì)胞核變?yōu)榫宇^的主要部分，高爾基體發(fā)育為頭部的頂體，中心體演變?yōu)榫拥奈?，線粒體聚集在尾的基部形 成線粒體鞘，細(xì)胞內(nèi)的其他物質(zhì)濃縮為球狀叫做原生質(zhì)滴。3 .卵子的發(fā)生是在雌性動(dòng)物的卵巢內(nèi)完成的。卵原細(xì)胞從動(dòng)物的胚胎性別分化以后（胎兒期），即開始通過有絲分裂增殖。減數(shù)第一次分裂是在雌性動(dòng)物排卵前后完成的，減數(shù)第二次分裂是在精子和卵子結(jié)合的過程中完成的。兩

56、次分 裂是不連續(xù)的。4 .一個(gè)卵泡中能形成一個(gè)成熟的卵子。排卵是指卵子從卵泡中排出。剛排出的卵不是成熟的卵子，它在母體的輸卵管 內(nèi)與精子受精。5 .受精是精子與卵子結(jié)合形成合子（即受精卵）的過程，它包括受精前的準(zhǔn)備階段和受精階段。自然條件下，受精是 在雌性輸卵管內(nèi)完成的。6 .受精前精子要獲能，卵子要達(dá)到減數(shù)第二次分裂的中期。7 .防止多精入卵的兩道屏障：透明帶反應(yīng)：在精子觸及卵黃膜的瞬間，會(huì)產(chǎn)生阻止后來的精子進(jìn)入透明帶的生理反 應(yīng)；卵細(xì)胞膜反應(yīng)：精子入卵后，卵細(xì)胞膜會(huì)立即發(fā)生一種生理反應(yīng)，拒絕其他精子再進(jìn)入卵內(nèi)。受精作用的實(shí)質(zhì) 是精子的核與卵細(xì)胞的核相融合的過程。完成的標(biāo)志是在卵黃膜和透明帶的間隙可以觀察到兩個(gè)極體（第一極體一般 不再繼續(xù)分裂）。8 .受精卵的分裂方式是有絲分裂。胚胎發(fā)育的早期有一段時(shí)間是在透明帶內(nèi)進(jìn)行的，稱為卵裂期。其特點(diǎn)是：細(xì)胞分裂方式為有絲分裂，細(xì)胞的數(shù)量不斷