1、測定復(fù)方魚腥草片中金絲桃苷的含量【摘要】目的用RP-HPL(法測定復(fù)方魚腥草片中金絲桃苷的含量。方法HPLC用外標(biāo)一點法，Kromasil C-18柱，乙腈-%磷酸溶液(18:82)為流動相， 柱溫為30C,流速為/min,入=360nm結(jié)果 金絲桃苷在卩g范圍內(nèi)呈良好線性, 回歸方程為丫=,R2=,平均加樣回收率,RSD%(n=9)。結(jié)論 方法簡便、準(zhǔn)確，專 屬性強(qiáng),測定結(jié)果重復(fù)性好。為復(fù)方魚腥草片中魚腥草的定量分析提供了科學(xué)有 效的方法。【關(guān)鍵詞】復(fù)方魚腥草片；金絲桃苷;HPLC【Abstract 】 Objective To establish the method for detemi

2、ning the content of hyperoside in Fufang Yux in gcao Pio n by RP-HPLC.Methods Using Kromasil C18Colu mn, % phosphoricacidsoluti on (18:82)as the mobile phase,detecti on wavele ngth as 360nm and colum n temperature as 30°C . The flow rate was / The calibrati on curvewas linear at a range of 卩 gf

3、or the hyperosideand linear equation was Y= The averagerecovery was % and the related sta ndard deviati on( RSD) was %(n=9). Con clusi onThis method was simple and accurate andproper,which can be provide for scie ntific qua ntitative an alysis method of hyeroside in Fufang Yux in gcao Pion,and the r

4、eduplicate of the result was good.【Key words 】fufang yux in gcao tablet; hyperoside;RP-HPLC復(fù)方魚腥草片為中國藥典收載品種，亦為民間常用藥，具有清熱解毒 的功效，用于外感風(fēng)熱所致的急喉痹、急乳蛾，癥見咽部紅腫、咽痛；急性咽炎、 急性扁桃體炎見上述癥候者。本方由魚腥草、黃苓、金銀花、連翹等5味中藥經(jīng)提取加工制成。據(jù)現(xiàn)行藥典及多數(shù)文獻(xiàn)的報道，對復(fù)方魚腥草片的質(zhì)量控制多以 黃苓苷作為指標(biāo)進(jìn)行研究。而在實際處方中，魚腥草所占的量高達(dá)一半以上，為君 藥,故控制其中的魚腥草的含量極其必要?，F(xiàn)經(jīng)實驗論證，對方中的魚腥草

5、中所含 的金絲桃苷的含量測定方法進(jìn)行方法學(xué)研究，認(rèn)為線性、重復(fù)性、回收率、精密 度等均較理想。1 儀器與試藥Agile nt 1100 系列高效液相色譜儀、G1322A(DEGASSE溶劑脫氣器、 G1311A(QuatPump四元泵、G1313(ALS)自動進(jìn)樣器、G1316A(COLOM柱溫箱、 G1315B(DAD檢測器及Agile nt工作站;UV-可見紫外分光光度計(SHIMADZU)乙腈為色譜純,其余均為分析純；對照品金絲桃苷Hyperoside(批號1521-20XX02) 購于中國藥品生物制品檢定所；樣品復(fù)方魚腥草片由海正藥業(yè)提供(批號為 050301,050302,05030

6、3)。2 測定方法的研究測定波長的確定取金絲桃苷的甲醇溶液做光譜圖測定，在360nm處有最大吸收，故檢測波長選定360nm流動相的選擇根據(jù)文獻(xiàn)報道及中國藥典的采用的流動相，比較了乙腈-甲醇-四氫呋喃(1：1：)；(2)乙腈-%磷酸(16:84),并設(shè)定柱溫為30C。根據(jù)上述二種流動相的實驗結(jié)果，認(rèn)為流動相(2)較理想。經(jīng)調(diào)整，將”色 譜條件與系統(tǒng)適用性試驗”確定為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-%磷酸(W/V)(18:82)為流動相；流速為/min;檢測波長:360nm;柱溫30C。理論板數(shù)按 金絲桃苷峰計算應(yīng)不低于4000。色譜圖1、2、3。圖1金絲桃苷對照品色譜圖2復(fù)方魚腥草片樣品圖

7、圖3缺魚腥草陰性樣品圖提取方法選擇經(jīng)查閱相關(guān)資料，對提取方法、提取溶劑、溶劑用量、提取時間進(jìn)行考察，采用正交表L9(34)進(jìn)行實驗。見表1,2。表1 復(fù)方魚 腥草片含量測定法正交試驗的因素表 2復(fù)方魚腥草片含量測定法正交試驗的計算從對金絲桃苷進(jìn)行正交試驗的簡單計算來看，其中提取方法的影響相對較為 明顯，它的極差最大，其余各項的極差小，說明這些因素對金絲桃苷幾乎沒有什么 影響。結(jié)合經(jīng)濟(jì)和環(huán)保等因素以及相對比較考慮，認(rèn)為最佳的提取方案為采用60% 的乙醇，加入樣品50倍量的溶劑，回流提取40min。按此條件，又對同一批樣品進(jìn) 行復(fù)核試驗，根據(jù)復(fù)核試驗的結(jié)果，金絲桃苷的平均含量為/g,與正交試驗中的

8、最 大值/g相比較提高%，由此證明所選最佳方案比較合理的。標(biāo)準(zhǔn)曲線、定量限、檢測限將對照品金絲桃苷配制成不同濃度的溶液,如表3。表3線性關(guān)系考察對照品溶液及供試品溶液的制備對照品溶液的配制取經(jīng)真空干燥24h的金絲桃苷對照品，精密稱定,置50ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻備用。精密吸取上述對照 品溶液1ml,置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻,制成每1ml含金絲桃苷 25卩g的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備 取本品20片,除去包衣,精密稱定,研細(xì)，取， 置圓底燒瓶中，精密加入60%L醇50ml,稱定重量，加熱回流提取40min,放冷，再 稱定重量,用60%L醇補(bǔ)足減失

9、的重量，搖勻,濾過,取續(xù)濾液25ml,蒸干，殘渣加60匯醇溶解并定容到5ml量瓶中，搖勻，以微孔濾膜(卩m)濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10卩I,注入液相色譜儀,測定,即得。重復(fù)性試驗取批號為050301的本品，按上述供試品溶液的制備方法,制備6份樣品,按法測定,結(jié)果見表4。表4重復(fù)性試驗結(jié)果回收率試驗精密稱取本品（批號:050301）測定量的半量按高、中、低取樣品各3份，分別加入濃度為/ml的金絲桃苷對照品溶液、，按上述供試品 溶液的制備方法，按法測定。見表5。表5回收率試驗結(jié)果精密度和穩(wěn)定性實驗 取批號為050301的樣品，精密稱定，按制備 方法制成供試品溶液，同法測定6次,金絲桃苷的RSD為見表6。表6 精密 度試驗取同一樣品分別在0、1、2、4、12、24h測定，金絲桃苷的RSD為，說明 該成分在制劑中提取后較為穩(wěn)定。見表 7。表7 穩(wěn)定性試驗樣品測定 取批號為050301、050302、050303的三批復(fù)方魚腥草 片樣品,分別進(jìn)行測定，結(jié)果見表&表8 樣品測定表由上述結(jié)果可知，此含量 測定方法可運(yùn)用于復(fù)方魚腥草片中金絲桃苷的含量測定。3 討論本品樣品的制備條件，經(jīng)按正交設(shè)計多因素提取比較，也進(jìn)行了方差分 析,結(jié)果幾乎不呈顯著性，說明金絲桃苷在所設(shè)的因素中互相影響較小，也說明它 在甲醇和