1、輸血科操作規(guī)程 目 目 錄 1 1 、輸血前檢測實(shí)驗(yàn)程序 、改良低離子聚凝胺法實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程 、 abo 血型鑒定 4 4 、 (d ）血型鑒定 、抗體篩選與鑒定試驗(yàn) 輸血前檢測實(shí)驗(yàn)程序 1、實(shí)驗(yàn)要求 血清與血漿都可以用于交叉實(shí)驗(yàn)與抗體檢測，最好就是血清標(biāo)本，標(biāo)本使用限制在 天內(nèi),含有肝素等抗凝標(biāo)本可以用凝血酶或硫酸魚精蛋白處理使其凝集析出血清。允許通過靜脈輸液口采集標(biāo)本,但必須丟棄受殘留靜脈輸液影響得 5ml標(biāo)本。一般不允許使用溶血標(biāo)本,對急性溶血性貧血與燒傷病人得溶血標(biāo)本,在實(shí)驗(yàn)前后必須做溶血程度得比較。標(biāo)本與輸血申請單上得所有資料必須填寫清楚并完全符合,否則應(yīng)重抽標(biāo)本。對所有用過得獻(xiàn)血員與

2、受血者標(biāo)本必須在 -6冰箱至少保存 7 天,所有實(shí)驗(yàn)都必須保證觀察與記錄同時進(jìn)行,且記錄與資料都必須至少保存 年。 2、血型檢測 要求完成病人 abo 正反定型、rh（)。 、交叉試驗(yàn) 3、1 受血者交叉配血時所用得標(biāo)本必須就是輸血前 3 天之內(nèi)得。 、 配血時要逐項(xiàng)核對輸血申請單、受血者與供血者血樣,復(fù)查受血者與供血者 abo 血型(正、反定型),并常規(guī)檢查患者 rh(d)血型(急診搶救患者緊急輸血時 rh（d)檢查除外）,正確無誤時可進(jìn)行交叉配血。 3、 凡就是輸注全血、濃縮紅細(xì)胞、紅細(xì)胞懸液、洗滌紅細(xì)胞、冰凍紅細(xì)胞、濃縮紅細(xì)胞、手工分離濃縮血小板等患者,應(yīng)該進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)。機(jī)器單采濃縮

3、血小板、冷沉淀、新鮮血漿應(yīng)與 ab 血型同型輸注。 3、4 按全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程要求完成凝聚胺交叉試驗(yàn)與檢測不完全抗體得交叉試驗(yàn)（聚凝胺法、抗人球蛋白法) 。除緊急輸血與自身輸血外,所有輸入紅細(xì)胞得其她制品均要求做血交叉試驗(yàn)。 3、 另外必須開展得試驗(yàn)有抗人球蛋白試驗(yàn)，抗體篩選實(shí)驗(yàn)。 改良低離 子聚凝胺法實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程 1、目得:減少交叉配血試驗(yàn)得假陽性。 2、適用范圍:交叉配血、血型鑒定、抗體篩檢血型血清學(xué)試驗(yàn)。 3、試劑來源:(臺資）珠海貝索生物技術(shù)有限公司 4、采集與處理: 4、 靜脈采血 3-4l，并觀察就是否溶血、乳糜血，如有此現(xiàn)象應(yīng)再留標(biāo)本并做記錄。 4、2 檢查留樣試管、標(biāo)簽、標(biāo)

4、號、姓名、血型就是否齊全,如有遺漏應(yīng)拒收。 4、3 將血標(biāo)本試管放 37水浴中 10 分鐘,離心。 5、標(biāo)準(zhǔn)操作： 5、1 主(次)管加入受（供)血者血清 滴,加供(受)血者 4%紅細(xì)胞鹽水懸液 1 滴。 5、2 各管加 l0、8m,混勻,靜置 分鐘,各管加 olbrene regen 1 滴，混勻，00 轉(zhuǎn)/分離心 1 秒,倒出上清液(殘留約 、1ml),輕搖,肉眼可見明顯得凝集狀(如無凝集須重做），加假凝集清除液 滴于管底,輕搖,凝集 1 分鐘內(nèi)消失呈均勻混懸液,為陰性，凝集 1 分鐘內(nèi)不能被消除,即為陽性。 5、 結(jié)論: 陽性表示受(供)血者血清中含供（受)者紅細(xì)胞血型 ag 相應(yīng)得 a

5、(igg、 g),供受血者不相容,陰性表示供受血者相容。 6、 注意事項(xiàng)： 、1 操須嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行試驗(yàn),紅細(xì)胞濃度、血清滴量、反應(yīng)時間、離心速度等均可影響試驗(yàn)結(jié)果。 6、 若為弱凝集結(jié)果，本試劑盒按下述試驗(yàn)操作方法,還可進(jìn)一步提高試驗(yàn)靈敏度。試驗(yàn)操作方法如下: 、2、1 檢測管中加試驗(yàn)血清 2 滴,%紅細(xì)胞鹽水懸液 1 滴。 6、2 加 lim0、8ml,混勻,靜置 分鐘,各管加lbrene 2 滴混勻,300 轉(zhuǎn)/分離心 15 秒，倒出上清液(殘留約 01m) ,輕搖，肉眼可見明顯得凝集狀(如無凝集須重做） ,加假凝集清除液 1 滴于管底，輕搖,凝集 1 分鐘內(nèi)消失呈均勻混懸液,為陰

6、性，凝集 1 分鐘內(nèi)不能被消除,即為陽性。 、3 檢測標(biāo)本應(yīng)為非抗凝血，如標(biāo)本中含抗凝成分得含量過高明顯干擾凝集反應(yīng),可適當(dāng)調(diào)加 promot 得滴量,以中與抗凝成分得干擾。 6、4 試驗(yàn)溫度以 20-30為宜,若為寒冷凝集,37水浴 5 分鐘,在此溫下觀察,凝集消失,說明冷凝集素存在。 、 肉眼直觀判斷得結(jié)果應(yīng)確保與顯微鏡下觀察結(jié)果一致，直觀不能明確判斷得可疑結(jié)果須鏡檢,鏡下：陰性結(jié)果應(yīng)該就是單個 b 均勻分布,有 rb 凝集狀散在得即為弱陽性。 、6 試驗(yàn)質(zhì)量檢驗(yàn):取自身血清與自身紅細(xì)胞用本試劑盒試驗(yàn)方法作自身陰性對照試驗(yàn),取 ig 抗 d 血清與 rhd(+)b 用本試劑盒試驗(yàn)方法作陽性

7、對照實(shí)驗(yàn),對照實(shí)驗(yàn)符合，試劑有效。 、7 疑難結(jié)果以抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)(agt)作最終判斷試驗(yàn),試驗(yàn)操作參照經(jīng)典gt(在 agt 中，加入本試劑盒中得 lim0、ml 37孵育時間可縮短至 10 分鐘)。 、 本試劑盒適宜大多數(shù)血型抗體得檢測,但對 ell 血型系統(tǒng)抗體（主要存在白種人群)檢測效果較差,由于我國黃種人群中 kl 血型系統(tǒng)抗體陽性者罕見,因此適合在國內(nèi)推廣。可補(bǔ)充抗人球蛋白試驗(yàn),以提高對 kl 血型系統(tǒng)抗體得檢出率。 abo 血型鑒定 1、測定原理 根據(jù)紅細(xì)胞上有或無 抗原或與 b 抗原,將血型分為 a 型、b 型、ab 型及 o 型 種?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn),通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定

8、 abo 血型。所謂正定型，就是用已知抗a 與抗b 分型血清來測定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)得 a 抗原或與 b 抗原；所謂反定型,就是用已知 細(xì)胞與 細(xì)胞來測定血清中有無相應(yīng)得抗a 或/與抗b。 2、標(biāo)本種類及收集要求 2、1 受檢者血清； 、2 枸緣酸鈉抗凝血或未稍取血，受檢者血液制成 5 紅細(xì)胞鹽水懸液使用。 、3 標(biāo)本出現(xiàn)中度溶血者,為不合格標(biāo)本,不能用于檢測。 3、操作步驟 3、1、試管法 3、1、 取潔凈小試管(內(nèi)徑 10mm)3 支,分別標(biāo)明抗、抗b 與抗a 十 ，用滴管分別加抗a、抗b 與抗a 十 b 分型血清各 滴（約 50 ul)于試管底部,再以滴管分別加入受檢者 5紅細(xì)胞鹽水懸液

9、滴，混與。 3、1、 另取潔凈小試管(內(nèi)徑 10m60mm)3 支,分別標(biāo)明 a、b 與 o 細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清 l 滴于試管底部，再分別以滴管加入 a、b 與 o型 5%試劑紅細(xì)胞懸 液 l 滴,混與。 3、1、3 立即以 1000rin 離心 3 mn。 3、 將試管輕輕搖動,使沉于管底得紅細(xì)胞浮起,先以內(nèi)眼觀察有無凝集(或溶血)現(xiàn)象。如內(nèi)眼不見凝集,應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上,再以低倍鏡檢查。 、1、5 觀察結(jié)果時既要瞧有無凝集,更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于 a、b 亞型、類 b 或 cisab 得發(fā)現(xiàn)。 、6 凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn) 4+ 紅細(xì)胞凝集成一大塊,血清清晰透明。 3+ 紅細(xì)胞

10、凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。 + 紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊,見到游離紅細(xì)胞。 1 肉眼可見大顆粒,周圍有較多游離紅細(xì)胞。 鏡下可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。 mf 混合凝集外觀（mixed ield)就是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。 - 表示陰性,鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。 3、2 玻片法 3、2、 取清潔玻片 1 張(或白瓷板 1 塊），用蠟筆劃成方格,標(biāo)明抗a、抗-b 與抗-a 十 b,分別用滴管滴加抗-、抗- 與抗-a 十 b 分型血清 滴于標(biāo)明得方格內(nèi)，再各加受檢者 2紅細(xì)胞懸液 滴,混與。 3、2、2 另取潔凈玻片一張（或白瓷板 1 塊

11、),用蠟筆劃成方格,標(biāo)明 a 細(xì)胞、細(xì)胞與 o 細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清 1 滴,再分別用滴管滴加 a、b 與型試劑紅細(xì)胞懸液 滴。 3、2、3 將玻片（或白瓷板)不斷輕輕轉(zhuǎn)動,使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約 5 min,先以肉眼觀察有無凝集(或溶血)反應(yīng);再在低倍鏡下觀察結(jié)果。 4、結(jié)果判定 abo 血型正反定型結(jié)果 分型血清+受檢者紅細(xì)胞 受檢者血型 受檢者血清+試劑紅細(xì)胞 抗-a 抗b 抗a 十 b a 細(xì)胞 b 細(xì)胞 o 細(xì)胞 + - + a - + - + + b - - - - o + + - + + b - - - 注:+為凝集;為不凝集。 5、注意事項(xiàng): 5、1 分型血清必須為

12、批批檢試劑,且在有效期內(nèi)使用;質(zhì)量性能符合要求。試劑開封后必須貼上開封日期、開封人標(biāo)簽,用畢后應(yīng)放置冰箱保存,以免細(xì)菌污染。試劑開封后有效期為一周。 5、2 試劑紅細(xì)胞以 3 個健康者同型新鮮紅細(xì)胞混與，用生理鹽水洗滌 1 次，以除卻存在于血清中得抗體及可溶性抗原?；蚴褂煤细竦蒙唐吩\斷紅細(xì)胞。試劑紅細(xì)胞有效期：自制得為 15 天，商品得為試劑有效期。試劑開封后必須貼上開封日期、開封人標(biāo)簽,用畢后應(yīng)放置冰箱保存,以免細(xì)菌污染。試劑開封后有效期為一周。 、 生理鹽水啟用后,有效期為二周。 5、4 所有試劑在開封或使用時，必須檢查就是否有變質(zhì);凡可疑者,必須更換新得試劑進(jìn)行檢測工作。 5、5 試管、

13、滴管與玻片必須清潔干燥,防止溶血。 5、 操作方法應(yīng)按規(guī)定,一般應(yīng)先加血清,然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)就是否漏加血清。 5、7 按理 im 抗-a 與抗-b 與相應(yīng)紅細(xì)胞得反應(yīng)溫度以 為最強(qiáng),但為了防止冷凝集現(xiàn)象得干擾,一般仍在室溫(024)內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn),37可使反應(yīng)減弱。 5、 離心時間不宜過長或過短,速度不宜過快或過慢,以防假陽性或假陰性結(jié)果。 5、9 觀察時應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列得區(qū)別。 、0 判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對、記錄,避免筆誤。 5、1 對于可能存在不完全抗原得時候,應(yīng)在各反應(yīng)方加入凝聚胺試劑,以檢驗(yàn)不完全抗原得存在。 2 對于可疑結(jié)果,必須更換所用得

14、試劑,重新檢測。 、13 5%紅細(xì)胞懸液得配制:用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞 3 次。 根據(jù)下表進(jìn)行紅細(xì)胞懸液得配制 懸液濃度（%） 壓積紅細(xì)胞(滴） 鹽水(滴） 2 1 2ml(40） 0、8m(16） rh(d) 血型鑒定 、實(shí)驗(yàn)原理 紅細(xì)胞與抗 d 抗體發(fā)生凝集反應(yīng)表明該細(xì)胞有 d 抗原,反之,無凝集現(xiàn)象表明試驗(yàn)得紅細(xì)胞缺少正常強(qiáng)度得 d 抗原。 2、標(biāo)本收集與制備 無菌操作收集血液標(biāo)本，收集后盡可能立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如果不能立即實(shí)驗(yàn),應(yīng)將樣品貯存于 28。收集在 c、cpd、pd2 液中得血液標(biāo)本,不超過 21 天仍可進(jìn)行實(shí)驗(yàn),但就是加 edta、肝素與凝集得血液標(biāo)本,實(shí)驗(yàn)應(yīng)在 2 天內(nèi)進(jìn)行。 3

15、、儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、培養(yǎng)基、以及其她所需物品: rd(gm）血型定型試劑(單克隆抗體):上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司,產(chǎn)品注冊號:國藥準(zhǔn)字 s206018,包裝、規(guī)格:每盒內(nèi)裝有 支試劑,10ml/支,儲存要求:存放 28,有效期內(nèi)使用。 、操作步驟 4、1 玻片法： 、1、1 干凈玻片上加 1 滴抗 d。 4、1、2 再加入 1 滴 4%得被檢紅細(xì)胞懸液。該紅細(xì)胞懸液可以就是鹽水懸液, 也可以就是懸浮于自身血漿或血清中得紅細(xì)胞。 4、1、3 在圓形得玻片區(qū)域中混勻,前后緩慢搖晃玻片。2 分鐘左右肉眼判讀結(jié)果。 不要將試劑得干燥與凝集相混淆。 、4 如果就是陰性,需要試管法重做一遍實(shí)

16、驗(yàn)。 4、2 鹽水試管法 4、2、 加一滴抗 試劑于預(yù)先標(biāo)記好得試管中 、2、2 再加 1 滴約 35紅細(xì)胞生理鹽水懸液于試管中?；靹颉?4、3 離心,速度與時間可選擇以下二種之一: 轉(zhuǎn)速 00rm,時間 1 分鐘或 340r,時間 15 秒。 4、2、4 檢查就是否溶血（溶血可能就是陽性結(jié)果,或者就是細(xì)菌污染) ,然后輕輕搖晃，使細(xì)胞再懸浮起來。 4、5 觀察凝集狀況，并立即記錄結(jié)果。必要時可借助顯微鏡。 4、6 若就是陰性結(jié)果,需在 3孵育 15 分鐘-30 分鐘，然后再離心觀察結(jié)果。 結(jié)果若呈陰性需進(jìn)一步確認(rèn)就是否就是弱 。 、參考值范圍 陽性反應(yīng):出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，為 rhd 陽性。 陰

17、性反應(yīng)：紅細(xì)胞不出現(xiàn)凝集,為 rh 陰性。 6、 方法得局限性 本實(shí)驗(yàn)不能凝集 cateoryvi 細(xì)胞,對于陰性與弱陽性結(jié)果,按有關(guān)安全輸血規(guī)范進(jìn)行確認(rèn)實(shí)驗(yàn),必要時送血型參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。 、注意事項(xiàng) 、1 試劑含有 0、1wv 疊氮鈉，如果攝入會中毒。 、2 試劑如出現(xiàn)混濁則不能使用，若開瓶使用時間較長后，最好用已知 rhd 陰性、rhd 陽性紅細(xì)胞檢查結(jié)果就是否符合，以防制品污染、變質(zhì)失效,而造成錯誤。及時貼上開封時間標(biāo)簽,在效期內(nèi)使用。 7、3 由于人紅細(xì)胞得 d 抗原往往表現(xiàn)較弱,故必要時進(jìn)行顯微鏡鏡檢,以免錯判結(jié)果,特別就是陰性結(jié)果時。 7、 rh 血型鑒定應(yīng)嚴(yán)格控制溫度與時間，

18、因 抗原、抗體及反應(yīng)凝塊比較脆弱,觀察反應(yīng)結(jié)果時,應(yīng)輕輕側(cè)動試管,不可用力振搖。 7、 對于結(jié)果可疑得,必須洗滌紅細(xì)胞后重新檢驗(yàn)。 抗體篩選與鑒定試驗(yàn) 、 原理 紅細(xì)胞血型抗體分子得物理特性與血清學(xué)得反應(yīng)性之間有著直接得關(guān)系。可分為 igm 與 ig 球蛋白抗體 igm 為天然抗體,在鹽水介質(zhì)中能直接凝集相應(yīng)得紅細(xì)胞,使之發(fā)生肉眼可見得凝集反應(yīng)。 ig為免疫抗體，常經(jīng)妊娠或輸血等免疫產(chǎn)生。在鹽水介質(zhì)中不能凝集而只能致敏抗原得紅細(xì)胞,且必須通過特定得方法使致敏紅細(xì)胞發(fā)生凝集。如牛血清白蛋白、酶、抗球蛋白、凝聚胺、凝膠(或玻璃)等方法。 、 方法 待檢血清需要使用多種方法進(jìn)行鑒定。一般使用鹽水法、酶方法、抗球蛋白法、凝聚胺法或凝膠卡法檢測抗體。在檢測到弱抗體時,可以利用適當(dāng)增加血清得細(xì)胞比例、適當(dāng)增加孵育時間、加入低離子強(qiáng)度溶液增效劑或 e 聚氧乙烯乙二醇等方法增加反應(yīng)得敏感性。不同得抗體在不同得方法與條件下可以有不同得表現(xiàn)。這些特性為判定抗體特異性提供了參考信息。 、 試劑 3、1、 紅細(xì)胞:選