XIAP原核重組蛋白的表達(dá)和純化PPT學(xué)習(xí)教案_第1頁
XIAP原核重組蛋白的表達(dá)和純化PPT學(xué)習(xí)教案_第2頁
XIAP原核重組蛋白的表達(dá)和純化PPT學(xué)習(xí)教案_第3頁
XIAP原核重組蛋白的表達(dá)和純化PPT學(xué)習(xí)教案_第4頁
XIAP原核重組蛋白的表達(dá)和純化PPT學(xué)習(xí)教案_第5頁
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1、會計學(xué)1XIAP原核重組蛋白的表達(dá)和純化原核重組蛋白的表達(dá)和純化第1頁/共24頁第2頁/共24頁 XIAP結(jié)構(gòu)和功能示意圖第3頁/共24頁第4頁/共24頁原核載體構(gòu)建（pET151）轉(zhuǎn)化Rossate小型誘導(dǎo)在最佳誘導(dǎo)條件下大型誘導(dǎo)（200ml）IPTG濃度誘導(dǎo)溫度誘導(dǎo)時間細(xì)胞破碎蛋白純化蛋白純化條件優(yōu)化SDS-PAGE檢測實驗技術(shù)路線圖第5頁/共24頁第6頁/共24頁1.初始OD值的影響第7頁/共24頁第8頁/共24頁2.誘導(dǎo)溫度第9頁/共24頁第10頁/共24頁3. IPTG濃度第11頁/共24頁第12頁/共24頁4.誘導(dǎo)時間第13頁/共24頁總結(jié)： 通過以上4個實驗，可以初步確定，溫度3

2、0，初始OD600，IPTG濃度，誘導(dǎo)時間4h,是誘導(dǎo)XIAP原核重組蛋白表達(dá)的最經(jīng)濟(jì)最有效地條件。第14頁/共24頁Ni-NTA柱標(biāo)準(zhǔn)方法洗脫跑膠檢測M：Marker A：蛋白原液 B：穿透液 W：清洗液 ：洗脫液pH4.5:洗脫液pH第15頁/共24頁Ni-NTA柱改進(jìn)方法洗脫后SDS-PAGE膠檢測M：Marker A：蛋白原液 B：穿透液 W：清洗液 ：洗脫液pH4.5:洗脫液pH第16頁/共24頁Ni-NTA柱改進(jìn)方法洗脫后SDS-PAGE膠檢測（增加了兩個PH）M：Marker A：蛋白原液 B：穿透液 W：清洗液 ：洗脫液pH4.5:洗脫液、洗脫液pH第17頁/共24頁第18頁/共24頁第19頁/共24頁第20頁

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