益腎活血法治療骨質(zhì)疏松性骨折的臨床觀察及作用機制研究,河南省正骨研究院河南省洛陽正骨醫(yī)院河南省骨科醫(yī)院孔西建,主要內(nèi)容,研 究 目 標,一.,研 究 內(nèi) 容,實 施 方 案,關(guān) 鍵 技 術(shù),實 施 計 劃,分階段考核指標,經(jīng) 費 預(yù) 算,二.,三.,四.,五.,六.,七.,一. 研究目標,一. 研究目標,以益腎活血法為綱，分方分型辨證治療骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)疏松性骨折。通過臨床觀察、動物實驗、細胞實驗研究該治法的臨床有效性及作用機制。,二. 研究內(nèi)容,二.研究內(nèi)容,根據(jù)中醫(yī)辨證分型理論，參照中藥新藥臨床 研究 指導(dǎo)原則，結(jié)合臨床癥狀，以益腎活血法為綱， 針對腎陽虛血瘀證、肝腎陰虛血瘀證、脾腎氣虛血 瘀證，擬定骨松強骨方、骨松健骨方、骨松益骨方 進行辨證治療。通過客觀的臨床觀察證實骨松強骨方、骨松健骨方 、骨松益骨方治療骨質(zhì)疏松癥、防治脆性 骨折的 有效性和安全性；通過動物實驗、細胞實驗客觀闡述骨松強骨、骨松 健骨方、骨松益骨方的作用機制。,三. 實施方案,實施方案,1.臨床試驗,2.動物實驗,3.細胞實驗,納入腎陽虛血瘀證、肝腎陰虛血瘀證、脾腎氣虛血瘀證試驗病例240例,服藥觀察48周，隨訪1年,試驗組150例（碳酸鈣D3片）腎陽虛血瘀證50例，服用骨松強骨方肝腎陰虛血瘀證50例，服用骨松健骨方脾腎氣虛血瘀證50例，服用骨松益骨方,觀察治療后兩組病例疼痛評分、中醫(yī)臨床癥狀評分、平衡能力評分 、 骨代謝生化指標PINP、BALP、-CTX、骨密度、脆性骨折發(fā)生率及安全性指標的變化情況。,對照組90例，腎陽虛血瘀證30例，肝腎陰虛血瘀證30例，均服用阿侖膦酸鈉 脾腎氣虛血瘀證30例， 碳酸鈣D3片,1. 臨床試驗,隨機平行對照研究,sham組灌服生理鹽水,去卵巢+假手術(shù) SD大鼠,OVX組灌服生理鹽水,E2組灌服雌二醇,低、中、高GSQGF、 GSJGF 、GSYGF組,灌服不同劑量GSQGF、 GSJGF 、 GSYGF,檢測各組血尿骨代謝生化指標 DEXA檢測大鼠股骨的骨密度和骨礦含量 三點彎曲實驗檢測大鼠股骨的生物力學(xué)性能 Micro CT檢測股骨遠端的骨小梁數(shù)目及形態(tài)等變化情況,給 藥 3 月,2. 動物實驗,體外培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞,加入低、中、高劑量骨松強骨方、骨松健骨方、骨松益骨方水煎液+PBS,檢測細胞的增殖活性檢測ALP活性并進行克隆染色 茜素紅和油紅O分別對形成的鈣化結(jié)節(jié)和脂肪滴進行染色 實時定量PCR檢測成骨基因Runx-2和Osterix的mRNA表達情況,評價骨松強骨方、骨松健骨方、骨松益骨方對骨髓間充質(zhì)干細胞成骨、成脂分化能力的影響,3. 細胞實驗,MSCs分化,四. 關(guān)鍵技術(shù),四. 關(guān)鍵技術(shù),臨床試驗： 骨代謝生化指標PINP、BALP、-CTX的檢測； 骨密度的檢測； 脆性骨折的觀察。,四. 關(guān)鍵技術(shù),動物實驗：檢測各組血尿骨代謝生化指標； DEXA檢測大鼠股骨的骨密度和骨礦含量； 三點彎曲實驗檢測大鼠股骨的生物力學(xué)性能； Micro CT檢測股骨遠端的骨小梁數(shù)目及形態(tài)等變化情況。,細胞實驗：體外培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞； 檢測細胞的增殖活性；檢測ALP活性并進行克隆染色； 茜素紅和油紅O分別對形成的鈣化結(jié)節(jié)和脂肪滴進行染色； 實時定量PCR檢測成骨基因Runx-2和Osterix的mRNA表達情況。,四. 關(guān)鍵技術(shù),四. 關(guān)鍵技術(shù),擬解決的關(guān)鍵問題：通過客觀嚴謹?shù)呐R床觀察證實益腎活血法治療骨質(zhì)疏松癥、防治脆性骨折有效性、安全性，通過動物實驗、細胞實驗闡述益腎活血法治療骨質(zhì)疏松癥的客觀理論基礎(chǔ)。,五.實施計劃,五.實施計劃,2016.6-2016.12 制定研究方案； 購置、制備試驗藥物、實驗試劑等,2017.1-2017.6 納入臨床觀察病例240例，進行臨床觀察 購置飼養(yǎng)實驗動物；,2017.7-2017.12 240例病例臨床觀察，數(shù)據(jù)記錄； 實施并完成動物實驗,五.實施計劃,2018.1-2018.6 240例病例臨床觀察，數(shù)據(jù)記錄； 實施并完成細胞實驗；,2018.7-2018.12 240例病例臨床觀察、隨訪，數(shù)據(jù)記錄； 分析統(tǒng)計動物實驗、細胞實驗數(shù)據(jù)； 撰寫、發(fā)表論文 ；,2019.1-2019.6 臨床觀察數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析； 撰寫、發(fā)表論文； 結(jié)題。,六.分階段考核指標,六.分階段考核指標,2016.12制定詳細完善的研究方案；完成臨床觀察CRF表、受試者知情同意書等文件制作；完成骨松強骨丸、骨松健骨丸、骨松益骨丸的制備；完成臨床觀察檢驗試劑購置。,六.分階段考核指標,2017.6完成納入臨床觀察病例240例，進行臨床觀察、記錄相關(guān)數(shù)據(jù)；完成SD大鼠、飼料及相關(guān)用品的購置，飼養(yǎng)大鼠做好動物實驗準備工作。,六.分階段考核指標,2017.12完成動物實驗；發(fā)表學(xué)術(shù)論文1篇；申報專利1項。,六.分階段考核指標,2018.6完成細胞實驗。2018.12發(fā)表學(xué)術(shù)論文2篇。申報專利1項。申報科研成果1項。,六.分階段考核指標,2019.6完成臨床觀察，進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析；發(fā)表論文1篇；結(jié)題；申報專利1項；申報科研成果1項。,七.經(jīng)費預(yù)算,七.經(jīng)費預(yù)算,1.材料費：合計151100元中藥費：87400元。西藥費：54000元SD大鼠費用：9700元,七.經(jīng)費預(yù)算,2.測試化驗加工費：合計88980元臨床試驗：骨代謝檢測費72000元 骨密度檢測費79200元（院內(nèi)協(xié)商免費） X線檢測費84000元（院內(nèi)協(xié)商免費）動物實驗：Micro-CT檢測費6480元細胞實驗：PCR檢測費10500元,七.經(jīng)費預(yù)算,3.差旅費：約5000元 外出學(xué)習(xí)交流、運送動物實驗驗標本進行Micro-CT檢測差旅費用。4.會議費：約5000元 召開會議探討課題研究方案、總結(jié)研究成果等。5.國際合作與交流費：約3000元 課題組成員出國學(xué)習(xí)交流、邀請國外專家等費用。,七.經(jīng)費預(yù)算,6.出版/文獻/信息傳播/知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)費：合計12000元發(fā)表論文4篇約10000元，查新費約500元，申報專利3項約1500元。7.勞務(wù)費： 32000元