第40講微生物的利用 考點(diǎn)一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 1 微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及功能 2 培養(yǎng)基的種類(lèi) 3 無(wú)菌技術(shù) 消毒與滅菌 4 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基操作分析 1 培養(yǎng)基需冷卻至50 時(shí)開(kāi)始倒平板 原因 瓊脂是一種多糖 在98 以上熔化 在44 以下凝固 倒平板時(shí)高于50 則會(huì)燙手 低于50 時(shí)若不能及時(shí)操作 瓊脂就會(huì)凝固 估計(jì)培養(yǎng)基溫度的方法是 培養(yǎng)基從滅菌鍋中取出冷卻一段時(shí)間后用手觸摸 感覺(jué)上以剛不燙手為準(zhǔn) 2 平板倒置原因 平板皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠 培養(yǎng)基表面的溫度也較高 平板倒置后 既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā) 又可防止肛蓋上的水珠落入培養(yǎng)基 造成污染 5 純化大腸桿菌操作過(guò)程中的注意事項(xiàng) 微生物的接種方法中最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法 1 平板劃線法 操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前接種環(huán)都需要進(jìn)行火焰灼燒滅菌 劃線操作結(jié)束時(shí) 仍需灼燒接種環(huán) 每次灼燒目的如下表 從第二次以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開(kāi)始 能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少 最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落 2 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板的操作比較復(fù)雜 且各個(gè)細(xì)節(jié)均需保證 無(wú)菌 應(yīng)特別注意 酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適 吸管頭不要接觸任何其他物體 吸管要在酒精燈火焰周?chē)褂?例1某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基 滅菌 接種及培養(yǎng) 菌落觀察計(jì)數(shù) 請(qǐng)回答與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問(wèn)題 1 培養(yǎng)基中含有蛋白胨 淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了和 除此之外 培養(yǎng)基還必須含有的基本 成分是和 2 對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌 應(yīng)該采用的方法是 3 為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于中培養(yǎng) 培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37 要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠 還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種作為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 4 培養(yǎng)20小時(shí)后 觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落 這說(shuō)明湖水樣品中種細(xì)菌 一般說(shuō)來(lái) 菌落總數(shù)越多 湖水遭受細(xì)菌污染的程度越 5 如果提高培養(yǎng)基中nacl的濃度 可以用于篩選耐細(xì)菌 這種培養(yǎng)基被稱為 答案 1 氮源 碳源不作要求 碳源無(wú)機(jī)鹽水 2 高壓蒸汽滅菌 3 恒溫培養(yǎng)箱無(wú)菌水 4 多高 5 鹽 或nacl 選擇性培養(yǎng)基 例2苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì) 自然界中存在著降解苯酚的微生物 某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚 為了降解廢水中的苯酚 研究人員從土壤中篩選出只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株 篩選的主要步驟如圖所示 為土壤樣品 請(qǐng)問(wèn)答下列問(wèn)題 1 中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入作為碳源 中不同濃度碳源的培養(yǎng)基 a 影響 b 不影響 細(xì)菌的數(shù)量 如果要測(cè)定 中活細(xì)菌數(shù)量 常采用法 2 為對(duì)照 微生物在 中不生長(zhǎng) 在 中生長(zhǎng) 與 培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于使用法可以在 上獲得單菌落 采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)為什么進(jìn)行倒置培養(yǎng) 3 如何比較不同菌株降解苯酚能力的大小 4 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如何防止其他微生物的污染 答案 1 苯酚a 影響稀釋涂布平板法 2 的培養(yǎng)基沒(méi)有加入苯酚作為碳源 培養(yǎng)基中加入苯酚作為碳源稀釋涂布平板法或平板劃線法以防止培養(yǎng)基冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基 3 5支潔凈培養(yǎng)瓶一分別加入相同培養(yǎng)基 加等量的苯酚 用ph試紙檢測(cè)這5支瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基的ph值 用苯酚調(diào)試使它們的ph值相等 苯酚是唯一的碳源 一分別接種5種等量的來(lái)自不同菌株的菌種一在相同的適宜條件下培養(yǎng)相同的時(shí)間一再用ph試紙檢測(cè)這5支瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基的ph值 苯酚顯酸性 不同菌株的菌種降解苯酚的能力不同 5支 瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基中的苯酚被分解的量不同 所以ph值不同 用ph試紙檢測(cè)這5支瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基的ph值 從而比較不同菌株降解苯酚能力的大小 4 從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實(shí)驗(yàn)過(guò)程保持無(wú)菌操作 a 對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間 操作者的衣著和手 進(jìn)行清潔和消毒 b 將用于微生物培養(yǎng)的器皿 接種工具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌 c 實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈的火焰附近進(jìn)行 d 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲方佑| 考點(diǎn)二微生物的分離 1 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 1 實(shí)驗(yàn)原理統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法是稀釋涂布平板法 統(tǒng)計(jì)活細(xì)菌數(shù) 計(jì)算方法是每克樣品上的菌落數(shù)一 c v m 設(shè)置對(duì)照 2 實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣一樣品稀釋一培養(yǎng)與觀察 3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則設(shè)立重復(fù)組 對(duì)照原則