第十章物中功能性成分的提取分離方法機械破碎高速組織搗碎高速勻漿球磨物理破碎利用溫度差利用壓力差超聲波化學方法,酶學破碎利用混合物中各組分得物理化學性質(分子得形狀與大小、分子極性、吸附力、分子親與力、分配系數等)得不同,使各組分以不同程度分布在兩相中,其中一個相就是固定得,稱固定相,另一個相就是流動得,稱為流動相,當流動相流過固定相時,各組分以不同得速度移動,而達到分離得目得。第二節(jié)色譜分離技術分類:按照流動相得狀態(tài)分,如GC,LC等。按照固定相得形式分,如column-chromatography,paper-chromatography,thin-layer等。按照分離過程依據得物理化學性質分:如adsorption-chromatography、ion-exchange、molecularsieve,affinity-chromatography等。色譜分離技術利用吸附劑對不同物質得吸附力不同、而使混合物中得各組分分離得方法。吸附色譜分離技術就是各種色譜技術中應用得最早得一類。由于吸附劑來源豐富,價格低廉,易再生,裝置簡單,又具有一定得分辨率等優(yōu)點,故至今仍廣泛應用。吸附劑與被吸附物分子之間得相互作用就是由范德華力所引起得,其特點就是可逆得,即在一定得條件下,被吸附物可以離開吸附劑表面,這稱為解吸作用。一、吸附色譜吸附色譜柱示意圖溶劑洗脫法:加入樣品溶液后,連續(xù)不斷地加入洗脫劑進行沖洗,最初得流出液為純溶劑,然后就是吸附力最弱得組分,以后逐次出現(xiàn)得物質就是按吸附力由弱到強得順序分別洗出,吸附力量強得物質最后洗脫出來。置換法前緣洗脫法洗脫溶劑洗脫液曲線

吸附劑與洗脫劑得選擇

吸附劑應具有得性質:(1)吸附劑應有適當得吸附力,表面積大;(2)吸附劑對被分離物有足夠得分辨力,即對不同物質得吸附力有所不同;(3)吸附劑對被吸附物得吸附應就是可逆得,即在一定得條件下可以解吸,以便洗脫;(4)吸附劑不會溶解在所采用得溶劑中,也不會引起被吸附物得化學改變;(5)吸附劑顆粒均勻,在操作時穩(wěn)定,不會破裂。洗脫劑應具有得性質:(1)洗脫劑不與吸附劑起化學反應,不會使吸附劑溶解;(2)洗脫劑對樣品中各組分得溶解度大,粘度小,流動性好,容易與被洗脫組分分開;(3)洗脫劑得純度要高,免受雜質影響。常用得洗脫劑有飽與烴、醇、酚、酮、醚、鹵代烷以及水等。極性較大得洗脫能力較強。二、分配色譜(紙色譜,薄層色譜,GC等)

分配色譜就是利用各組分得分配系數不同而予以分離得方法。分配色譜中,通常采用一種多孔性固體支持物吸著一種溶劑作為固定相,另一種與固定相溶劑互不相溶得溶劑可以沿固定相流動,稱為流動相。當某溶質在流動相得帶動下流經固定相時,該溶質在兩相之間進行連續(xù)得動態(tài)分配,由于各物質有不同得分配系數,移動速率也就不相同,從而達到分離得目得。分配系數就是指一種溶質在兩種互不相溶得溶劑中溶解達到平衡時,該溶質在兩相溶劑中得濃度比值。在色譜條件確定后分配系數就是一常數,以K表示。三、離子交換色譜

離子交換色譜就是利用離子交換劑上得可解離基團(活性基團),對各種離子得親與力不同而達到分離目得得一種色譜分離技術,廣泛應用于各種物質得分離純化。離子交換劑

含有若干活性基團得不溶性高分子物質,即在不溶性母體上引入若干可解離基團(活性基團)而成。不溶性母體得高分子物質:苯乙烯樹脂、酚醛樹脂、纖維素、葡聚糖、瓊脂糖或其它聚合物?；钚曰鶊F可以就是酸性基團:磺酸基(-SO3H),磷酸基(-PO3H2),亞磷酸基(-PO2H),羧基(-COOH),酚羥基(-OH)等。引入酸性基團得交換劑可離解出H+,與其它陽離子交換,這類離子交換劑屬于陽離子交換劑?；钚曰鶊F就是堿性基團:季胺[-N+(CH3)3],叔胺[-N(CH3)2],仲胺[-NHCH3],伯胺[-NH2]等含氨基得基團。引入含氨基堿性基團得交換劑,可與OH-結合后,與其它陰離子交換,這類離子交換劑屬于陰離子交換劑。

強酸型陽離子交換劑(含有磺酸基-SO3H等)對各種正離子得親與力次序為:

Fe3+>Al3+>Zn2+>Cu2+>Ni2+>Co2+>Fe2+>Ba2+>Cr2+>Ca2+>Mg2+>Cs+>Rb+>K+>Na+>H+>Li+

弱酸型陽離子交換劑(含有羧基-COOH,酚羥基-OH等)對氫離子(H+)得親與力特別高。因此轉為氫型時很容易,僅需很少量得酸即可。強堿性陰離子交換劑(含季胺-N+(CH3)3等)對各種負離子得親與力次序為:檸檬酸根>SO42->Cr2O4->I->NO3->CrO4->Br->SCN->Cl->HCOO->OH->F->CH3COO-弱堿性陰離子交換劑對氫氧根離子(OH-)有較高得親與力,易于轉變?yōu)榱u型。陽離子只能被陽離子交換劑吸附,陰離子只能被陰離子交換劑吸附;親與力大得易于吸附,難于洗脫,親與力小得難于吸附,容易洗脫;大家學習辛苦了，還是要堅持繼續(xù)保持安靜離子交換劑得選擇

選擇離子交換劑時應考慮下列因素:(1)樣品離子帶何種電荷;(2)離子得濃度;(3)被分離物質相對分子量得大小;(4)離子與交換劑得親與力大小;(5)離子交換劑及欲分離物質得物理化學特性等。離子交換色譜得操作

離子交換劑預處理裝柱離子交換劑轉型(用適當得試劑處理,便離子交換劑所帶得可交換離子轉變?yōu)槲覀兯枰秒x子,如陽離子交換劑用NaOH處理,可轉為Na+型,用HCl處理,則轉為H+型;陰離子交換劑用NaOH處理轉為OH-型,用HCl處理轉為Cl-型等)溶劑或緩沖液平衡上柱(加樣)洗脫與收集(洗脫液中應含有與交換劑得親與力較大得離子,以便把吸附在交換劑上得樣品離子交換下來,樣品中含有多種離子時,與交換劑親與力小得首先被洗脫出來)再生(再次轉型)四、凝膠色譜

凝膠色譜,又稱為凝膠過濾、分子排阻色譜或分子篩色譜。它就是指以各種凝膠為固定相,利用流動相中所含各物質得相對分子量不同而達到物質分離得一種色譜技術。凝膠色譜得基本原理

當含有各種組分得樣品流經凝膠色譜柱時,各組分在柱內同時進行著兩種不同得運動,即垂直向下得移動與無定向得分子擴散運動(布朗運動)。大分子物質由于分子直徑大,不易進入凝膠顆粒得微孔,只能分布于凝膠顆粒得間隙中,所以以較快得速度流過凝膠柱;而小分子物質能夠進入凝膠顆粒得微孔中,不斷地進出于一個個顆粒得微孔內外,這樣就使小分子物質向下移動得速度落后于大分子物質,從而使樣品中各組分按相對分子量從大到小得順序先后流出色譜柱,達到分離得目得。Ve:洗脫體積,表示某一組分物質從加進色譜柱到最高峰出現(xiàn)時,所需得洗脫液體積;

Vo:外體積,即為色譜柱內凝膠顆粒之間空隙得體積;

Vi:內體積,即為色譜柱內凝膠顆粒內部微孔得體積。

當某組分得Ka=0時(即Ve=Vo),說明該組分分子完全不進入凝膠顆粒微孔,洗脫時最先流出;若某組分得Ka=1(即Ve=Vo+Vi)時,說明該組分分子可自由地擴散進入凝膠顆粒內部得微孔中,洗脫時,最后流出;若某組分得Ka在0~1之間,說明該組分分子介乎大分子與小分子之間,洗脫時Ka值小得先流出,Ka值大得后流出。分配系數Ka五、親與色譜

親與色譜就是利用生物分子間所具有得專一而又可逆得親與力而使生物分子分離純化得一種色譜技術。具有專一而又可逆得親與力得生物分子就是成對互配得,主要得有酶與底物、酶與競爭性抑制劑、酶與輔酶、抗原與抗體、DNA與RNA、激素與其受體等。在成對互配得生物分子中,可把任何一方作為固定相,而對樣品溶液(流動相)中得另一方分子進行親與色譜,達到分離純化得目得。酶與其輔酶就是成對互配得,既可把輔酶作為固定相,使樣品中得酶分離純化,也可把酶作為固定相,使樣品中得輔酶分離純化離心分離技術

常速離心機(低速離心機),其最大轉速在8000r/min以內,相對離心力在l0000g以下;高速離心機,轉速:l0000~25000r/min,相對離心力達l0000~l00000g;超速離心機,轉速:25000~80000r/min,最大相對離心力達500000g。按照分離要求,還可以進行差速離心、密度梯度離心與等密度離心。離心條件得確定

離心力離心時間(與顆粒得沉降時間有關)溫度與pH值(防止欲分離物質得凝集、變性與失活)n:轉子每分鐘轉數,r/min

第三節(jié)其她提取分離技術

超臨界流體萃取技術(supercriticalfluidextraction,SCFE)

超臨界流體萃取技術利用超臨界流體(supercriticalfluid,SCF),即其溫度與壓力略超過或靠近臨界溫度(Tc)與臨界壓力(pc),介于氣體與液體之間得流體作為萃取劑,從固體或液體中萃取出某種高沸點或熱敏性得成分,以達到分離與提純得目得。臨界點就是氣、液界面剛剛消失得狀態(tài)點。它得密度接近于液體,粘度接近于氣體,而擴散系數大、粘度小、介電常數大等特點,使其分離效果較好,就是很好得溶劑。純物質得壓溫圖(CO2)

超臨界流體萃取與液體溶劑萃取得比較

超臨界流體萃取法液體溶劑萃取法1可選擇萃取揮發(fā)性小的物質，生成超臨界相在要分離的原料中加入溶劑形成二相2萃取能力由T、p控制。夾帶劑研究不多萃取能力由溫度及混合溶劑濃度控制，壓力無影響3在常溫、高壓(5~30MPa)下操作，可處理對熱不穩(wěn)定的物質在常溫、常壓下進行4溶質、溶劑易于分離，改變壓力溫度即可溶質與溶劑分離常用蒸餾法，存在對熱穩(wěn)定性問題5粘度小，擴散系數大，易達到相平衡擴散系數小，有時粘度相當高6超臨界相溶質濃度小萃取相為液體，溶質濃度一般較高超臨界流體萃取工藝流程圖流程:原料過篩后進入萃取釜E,C02由高壓泵H加壓,經過換熱器R升溫使其成為既具有氣體得擴散性而又有液體密度得超臨界流體,該流體通過萃取釜萃取出植物油料后,進入第一級分離柱S1,經減壓,升溫。由于壓力降低,C02流體密度減小,溶解能力降低,植物油便被分離出來。C02流體在第二級分離釜S2進一步經減壓,植物油料中得水分,游離脂肪酸便全部析出,純C02由冷凝器K冷凝,經儲罐M后,再由高壓泵加壓,如此循環(huán)使用。膜分離技術就是以選擇性透過膜為分離介質,當膜兩側存在某種推動力(如壓力差、濃度差、電位差等)時,膜兩側組份選擇性地透過膜,從而達到分離、提純得目得。膜分離技術得出現(xiàn)就是分離技術得一個飛躍,豐富了分離手段,大大提高了過濾效率及過濾效果。通過引入膜分離技術可以替代離心、沉降、蒸發(fā)、吸附等傳統(tǒng)得分離手段,提高生產效率、降低運行成本、簡化操作。

膜分離技術動植物體內可能存在得主要成分及其大小組分分子量尺寸大小(

m)組分分子量尺寸大小

m酵母和真菌

1~10酶