ICS65.120

CCSB46

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/SXSLXXX-2023

反芻動(dòng)物用飼料中氯酸鹽和高氯酸鹽

的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

DeterminationofChlorateandPerchlorateinRuminantFeedandGrass

LiquidChromatography-tandemMassSpectrometry

（征求意見稿）

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

陜西省飼料協(xié)會發(fā)布

T/SXSLXXX-2023

反芻動(dòng)物用飼料中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

1范圍

本文件規(guī)定了反芻動(dòng)物用飼料中氯酸鹽和高氯酸鹽的液相色譜-質(zhì)譜法測定方法。

本文件適用于反芻動(dòng)物用青貯飼料、精料補(bǔ)充料、濃縮飼料和預(yù)混合飼料中氯酸鹽和高氯酸

鹽含量的測定。

本文件氯酸鹽的檢出限為2.0ug/kg，定量限為5.0ug/kg；高氯酸鹽的檢出限為1.0ug/kg，

定量限為2.5ug/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引

用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修

改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4原理

試樣中的氯酸鹽和高氯酸鹽用0.1%甲酸甲醇溶液提取，青貯飼料經(jīng)HLB固相萃取柱和GCB

固相萃取柱凈化，精料補(bǔ)充料、濃縮飼料和預(yù)混合飼料經(jīng)HLB固相萃取柱凈化后，用液相色譜-

串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線校準(zhǔn)，內(nèi)標(biāo)法定量。

5試劑或材料

除非另有規(guī)定，僅使用色譜純試劑。

5.1水：GB/T6682，一級。

5.2乙腈。

1

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5.3甲醇。

5.4甲酸。

5.5甲酸銨。

5.60.1%甲酸甲醇溶液：移取1mL甲酸于1000mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻。

5.720mmol/L甲酸銨溶液：準(zhǔn)確稱取1.26g甲酸銨于1000mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻

度，混勻，過0.22μm濾膜后備用。

-

5.8氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1mg/mL）：以氯酸根（ClO3）計(jì)，CAS:7775-09-9。

-

5.9高氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1mg/mL）：以高氯酸根（ClO4）計(jì)，CAS:7601-89-0。

-

5.10氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)貯備液（1mg/mL）：以氯酸根-18O3（ClO318O3）計(jì)，CAS:14866-68-3。

-

5.11高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)貯備液（1mg/mL）：以高氯酸根-18O（4ClO418O4）計(jì)，CAS:871943-52-1。

5.12混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：分別準(zhǔn)確移取氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)貯備液（5.8）2mL、高氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)貯備液（5.9）

1mL于同一10mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，制成氯酸鹽、高氯酸鹽濃度分別為

200.0μg/mL、100.0μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，4℃保存，有效期為3個(gè)月。

5.13混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（5.12）0.1mL于10mL容量瓶中，用水

定容至刻度，搖勻，制成氯酸鹽、高氯酸鹽濃度分別為2.0μg/mL、1.0μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶

液，4℃保存，有效期為1個(gè)月。

5.14混合同位素內(nèi)標(biāo)中間溶液：分別準(zhǔn)確移取氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)貯備液（5.10）2mL、高氯酸

鹽同位素內(nèi)標(biāo)貯備液（5.11）1mL于同一10mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，制成氯酸

鹽同位素內(nèi)標(biāo)、高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)濃度分別為200.0μg/mL、100.0μg/mL的混合同位素內(nèi)標(biāo)中

間溶液，4℃保存，有效期為3個(gè)月。

5.15混合同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液：準(zhǔn)確移取混合同位素內(nèi)標(biāo)中間溶液（5.14）0.1mL于10mL容

量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，制成氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)、高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)濃度分別為

2.0μg/mL、1.0μg/mL的混合同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液，4℃保存，有效期為1個(gè)月。

5.16混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：分別準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（5.13）5μL、10μL、50μL、100μL、

200μL及混合同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液（5.15）50μL于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋定容，配制成

氯酸鹽濃度為1.0ng/mL、2.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、40.0ng/mL，高氯酸鹽濃度為0.5

ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL，氯酸根-18O3濃度為10.0ng/mL，高氯

酸根-18O4濃度為5.0ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，臨用現(xiàn)配。

5.17HLB固相萃取小柱：規(guī)格為200mg/6mL，或者性能相當(dāng)者，臨用前用5mL甲醇活化。

5.18GCB固相萃取小柱：規(guī)格為200mg/6mL，或者性能相當(dāng)者，臨用前用5mL甲醇活化。

5.19微孔濾膜：0.22μm，有機(jī)系。

6儀器設(shè)備

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6.1液相色譜-質(zhì)譜儀（配有電噴霧電離源）。

6.2分析天平：感量0.0001g和0.00001g。

6.3渦旋混合器。

6.4振蕩器。

6.5離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥6000r/min。

6.6固相萃取裝置。

7樣品

按照GB/T20195的規(guī)定制備樣品，粉碎后過0.42mm孔徑分析篩，混勻，裝入大磨口瓶中備

用。選取與待測樣品類型相同，均勻一致，且在待測物保留時(shí)間處儀器響應(yīng)面積小于方法定量限

30%的飼料樣品，作為空白樣品。

8試驗(yàn)步驟

8.1提取

稱取試樣2g（精確至0.0001g）于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入50μL混合同位素內(nèi)標(biāo)工作溶

液（5.15），混勻；再準(zhǔn)確加入0.1%甲酸甲醇溶液10mL（5.6），渦旋1min，振蕩提取20min，

于6000r/min離心3min，上清液轉(zhuǎn)入另一支潔凈的離心管中，待凈化。

8.2凈化

8.2.1青貯飼料

取GCB固相萃取小柱和HLB固相萃取小柱，將5mL待凈化液注入GCB固相萃取小柱中，

使用注射器活塞加壓，棄去約1mL流出液，續(xù)濾液流入HLB固相萃取小柱中，使用注射器活

塞加壓，棄去約1mL流出液，收集續(xù)濾液，過膜（5.20）后待測。

8.2.1精料補(bǔ)充料、濃縮飼料和預(yù)混合飼料

取HLB固相萃取小柱，將5mL待凈化液注入HLB固相萃取小柱中，使用注射器活塞加壓，

棄去約1mL流出液，收集續(xù)濾液，過膜（5.20）后待測。

8.3測定

8.3.1液相色譜參考條件

色譜柱：AcclaimTMTrinityTMP1復(fù)合離子交換柱（100×2.1mm，3μm），或性能相當(dāng)者。

流動(dòng)相：A相：20mmol/L甲酸銨溶液（5.7）；B相：乙腈，洗脫條件見表1。

流速：0.5mL/min。

柱溫：35℃。

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進(jìn)樣量：10μL。

表1梯度洗脫條件

時(shí)間（min）A相(%)B相(%)

0.03070

.03.01090

7.01090

7.13070

103070

8.3.2質(zhì)譜參考條件

電離方式：電噴霧離子源（ESI）；

檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；

掃描方式：負(fù)離子掃描；

毛細(xì)管電壓：2.5kV；

離子源溫度：150℃；

脫溶劑氣溫度：350℃；

多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）離子對、錐孔電壓及碰撞能量見表2。

表2硝基咪唑類藥物的定性離子對、定量離子對及質(zhì)譜條件

定性離子對定量離子對錐孔電壓碰撞能量

被測物名稱

m/zm/zVeV

83.0＞67.022.094

氯酸鹽83.0＞67.0

85.0＞69.022.195

99.0＞83.027.298

高氯酸鹽99.0＞83.0

101.0＞85.027.093

氯酸鹽-18O389.0＞71.0/23.491

高氯酸鹽-18O4107.0＞89.0/28.1104

8.3.3混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液和試樣溶液的測定

在儀器最佳工作條件下，分別取混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液（5.16）和試樣溶液（8.2）上機(jī)測定。

混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液中各被測物的選擇離子色譜圖參見附錄A。

8.4.4定性測定

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通過試樣色譜圖的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、各色譜峰的特征離子與相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)

溶液各色譜峰的特征離子相對照定性。試樣與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間的相對偏差不大于5%；試樣特征

離子的相對豐度與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表3的規(guī)定，則可判

定樣品中存在對應(yīng)的化合物。

表3定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差

單位為%

相對離子豐度＞5020～5010～20≤10

允許的最大偏差±20±25±30±50

8.4.5定量

取試樣溶液、混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積比定量，標(biāo)準(zhǔn)

溶液及試樣溶液中氯酸鹽、高氯酸鹽與其內(nèi)標(biāo)峰面積比均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。

9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

試樣中氯酸鹽、高氯酸鹽的含量w以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，單位為毫克每千克（μg/kg），按公式（1）

計(jì)算。

wi=×n×.........................................（1）