ICS65.020.20CCSB05DB1308DB1308/T376—20252025-01-06發(fā)布2025-01-15實(shí)施承德市市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB1308/T376—2025本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由承德市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。本文件起草單位：河北平泉食用菌產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院。本文件主要起草人：郭旭彥、王秀清、吳昊、劉桂娟、秦振祎、呂正斌、孫娜、劉潔、孫彥平、孫嘉鎂、趙云云、劉海峰、蘇容彥、袁征。DB1308/T376—20251杏鮑菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程1范圍本文件規(guī)定了杏鮑菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)的生產(chǎn)環(huán)境、前期準(zhǔn)備、生產(chǎn)流程、操作方法、菌種質(zhì)量檢驗(yàn)以及檔案記錄等內(nèi)容。本文件適用于杏鮑菇液體菌種生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5009.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測定GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y862杏鮑菇和白靈菇菌種NY/T2375食用菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4生產(chǎn)環(huán)境4.1廠址選擇廠房符合NY/T2375要求。廠房內(nèi)部設(shè)置培養(yǎng)基配置室、滅菌室、冷卻室、接種室、搖瓶液體菌種培養(yǎng)室、發(fā)酵罐液體菌種培養(yǎng)室等，布局合理。其中培養(yǎng)基配制室、冷卻室、搖瓶菌種培養(yǎng)室、發(fā)酵罐菌種培養(yǎng)室空間潔凈度達(dá)到萬級以上；接種室空間潔凈度達(dá)到百級。生產(chǎn)車間地面耐磨、防水、防腐蝕、防滑、易清洗，墻角為圓角，墻壁和天花板防潮、防霉、防水、易清洗。4.3生產(chǎn)用水5前期準(zhǔn)備2DB1308/T376—2025發(fā)酵罐、恒溫?fù)u床、空氣壓縮機(jī)、空氣過濾器、冷干機(jī)、干燥吸附機(jī)、儲氣罐、高壓蒸汽滅菌鍋、蒸汽鍋爐、超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡、冰箱，及配套附屬設(shè)備。玻璃三角瓶、試管、培養(yǎng)皿、量杯、玻璃漏斗、接種工具及相關(guān)輔助器具。6生產(chǎn)流程母種活化→接種→培養(yǎng)→發(fā)酵罐準(zhǔn)備→接種→培養(yǎng)。7操作方法7.1母種活化使用品種和種源符合NY/T528的規(guī)定。母種質(zhì)量符合NY862的規(guī)定。接種前取出斜面試管母種，可選擇以下配方的一種配置培養(yǎng)基：然；按照7.2.1.1配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基裝量為玻璃三角瓶的1/3～1/5，采用通氧砂芯硅膠塞封口。將滅菌后的液體培養(yǎng)基放入接種室內(nèi)超凈工作臺中，冷卻至20℃~25℃進(jìn)行接種。按照無菌操作DB1308/T376—20253接種后的玻璃三角瓶移至恒溫?fù)u床上，在溫度20℃~25℃和暗光條件下靜置24h后，啟動搖床，檢驗(yàn)搖瓶液體菌種質(zhì)量合格后備用。7.4發(fā)酵罐準(zhǔn)備檢查發(fā)酵罐是否具有特種設(shè)備檢驗(yàn)合格證，發(fā)酵罐閥門和管路等是否完好，工作正常。發(fā)酵罐初次及空置后使用、出現(xiàn)污染和更換品種時(shí)進(jìn)7.4.3.2以罐體總?cè)莘e60%～70%計(jì)算投料總量，按照培養(yǎng)基配方和比例稱量原料。7.4.3.3先將所有原料加適量水?dāng)嚢杈鶆?，制備成懸浮液，倒入或用泵抽入發(fā)酵罐中，再加水定容至罐體總?cè)莘e的60%～70%，擰緊上料口蓋。滅菌結(jié)束后，關(guān)閉蒸汽進(jìn)氣閥門，罐溫冷卻至100℃,提前打開空氣進(jìn)氣閥門，罐壓保持在0.04Mpa～0.05Mpa。開啟冷水閥門將冷水通入發(fā)酵罐夾層，罐溫冷卻至25℃,關(guān)閉冷水閥門。調(diào)節(jié)排氣閥，使罐內(nèi)壓力降至0.01Mpa，采用火焰圈法接種，將檢驗(yàn)合格的搖瓶菌種接種至發(fā)酵罐罐內(nèi)溫度21℃~23℃,培養(yǎng)6d～7d，檢驗(yàn)發(fā)酵罐液體菌種質(zhì)量合格后即可。8菌種質(zhì)量檢驗(yàn)8.1質(zhì)量要求8.1.1搖瓶液體菌種表1給出了搖瓶液體菌種感官指標(biāo)。DB1308/T376—20254表1杏鮑菇搖瓶液體菌種感官指標(biāo)呈淡黃色，粘稠不分層，具有特殊苦杏仁的香味，無酸、臭或表2給出了搖瓶液體菌種理化指標(biāo)。表2杏鮑菇搖瓶液體菌種理化指標(biāo)8.1.2發(fā)酵罐液體菌種表3給出了發(fā)酵罐液體菌種感官指標(biāo)。表3杏鮑菇發(fā)酵罐液體菌種感官指標(biāo)表4給出了發(fā)酵罐液體菌種理化指標(biāo)。表4杏鮑菇發(fā)酵罐液體菌種理化指標(biāo)8.2檢驗(yàn)方法DB1308/T376—20255發(fā)酵罐液體菌種放罐前24h對液體菌種進(jìn)行批次抽樣檢測，首先用酒精火焰球灼燒取樣閥30s~40s后，棄掉最初流出的少量液體菌種，然后用酒精火焰封口直接放入經(jīng)滅菌的三角瓶中，塞緊棉塞。用作感官指標(biāo)和理化指標(biāo)檢驗(yàn)。8.2.2感官指標(biāo)檢驗(yàn)按照NY/T1846中的規(guī)定對樣品進(jìn)行檢驗(yàn)。肉眼觀察菌絲有無其他色澤及異常，有無螨類，必要時(shí)用5倍放大鏡觀察；在無菌條件下拔出棉塞，將三角瓶置于距鼻5cm～10cm處，屏住呼吸，用清洗干凈、酒精棉球擦拭過的手在試管口上方輕輕煽動，順風(fēng)鼻聞。8.2.3理化指標(biāo)檢驗(yàn)pH計(jì)或pH試紙測定。量取液體菌種10mL，按照GB5009.3中規(guī)定的方法烘干，然后稱量菌絲干重。8.2.3.3顯微鏡下菌絲形態(tài)和雜菌鑒別按照無菌操作從取樣閥取少量發(fā)酵液，采用顯微鏡觀察菌絲生長狀況和有無雜菌污染。8.2.3.4.1培養(yǎng)基可選用以下一種配方：——PD培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基）。馬鈴薯（浸出汁）200——營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）。牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、水1000——孟加拉紅（虎紅）液體培養(yǎng)基。蛋白胨5g、葡萄糖10g、磷酸二氫鉀