DB15TechnicalcodeofpracticeforAgrobacterium-mediatedSugarbeetGenetic2020-12-24發(fā)布內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAM/TC2I農(nóng)桿菌介導(dǎo)甜菜遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)規(guī)程本文件適用于農(nóng)桿菌介導(dǎo)甜菜遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)操作的植物遺傳轉(zhuǎn)化plantgenetictransf4培養(yǎng)基4.1瓊脂粉培養(yǎng)基用于甜菜種球的萌發(fā)。成分為（1L）：瓊脂14.2誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基用于甜菜無菌苗誘導(dǎo)分化培養(yǎng)和甜菜葉片-葉柄）：30g，NAA（萘乙酸）0.7mg，KT（激動素）1.2mg，瓊脂粉74.3生根培養(yǎng)基用于甜菜無菌苗的生根培養(yǎng)。成分為（1L）：MS培養(yǎng)基4.74g，蔗糖30g，NAA1.2mg，瓊脂粉用于工程農(nóng)桿菌的增值培養(yǎng)。成分為（1L牛肉浸膏5g，酵母提取物10g，氯化鈉5g，瓊脂粉15g，rif（利福平）50mg，kan（卡娜霉素）50mg，pH4.5侵染液培養(yǎng)基）：KT1.2mg，AS(乙酰丁香酮)4.6共培養(yǎng)培養(yǎng)基.）：4.7脫菌培養(yǎng)基）：4.8篩選培養(yǎng)基）：5.1滅菌前準(zhǔn)備5.2種球滅菌隨后用75%酒精消毒2min，無菌水漂洗3次，接著用0.1%的升汞處理20min，無2左右時，帶子葉一起切下，接種到新的繼代培養(yǎng)基中。培養(yǎng)環(huán)境：溫度23℃,光照強(qiáng)度3000Lux，光在超凈工作臺上，將無菌苗置于無菌培養(yǎng)皿中，用滅菌后的手術(shù)刀將無菌苗的葉片-葉柄切下，長溫度23℃,光照強(qiáng)度3000Lux，光照時長為14h。培養(yǎng)時間2d～6d。將培養(yǎng)好的農(nóng)桿菌取單菌落并擴(kuò)繁，收集擴(kuò)繁后菌體并放置侵染液培養(yǎng)基中重新懸浮，使其OD600從侵染液中取出葉片-葉柄，置于無菌濾紙上吸干表面殘留的侵染液，放入共培養(yǎng)培養(yǎng)基中，進(jìn)行光照強(qiáng)度3000Lux，光照時間14h。脫菌2溫度25℃,光照強(qiáng)度3000Lux，光照時間14h。培養(yǎng)15d～20d，進(jìn)一步培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因甜菜無菌苗。9生根培養(yǎng)3光照強(qiáng)度3000Lux，光照時間14h。20d～30d即可誘導(dǎo)出），