GuidanceontheApplicationofAccreditationCriteriaforProficiencyTestingProvidersintheFieldofMicrobiology第1第1202025年1月152025年1月15目 結(jié)構(gòu)要 資源要 過程要 管理體系要 附錄A（資料性附錄）均勻性和穩(wěn)定性檢 附錄B（資料性附錄）統(tǒng)計分析和能力評 附錄C（資料性附錄）微生物能力驗證統(tǒng)計分析示 第PAGE第PAGE10NUMPAGES202025年1月152025年1月15GB/T GB/T6379 SN/T 食品與動物飼料微生物學(xué)微生物計數(shù)水平法30℃時的菌落數(shù)方法(ISO4833ISO/TS22117 食品和動物飼料微生物能力驗證特定要求和指南(Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs-Specificrequirementsandguidanceforproficiencytestingbyinterlaboratorycomparison) background標(biāo)準(zhǔn)菌株referencelimitof結(jié)構(gòu)要求CNAS-CL01物品制備、能力評定崗位的關(guān)鍵技術(shù)人員要具有微生物樣品制備和檢測的技術(shù)能力。6.2.53次以上微生物實驗室間比對工作經(jīng)歷，中級以上（含中級）技術(shù)職稱。如果不滿 過程要求開展新能力驗證計劃前通常應(yīng)進(jìn)行預(yù)試驗，預(yù)試驗應(yīng)考慮微生物能力驗證 d）明確目標(biāo)微生物是定性檢測和/f）采用自然樣品還是人工污染樣品，以及樣品的基質(zhì)；采用人工污染樣品h）能力驗證物品分發(fā)的特殊要求，如確保低溫和生物安全防護(hù)措施。穩(wěn)定——在使用前應(yīng)確認(rèn)目標(biāo)微生物的特性，應(yīng)根據(jù)能力驗證的目的采用適當(dāng)?shù)腛——能力驗證物品中存在背景菌群尤其是疑似目標(biāo)微生物時，提供者應(yīng)考慮背菌群對目標(biāo)微生物檢測的影響，應(yīng)通過確認(rèn)試驗保證能力驗證物品指定值的準(zhǔn)i）有防止串通或偽造結(jié)果的措施，如多水平、多樣本設(shè)計，參加者返回分a）統(tǒng)計設(shè)計應(yīng)考慮微生物的水平和分布，同時應(yīng)考慮參加者的數(shù)量和不同注1：已開展多個輪次定量微生物能力驗證計劃的提供者，可使用經(jīng)驗值作為注2:通常最大可能數(shù)（mostprobablenumber,MPN）計數(shù)方法和平板菌落計數(shù)方法具有不同的重復(fù)性。在同一定量計劃中，如兩種方法的重復(fù)性差異較大影響能）注3:定性微生物能力驗證計劃通常直接將參加者結(jié)果與指定值進(jìn)行比較，兩注:附錄C.3應(yīng)建立微生物能力驗證物品的制備、儲存、處置的程序，包括檢畢能力驗（要考慮完成結(jié)果評價之后，參加者對能力驗證物微生物水平應(yīng)考慮微生物的方法檢出限和在同類樣品中微生物常規(guī)檢出水平；當(dāng)目標(biāo)注:附錄C.1給出了均勻性評估示例，附錄C.27.32.5微生物能力驗證物品應(yīng)進(jìn)行穩(wěn)定性評估。必要時，應(yīng)將穩(wěn)定性量化，并考慮作為能力驗證物品指定值不確定度的補充分量，在能力評定中予以考慮。穩(wěn)定能力驗證提供者應(yīng)控制微生物能力驗證物品的包裝，確保符合國家、地區(qū)或7.3.5b）給參加者的指導(dǎo)書應(yīng)包括以下內(nèi)容：微生物的添加（污染）方式，能力d)對于病原微生物能力驗證計劃，提供者應(yīng)有文件化的政策，告知參加者8.18.3.2微生物水平較高時，可使用單因子方差分析和Ss≤0.3σ準(zhǔn)則（Ss為樣品間標(biāo)準(zhǔn)差，σ為能力評定標(biāo)準(zhǔn)差）進(jìn)行評價（GB/T28043）。當(dāng)開展一項新的能力驗證計劃時，通常σ未知，可用單因子方差分析初步評價樣品的均勻性。通常在參加者結(jié)果回報后獲得σ時應(yīng)再次利用Ss≤0.3σ確認(rèn)樣品是否均勻。如σ已知，比如根據(jù)經(jīng)驗值或先期同類能力驗證計劃獲得的σ值，可利用Ss≤0.3σ進(jìn)行評價。當(dāng)微生物水平較低時，樣品間微生物計數(shù)差異可能會比較大，可能不滿足Ss≤0.3σ的要求，在后續(xù)評價參加者能力時可考慮在能力評定標(biāo)準(zhǔn)差中加入樣品下測試j次（j=1、2、……n）。樣品間平方和SS1 均方MS1樣品內(nèi)平方和SS2 均方MS2=自由度f1=m- f2=N-若F＜自由度（f1，f2）及給定顯著性水平α（通常α=0.05）的臨界值(f1，f21F分布表)表1FP{F(f1,f2)>Fα(f1,f2)} α=（摘自GB4086.4-1983F分布Ss0.3σ性條件下測試j次（j=1、2、n）A.1.1.1計算MS1、MS2。偏差Ss：MS1若Ss≤0.3σ通常從微生物能力驗證物品總體中隨機抽取具有代表性的足夠的能力驗證物品進(jìn)行穩(wěn)定性檢驗，每個樣品在重復(fù)條件下至少測試兩次。將測試數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為以0式中：x1x2—第二次測試數(shù)據(jù)的平均值；注：為了保證平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差的準(zhǔn)確度，n1和n2均≥6 t分布P{t(n)tα(n α= （單側(cè)檢驗（摘自GB4086.3-1983t分布|xy|≤0.3σz值是參加者結(jié)果和指定值的差值與能力評定標(biāo)準(zhǔn)差σ的比值。該值絕對值大z=其中x為參加的結(jié)果，X為指定值,σ用z值評定準(zhǔn)則如下：|z| ——|z|≥ 當(dāng)參加者使用的測試方法有可靠的重復(fù)性限r(nóng)和再現(xiàn)性限R時,可根據(jù)GB/T6379，按下式計算CD值：參加者在重復(fù)條件下n次測試的平均值x與指定值X之差|x-X|注：重復(fù)性限r(nóng)=2.8σr，再現(xiàn)性限為R=2.8σR，σr為測試方法的重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差，σR為測試方法的再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)差。根據(jù)ISO4833，常規(guī)30℃需氧培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基力驗證統(tǒng)計評價，參加者結(jié)果在對數(shù)中位值±0.5范圍內(nèi)可認(rèn)為是滿意結(jié)果 ——結(jié)果落在對數(shù)中位值±0.5范圍外：3×5管方法，MPN0.24。在理想情況下，95%的結(jié)果將會落在指定值±2σ以內(nèi)，而超過99%的結(jié)果會落在指定值±3σ以內(nèi)，σ為標(biāo)準(zhǔn)差。然而，實踐中仍存在實驗室間變異。大量分析數(shù)據(jù)顯示方差會擴增至約2.5倍（因而標(biāo)準(zhǔn)差擴增1.58倍），因此參加者M(jìn)PN計數(shù)結(jié)果的接受限應(yīng)增加到±3σ和±5σ（ISO/TS22117)。MPN對數(shù)值接3。表 ±±——在指定值±3σ（含邊界）——在指定值±3σ和指定值±5σ（不含邊界）——在指定值±5σ（含邊界）證計劃運作之后，將參加者M(jìn)PN±2.68σ和±4σ。ISO4833能力驗證物品（凍干粉）分裝后隨機抽取10個樣品，每個樣品重復(fù)測試2次，4。表4菌落總數(shù)測試結(jié)果（CFU/g測試結(jié)果測試結(jié)果表5F臨界值F0.05(9,10)=3.02。計算的F值為1.71，該值＜臨界值，這初步表明也可利用A.1.1.2Ss0.3σ準(zhǔn)則，計算樣品之間的不均勻性標(biāo)準(zhǔn)偏差Ss6。630（CFU/g7表 A.1.2.2|x-y|≤0.3σ