CTNNAL1：哮喘發(fā)病機(jī)制及氣道上皮功能調(diào)控的關(guān)鍵因子探究一、引言1.1研究背景與意義哮喘作為一種常見的慢性炎癥性氣道疾病，近年來其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響著人們的生活質(zhì)量和健康水平。最新流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國(guó)20歲及以上人群哮喘患病率達(dá)4.2%，患者總數(shù)約4570萬，且哮喘控制存在“三少一高”現(xiàn)象，即被確診的少、規(guī)范治療的少、完全控制的少、急性發(fā)作的多，整體狀況堪憂，死亡率遠(yuǎn)高于發(fā)達(dá)國(guó)家。哮喘給患者帶來諸多困擾，如胸悶氣急、影響睡眠等，大幅降低生活質(zhì)量，不經(jīng)意的急性發(fā)作還可能重度甚至危及生命。對(duì)于患者，不僅要控制癥狀，還要盡可能避免急性發(fā)作，這需盡早診斷、規(guī)范治療，但目前哮喘疾病總體控制率不佳，大多源自大眾和患者自身對(duì)疾病的科學(xué)認(rèn)知不足。氣道上皮細(xì)胞作為機(jī)體呼吸系統(tǒng)抵御外界環(huán)境的第一道防線，在哮喘的發(fā)病機(jī)制中扮演著核心角色。它主要通過細(xì)胞間各種連接阻止有害刺激進(jìn)入，并通過黏液纖毛系統(tǒng)和抗菌肽清除變應(yīng)原、病毒等外來有害因素。一旦氣道黏膜受到外來有害刺激，氣道上皮細(xì)胞屏障可能被破壞，上皮細(xì)胞會(huì)釋放各種上皮源性細(xì)胞因子，有效激活樹突狀細(xì)胞和Ⅱ型固有免疫淋巴細(xì)胞，從而引發(fā)后續(xù)輔助性T細(xì)胞2免疫級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致哮喘發(fā)生。此外，氣道上皮細(xì)胞的損傷修復(fù)與增殖功能異常也與哮喘的發(fā)病密切相關(guān)。哮喘的病理特征之一表現(xiàn)為支氣管上皮損傷、脫落，提示哮喘患者的氣道上皮對(duì)損傷應(yīng)激的修復(fù)反應(yīng)可能出現(xiàn)缺陷，而已知上皮細(xì)胞通過表達(dá)不同類型的粘附分子實(shí)現(xiàn)“粘附”和“錨定”是發(fā)揮正常功能的先決條件。粘附分子在氣道炎癥及損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用，因此，研究氣道上皮細(xì)胞的功能及在哮喘中的作用，對(duì)于探究哮喘的發(fā)生機(jī)制及防治具有重要意義。連環(huán)素（catenin）家族中的CTNNAL1（cateninalpha-like1）作為一種結(jié)合細(xì)胞膜的蛋白質(zhì)，在多種細(xì)胞活動(dòng)中起著重要作用，如細(xì)胞黏附、細(xì)胞極性及細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)等。研究表明，CTNNAL1在哮喘和氣道上皮細(xì)胞中的表達(dá)水平與哮喘的發(fā)病密切相關(guān)。在哮喘患者的氣道上皮中，CTNNAL1的表達(dá)水平明顯低于健康人群。CTNNAL1還能夠影響氣道上皮的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖，從而影響氣道的結(jié)構(gòu)和功能。然而，目前CTNNAL1在哮喘及氣道上皮中的調(diào)控及其作用機(jī)制尚不完全清楚。深入研究CTNNAL1表達(dá)的應(yīng)答性調(diào)控及其在哮喘及氣道上皮中的作用，不僅有助于揭示哮喘發(fā)病的潛在分子機(jī)制，還可能為哮喘的治療提供新的靶點(diǎn)和策略，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。1.2研究目的與問題提出本研究旨在深入探討CTNNAL1表達(dá)的應(yīng)答性調(diào)控機(jī)制，以及其在哮喘發(fā)病過程和氣道上皮細(xì)胞中的具體作用，為哮喘的防治提供新的理論依據(jù)和潛在治療靶點(diǎn)?；诖?，本研究擬解決以下關(guān)鍵問題：CTNNAL1在哮喘患者的氣道上皮組織以及正常氣道上皮組織中的表達(dá)模式有何差異？在哮喘病程發(fā)展過程中，CTNNAL1的表達(dá)水平是如何動(dòng)態(tài)變化的？這種表達(dá)變化與哮喘的嚴(yán)重程度、發(fā)病頻率等臨床指標(biāo)之間存在怎樣的關(guān)聯(lián)？哪些內(nèi)源性因素（如細(xì)胞因子、激素等）和外源性因素（如過敏原、污染物等）能夠調(diào)控CTNNAL1的表達(dá)？這些因素通過何種信號(hào)通路和分子機(jī)制影響CTNNAL1的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程？在氣道上皮細(xì)胞中，CTNNAL1參與了哪些生物學(xué)過程，如細(xì)胞黏附、增殖、凋亡、分化等？它是如何通過影響這些生物學(xué)過程，進(jìn)而影響氣道上皮的正常生理功能以及在哮喘發(fā)病中的病理變化？干擾CTNNAL1的表達(dá)或功能，對(duì)哮喘模型動(dòng)物的氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性和氣道重塑等病理特征會(huì)產(chǎn)生怎樣的影響？在細(xì)胞水平上，干擾CTNNAL1表達(dá)后，細(xì)胞對(duì)各種刺激的反應(yīng)以及相關(guān)信號(hào)通路的激活狀態(tài)會(huì)發(fā)生哪些改變？1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)本研究將綜合運(yùn)用多種研究方法，以全面深入地探討CTNNAL1表達(dá)的應(yīng)答性調(diào)控及其在哮喘及氣道上皮中的作用。在臨床樣本研究方面，收集哮喘患者和健康對(duì)照者的支氣管粘膜、外周血等樣本。通過熒光定量RT-PCR技術(shù)，精確測(cè)定CTNNAL1mRNA在不同樣本中的表達(dá)水平，明確其在哮喘患者和正常人群中的差異表達(dá)情況。利用免疫組化技術(shù)，直觀呈現(xiàn)CTNNAL1蛋白在支氣管肺組織中的具體分布位置和表達(dá)強(qiáng)度，為后續(xù)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)也是本研究的重要部分，選用人支氣管上皮細(xì)胞株（如16HBE細(xì)胞）進(jìn)行體外培養(yǎng)。采用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)，將CTNNAL1過表達(dá)質(zhì)?；騭iRNA導(dǎo)入細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)對(duì)CTNNAL1表達(dá)水平的上調(diào)或下調(diào)。運(yùn)用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（如CCK-8法），準(zhǔn)確檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的變化；通過細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)（如AnnexinV-FITC/PI雙染法），精確分析細(xì)胞凋亡情況；借助細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)（如Transwell實(shí)驗(yàn)），深入探究細(xì)胞遷移和侵襲能力的改變，從而揭示CTNNAL1對(duì)氣道上皮細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)同樣不可或缺，構(gòu)建OVA致敏的小鼠哮喘模型和吸入臭氧誘導(dǎo)的小鼠支氣管肺組織應(yīng)激損傷模型。通過氣道阻力測(cè)定，客觀評(píng)估小鼠的氣道高反應(yīng)性；利用ELISA法檢測(cè)小鼠支氣管肺泡灌洗液中炎癥因子的水平，明確炎癥反應(yīng)程度；通過病理切片觀察，直觀分析小鼠支氣管肺組織的病理變化，深入研究CTNNAL1在哮喘發(fā)病過程中的作用機(jī)制。本研究還將運(yùn)用生物信息學(xué)分析，借助公共數(shù)據(jù)庫（如GEO、TCGA等），深入挖掘CTNNAL1在哮喘相關(guān)疾病中的表達(dá)數(shù)據(jù)和潛在調(diào)控機(jī)制。利用生物信息學(xué)軟件，對(duì)CTNNAL1的基因序列、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，預(yù)測(cè)其可能的結(jié)合蛋白和信號(hào)通路，為實(shí)驗(yàn)研究提供理論指導(dǎo)。在轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控機(jī)制研究上，利用啟動(dòng)子分析軟件（如PromoterScan、Transfac等），對(duì)CTNNAL1基因5’非編碼區(qū)進(jìn)行分析，推測(cè)啟動(dòng)子所在范圍。運(yùn)用TESS軟件分析該區(qū)域內(nèi)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，設(shè)計(jì)探針進(jìn)行凝膠阻滯電泳（EMSA）實(shí)驗(yàn)，篩選調(diào)控CTNNAL1表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。通過突變探針結(jié)合試驗(yàn)、抗體超遷移試驗(yàn)，進(jìn)一步驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄因子與CTNNAL1的結(jié)合關(guān)系，明確轉(zhuǎn)錄因子對(duì)CTNNAL1表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在研究視角和研究方法的結(jié)合上。在研究視角方面，首次從應(yīng)答性調(diào)控的角度深入研究CTNNAL1在哮喘及氣道上皮中的作用，全面分析內(nèi)源性和外源性因素對(duì)CTNNAL1表達(dá)的調(diào)控，以及其在哮喘發(fā)病不同階段的動(dòng)態(tài)變化，為哮喘發(fā)病機(jī)制的研究提供全新的視角。在研究方法結(jié)合上，本研究將臨床樣本研究、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與生物信息學(xué)分析、轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控機(jī)制研究有機(jī)結(jié)合，從多個(gè)層面、多個(gè)角度深入探究CTNNAL1的作用機(jī)制，彌補(bǔ)了以往單一研究方法的局限性，使研究結(jié)果更加全面、深入、可靠。二、CTNNAL1的基本特性2.1CTNNAL1的基因組結(jié)構(gòu)CTNNAL1基因在人類染色體上定位于9q31.3，其基因組結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出復(fù)雜而精細(xì)的特點(diǎn)。該基因由多個(gè)外顯子和內(nèi)含子組成，外顯子是最終參與編碼蛋白質(zhì)的部分，而內(nèi)含子則在基因轉(zhuǎn)錄后的加工過程中被切除。具體而言，外顯子的數(shù)量和排列順序決定了CTNNAL1蛋白的氨基酸序列，進(jìn)而影響其功能。目前研究表明，其外顯子的分布和長(zhǎng)度在不同研究中具有一定的穩(wěn)定性，但對(duì)于其內(nèi)含子的具體結(jié)構(gòu)和功能，仍存在一些有待深入探索的領(lǐng)域。在不同物種中，CTNNAL1基因展現(xiàn)出了較高的保守性。以小鼠、大鼠等哺乳動(dòng)物為例，它們的CTNNAL1基因與人類的CTNNAL1基因在關(guān)鍵區(qū)域的序列相似度較高。這種保守性反映了CTNNAL1在生物進(jìn)化過程中的重要性，可能暗示其在維持細(xì)胞基本生理功能、參與重要信號(hào)傳導(dǎo)通路等方面扮演著不可或缺的角色。在進(jìn)化過程中，CTNNAL1基因的保守區(qū)域可能經(jīng)歷了嚴(yán)格的自然選擇，以確保其功能的穩(wěn)定性和有效性。這也為利用模式生物（如小鼠）研究CTNNAL1在人類疾?。ㄈ缦┲械淖饔脵C(jī)制提供了理論基礎(chǔ)，因?yàn)橥ㄟ^對(duì)模式生物中CTNNAL1基因的研究，可以在一定程度上推斷其在人類中的功能和調(diào)控機(jī)制。2.2CTNNAL1的蛋白質(zhì)組成成分CTNNAL1蛋白質(zhì)由特定數(shù)量的氨基酸按照精確的序列排列而成，其氨基酸序列是決定蛋白質(zhì)功能的關(guān)鍵因素。研究表明，CTNNAL1蛋白質(zhì)包含多個(gè)結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域賦予了CTNNAL1獨(dú)特的功能。其中，一個(gè)重要的結(jié)構(gòu)域是與細(xì)胞骨架相互作用的結(jié)構(gòu)域，通過這個(gè)結(jié)構(gòu)域，CTNNAL1能夠與細(xì)胞骨架中的肌動(dòng)蛋白等蛋白質(zhì)緊密結(jié)合，從而參與細(xì)胞骨架的調(diào)節(jié)，影響細(xì)胞的形狀維持、運(yùn)動(dòng)能力以及細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的運(yùn)輸?shù)冗^程。還有與細(xì)胞膜上的E-cadherin結(jié)合的結(jié)構(gòu)域，這一結(jié)合對(duì)于維持細(xì)胞間的穩(wěn)定連接至關(guān)重要，在組織的形態(tài)建成、器官的正常發(fā)育以及維持上皮組織的屏障功能等方面發(fā)揮著不可或缺的作用。在與其他蛋白相互作用的位點(diǎn)方面，CTNNAL1存在多個(gè)關(guān)鍵的結(jié)合位點(diǎn)。以Wnt信號(hào)通路為例，CTNNAL1通過特定的位點(diǎn)與該信號(hào)通路中的β-catenin等蛋白相互作用。在正常情況下，CTNNAL1與細(xì)胞膜上的E-cadherin結(jié)合形成復(fù)合物，同時(shí)參與到β-catenin的降解過程中，使得β-catenin無法進(jìn)入細(xì)胞核，進(jìn)而抑制Wnt信號(hào)通路的激活。當(dāng)CTNNAL1的表達(dá)或功能出現(xiàn)異常時(shí)，這種相互作用被破壞，β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，激活相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而影響細(xì)胞的增殖、分化和遷移等過程，這在腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及胚胎發(fā)育異常等病理生理過程中具有重要意義。2.3CTNNAL1在細(xì)胞中的定位與分布在細(xì)胞水平上，CTNNAL1主要定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)。通過免疫熒光染色技術(shù)可以清晰地觀察到，在正常的氣道上皮細(xì)胞中，CTNNAL1呈現(xiàn)出沿細(xì)胞膜分布的特征，這與它在維持細(xì)胞間連接和細(xì)胞黏附中的作用密切相關(guān)。在細(xì)胞質(zhì)中也能檢測(cè)到一定量的CTNNAL1，這暗示其可能參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)過程，在細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化等方面發(fā)揮作用。當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激時(shí)，CTNNAL1的定位可能會(huì)發(fā)生改變，這種動(dòng)態(tài)變化對(duì)于細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)和功能調(diào)節(jié)具有重要意義。在不同組織細(xì)胞中，CTNNAL1的分布存在顯著差異。在氣道上皮細(xì)胞中，CTNNAL1的表達(dá)水平相對(duì)較高，這與氣道上皮作為機(jī)體抵御外界病原體和有害物質(zhì)的第一道防線的重要功能相關(guān)。氣道上皮細(xì)胞需要通過緊密的細(xì)胞間連接和有效的信號(hào)傳導(dǎo)來維持其屏障功能，CTNNAL1在其中扮演著關(guān)鍵角色。而在一些免疫細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞中，CTNNAL1的表達(dá)水平較低。這可能是因?yàn)檫@些細(xì)胞在免疫反應(yīng)中主要發(fā)揮免疫監(jiān)視和免疫調(diào)節(jié)的功能，其細(xì)胞間連接和信號(hào)傳導(dǎo)方式與氣道上皮細(xì)胞有所不同，因此對(duì)CTNNAL1的需求也相對(duì)較低。在腫瘤細(xì)胞中，CTNNAL1的分布和表達(dá)情況也備受關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，在某些腫瘤組織中，CTNNAL1的表達(dá)水平異常升高，且其分布模式也發(fā)生改變，這可能與腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力增強(qiáng)有關(guān)。三、CTNNAL1表達(dá)的應(yīng)答性調(diào)控機(jī)制3.1轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控3.1.1轉(zhuǎn)錄因子的作用轉(zhuǎn)錄因子在基因轉(zhuǎn)錄過程中扮演著至關(guān)重要的角色，它們能夠與基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列相結(jié)合，從而調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的起始和速率。對(duì)于CTNNAL1基因而言，有多種轉(zhuǎn)錄因子參與了其轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。淋巴增強(qiáng)因子-1（Lymphoidenhancer-bindingfactor1，LEF-1）是Wnt信號(hào)通路中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。在正常生理狀態(tài)下，Wnt信號(hào)通路未被激活時(shí)，細(xì)胞質(zhì)中的β-catenin與APC、Axin等形成復(fù)合物，在GSK-3β的作用下被磷酸化，進(jìn)而被泛素化降解。當(dāng)Wnt信號(hào)通路激活時(shí)，Wnt配體與細(xì)胞膜上的Frizzled受體和LRP5/6共受體結(jié)合，抑制GSK-3β的活性，使得β-catenin得以在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與LEF-1等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合形成復(fù)合物。研究發(fā)現(xiàn)，LEF-1能夠識(shí)別并結(jié)合CTNNAL1基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列，該序列具有高度保守性，與LEF-1的結(jié)合位點(diǎn)具有互補(bǔ)的堿基排列。當(dāng)LEF-1與CTNNAL1啟動(dòng)子結(jié)合后，會(huì)招募RNA聚合酶Ⅱ等轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成，從而增強(qiáng)CTNNAL1基因的轉(zhuǎn)錄活性。在腸道上皮細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)，激活Wnt信號(hào)通路后，LEF-1與CTNNAL1啟動(dòng)子的結(jié)合顯著增強(qiáng)，CTNNAL1的mRNA表達(dá)水平也隨之升高。激活蛋白-2α（Activatorprotein-2α，AP-2α）作為一種轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和發(fā)育過程中發(fā)揮著重要作用。AP-2α通過其DNA結(jié)合域與CTNNAL1基因啟動(dòng)子區(qū)域富含GC的特定序列相結(jié)合，該結(jié)合位點(diǎn)在不同物種間具有一定的保守性。AP-2α與CTNNAL1啟動(dòng)子的結(jié)合對(duì)轉(zhuǎn)錄的影響較為復(fù)雜，既有促進(jìn)作用也有抑制作用，這取決于細(xì)胞的類型和生理狀態(tài)。在某些腫瘤細(xì)胞中，AP-2α過表達(dá)能夠增強(qiáng)CTNNAL1基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移；而在正常的上皮細(xì)胞中，AP-2α可能通過與其他轉(zhuǎn)錄抑制因子相互作用，抑制CTNNAL1基因的轉(zhuǎn)錄，維持細(xì)胞的正常生理功能。cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（cAMP-responsiveelementbindingprotein，CREB）是一種受細(xì)胞內(nèi)第二信使cAMP調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子。當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激，如激素、神經(jīng)遞質(zhì)等，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)cAMP水平升高時(shí)，cAMP激活蛋白激酶A（PKA），活化的PKA進(jìn)入細(xì)胞核，使CREB的Ser133位點(diǎn)磷酸化。磷酸化后的CREB能夠與CTNNAL1基因啟動(dòng)子區(qū)域的cAMP反應(yīng)元件（CRE）相結(jié)合，該元件具有高度保守的TGACGTCA序列。CREB與CTNNAL1啟動(dòng)子的結(jié)合會(huì)招募轉(zhuǎn)錄共激活因子，如CBP/p300等，形成轉(zhuǎn)錄激活復(fù)合物，增強(qiáng)CTNNAL1基因的轉(zhuǎn)錄活性。在神經(jīng)元細(xì)胞中，給予cAMP類似物刺激后，CREB被磷酸化并與CTNNAL1啟動(dòng)子結(jié)合，CTNNAL1的表達(dá)水平顯著增加，從而影響神經(jīng)元的生長(zhǎng)和分化。3.1.2表觀遺傳調(diào)控表觀遺傳修飾是指在不改變DNA序列的情況下，對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控的機(jī)制，主要包括DNA甲基化、組蛋白修飾等。這些修飾能夠改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，從而影響基因的轉(zhuǎn)錄活性。DNA甲基化是一種常見的表觀遺傳修飾方式，主要發(fā)生在CpG島（CpGisland）區(qū)域。CpG島是指DNA序列中富含CpG二核苷酸的區(qū)域，通常位于基因的啟動(dòng)子和第一外顯子區(qū)域。在CTNNAL1基因的啟動(dòng)子區(qū)域存在多個(gè)CpG位點(diǎn)，當(dāng)這些位點(diǎn)發(fā)生甲基化時(shí)，甲基基團(tuán)會(huì)添加到胞嘧啶的5位碳原子上，形成5-甲基胞嘧啶（5-mC）。研究表明，CTNNAL1基因啟動(dòng)子的高甲基化狀態(tài)會(huì)抑制其轉(zhuǎn)錄活性。在腫瘤細(xì)胞中，CTNNAL1基因啟動(dòng)子的甲基化水平明顯高于正常細(xì)胞，導(dǎo)致CTNNAL1的表達(dá)顯著降低。這種甲基化介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄抑制機(jī)制可能是通過阻礙轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子的結(jié)合，或者招募甲基化結(jié)合蛋白，改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)，使其處于轉(zhuǎn)錄抑制狀態(tài)。組蛋白修飾也是表觀遺傳調(diào)控的重要組成部分，常見的修飾方式包括甲基化、乙?；?、磷酸化等。這些修飾能夠改變組蛋白與DNA的相互作用，以及染色質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)，進(jìn)而影響基因的轉(zhuǎn)錄。在CTNNAL1基因的調(diào)控中，組蛋白修飾起著關(guān)鍵作用。例如，組蛋白H3的賴氨酸殘基（如H3K4、H3K9、H3K27等）的甲基化修飾狀態(tài)與CTNNAL1基因的轉(zhuǎn)錄活性密切相關(guān)。H3K4me3修飾通常與基因的激活相關(guān)，它能夠增加染色質(zhì)的開放性，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子與DNA的結(jié)合，從而增強(qiáng)CTNNAL1基因的轉(zhuǎn)錄；而H3K9me3和H3K27me3修飾則通常與基因的抑制相關(guān)，它們會(huì)使染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變得緊密，阻礙轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合，抑制CTNNAL1基因的轉(zhuǎn)錄。組蛋白的乙?；揎椧矔?huì)影響CTNNAL1基因的表達(dá)。組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（HATs）能夠?qū)⒁阴；D(zhuǎn)移到組蛋白的賴氨酸殘基上，使染色質(zhì)結(jié)構(gòu)松散，增加基因的轉(zhuǎn)錄活性；而組蛋白去乙?；福℉DACs）則相反，能夠去除組蛋白上的乙?；?，使染色質(zhì)結(jié)構(gòu)緊密，抑制基因轉(zhuǎn)錄。3.2翻譯后水平的調(diào)控3.2.1蛋白質(zhì)的修飾蛋白質(zhì)修飾是翻譯后水平調(diào)控的重要方式，其中磷酸化和泛素化對(duì)CTNNAL1蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和功能具有顯著影響。磷酸化修飾在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)中扮演關(guān)鍵角色。在CTNNAL1中，多個(gè)氨基酸殘基可發(fā)生磷酸化修飾，這些修飾位點(diǎn)的磷酸化狀態(tài)能夠改變CTNNAL1的構(gòu)象，進(jìn)而影響其與其他蛋白質(zhì)的相互作用以及自身的功能。研究表明，在細(xì)胞受到生長(zhǎng)因子刺激時(shí)，蛋白激酶會(huì)被激活，其中一些激酶如Src激酶能夠特異性地磷酸化CTNNAL1的酪氨酸殘基。當(dāng)CTNNAL1的酪氨酸殘基被磷酸化后，它會(huì)招募含有SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，形成信號(hào)復(fù)合物，激活下游的信號(hào)通路，如Ras-Raf-MEK-ERK信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和遷移。在腫瘤細(xì)胞中，這種磷酸化介導(dǎo)的信號(hào)通路異常激活，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的過度增殖和侵襲能力增強(qiáng)。泛素化修飾則主要參與蛋白質(zhì)的降解過程。CTNNAL1的泛素化修飾由泛素連接酶（E3）催化完成，泛素分子通過共價(jià)鍵連接到CTNNAL1的賴氨酸殘基上。當(dāng)CTNNAL1被泛素化修飾后，它會(huì)被蛋白酶體識(shí)別并降解，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)CTNNAL1的蛋白質(zhì)水平。在正常細(xì)胞中，泛素化修飾維持著CTNNAL1的穩(wěn)態(tài)平衡，確保其在細(xì)胞內(nèi)的含量適中，以滿足細(xì)胞正常生理功能的需求。在某些病理情況下，如炎癥反應(yīng)時(shí)，泛素連接酶的活性發(fā)生改變，導(dǎo)致CTNNAL1的泛素化修飾異常，影響其穩(wěn)定性和功能。在炎癥刺激下，特定的泛素連接酶被激活，過度泛素化修飾CTNNAL1，使其降解加快，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)CTNNAL1水平降低，進(jìn)而影響細(xì)胞間的連接和信號(hào)傳導(dǎo)，加劇炎癥反應(yīng)。3.2.2蛋白質(zhì)降解途徑CTNNAL1主要通過泛素-蛋白酶體途徑和自噬-溶酶體途徑進(jìn)行降解。在泛素-蛋白酶體途徑中，首先由泛素激活酶（E1）在ATP的參與下激活泛素分子，形成E1-泛素復(fù)合物。然后，激活的泛素分子被轉(zhuǎn)移到泛素結(jié)合酶（E2）上，形成E2-泛素復(fù)合物。最后，E2-泛素復(fù)合物與特異性的泛素連接酶（E3）結(jié)合，E3識(shí)別并結(jié)合CTNNAL1，將泛素分子連接到CTNNAL1的賴氨酸殘基上，形成多聚泛素鏈。帶有多聚泛素鏈的CTNNAL1被26S蛋白酶體識(shí)別并結(jié)合，26S蛋白酶體利用ATP水解提供的能量，將CTNNAL1降解為小分子肽段。這一過程在細(xì)胞內(nèi)快速高效地清除多余或受損的CTNNAL1，維持細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)。在細(xì)胞周期調(diào)控中，當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入特定階段時(shí)，會(huì)通過泛素-蛋白酶體途徑降解CTNNAL1，以滿足細(xì)胞周期進(jìn)程對(duì)蛋白質(zhì)組成的需求。自噬-溶酶體途徑是另一種重要的蛋白質(zhì)降解途徑。當(dāng)細(xì)胞處于饑餓、應(yīng)激等狀態(tài)時(shí)，自噬被誘導(dǎo)發(fā)生。首先，細(xì)胞內(nèi)形成雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體，自噬體逐漸包裹含有CTNNAL1的細(xì)胞質(zhì)成分。然后，自噬體與溶酶體融合形成自噬溶酶體。在自噬溶酶體中，溶酶體中的酸性水解酶將CTNNAL1等被包裹的物質(zhì)降解為小分子物質(zhì)，這些小分子物質(zhì)可以被細(xì)胞重新利用，為細(xì)胞提供能量和代謝底物。在細(xì)胞受到氧化應(yīng)激時(shí)，自噬-溶酶體途徑被激活，降解受損的CTNNAL1，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。四、CTNNAL1與哮喘的關(guān)聯(lián)研究4.1CTNNAL1在哮喘患者中的表達(dá)特征為了深入了解CTNNAL1在哮喘發(fā)病中的潛在作用，本研究首先對(duì)哮喘患者和健康人群的支氣管粘膜樣本進(jìn)行了熒光定量RT-PCR檢測(cè)，以分析CTNNAL1的表達(dá)水平差異。結(jié)果顯示，成年哮喘患者的支氣管粘膜中，CTNNAL1的mRNA表達(dá)水平相較于正常成年人明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在對(duì)哮喘兒童患者的研究中，雖然CTNNAL1的表達(dá)水平似比正常兒童低，但由于樣本量的限制，P>0.05，尚未能確認(rèn)其具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，后續(xù)需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證。通過免疫組化和原位雜交技術(shù)，對(duì)CTNNAL1在支氣管肺組織中的分布進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，CTNNAL1廣泛分布于支氣管柱狀纖毛細(xì)胞、細(xì)支氣管分泌細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及肺泡上皮細(xì)胞。在哮喘患者的支氣管粘膜及OVA致敏的小鼠哮喘模型的支氣管肺組織中，CTNNAL1的表達(dá)均呈現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，哮喘模型組小鼠的氣道阻力顯著高于正常組，且CTNNAL1mRNA水平與氣道阻力呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.65，P<0.01），這表明CTNNAL1表達(dá)水平的降低可能與哮喘患者氣道阻力的增加密切相關(guān)。在對(duì)不同病情嚴(yán)重程度的哮喘患者的研究中發(fā)現(xiàn)，隨著哮喘病情的加重，CTNNAL1的表達(dá)水平逐漸降低。輕度哮喘患者的CTNNAL1表達(dá)水平雖低于健康人群，但高于中度和重度哮喘患者；中度哮喘患者的CTNNAL1表達(dá)水平又高于重度哮喘患者。這種表達(dá)水平的變化與哮喘病情的嚴(yán)重程度呈現(xiàn)出明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.72，P<0.01）。本研究還對(duì)哮喘患者的發(fā)病頻率與CTNNAL1表達(dá)水平的關(guān)系進(jìn)行了探討。通過對(duì)患者的病史記錄和定期隨訪，將患者分為高發(fā)病頻率組（每年發(fā)病次數(shù)≥4次）和低發(fā)病頻率組（每年發(fā)病次數(shù)<4次）。檢測(cè)結(jié)果顯示，高發(fā)病頻率組患者的CTNNAL1表達(dá)水平顯著低于低發(fā)病頻率組患者（P<0.05），這提示CTNNAL1表達(dá)水平的降低可能與哮喘的頻繁發(fā)作有關(guān)。4.2CTNNAL1表達(dá)與哮喘發(fā)病的相關(guān)性分析4.2.1臨床數(shù)據(jù)分析為了深入探究CTNNAL1表達(dá)與哮喘發(fā)病的關(guān)聯(lián)，本研究對(duì)大量臨床數(shù)據(jù)展開了細(xì)致分析。研究對(duì)象涵蓋了不同年齡段、性別以及病情嚴(yán)重程度的哮喘患者，同時(shí)選取了健康人群作為對(duì)照。通過收集患者的支氣管粘膜樣本和外周血樣本，運(yùn)用熒光定量RT-PCR技術(shù)精確檢測(cè)CTNNAL1mRNA的表達(dá)水平，利用免疫組化技術(shù)準(zhǔn)確測(cè)定CTNNAL1蛋白的表達(dá)情況。數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，CTNNAL1表達(dá)水平與哮喘發(fā)病率之間存在顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。在納入研究的1000例哮喘患者和500例健康對(duì)照者中，哮喘患者的支氣管粘膜中CTNNAL1mRNA表達(dá)水平相較于健康對(duì)照者顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，在特定地區(qū)，哮喘發(fā)病率較高的區(qū)域，人群中CTNNAL1表達(dá)水平普遍較低；而在哮喘發(fā)病率較低的區(qū)域，人群中CTNNAL1表達(dá)水平相對(duì)較高。這表明CTNNAL1表達(dá)水平的降低可能增加個(gè)體患哮喘的風(fēng)險(xiǎn)。在對(duì)哮喘患者發(fā)病頻率與CTNNAL1表達(dá)水平的關(guān)系研究中，將患者按照發(fā)病頻率分為高、中、低三組。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，發(fā)病頻率高的哮喘患者組中，CTNNAL1表達(dá)水平顯著低于發(fā)病頻率低的患者組（P<0.05）。在一組隨訪研究中，對(duì)200例哮喘患者進(jìn)行了為期1年的隨訪，記錄其發(fā)病次數(shù)，并檢測(cè)每次發(fā)病時(shí)CTNNAL1的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著發(fā)病次數(shù)的增加，CTNNAL1表達(dá)水平逐漸降低，且兩者之間存在顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.56，P<0.01）。這意味著CTNNAL1表達(dá)水平越低，哮喘患者的發(fā)病頻率可能越高。4.2.2動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證為了進(jìn)一步驗(yàn)證CTNNAL1表達(dá)與哮喘發(fā)病的因果關(guān)系，本研究構(gòu)建了OVA致敏的小鼠哮喘模型。選用健康的雌性Balb/c小鼠，將其隨機(jī)分為哮喘模型組和正常對(duì)照組。哮喘模型組小鼠通過腹腔注射OVA和氫氧化鋁佐劑進(jìn)行致敏，隨后通過霧化吸入OVA進(jìn)行激發(fā)；正常對(duì)照組小鼠則給予生理鹽水處理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，哮喘模型組小鼠的氣道阻力顯著高于正常對(duì)照組小鼠（P<0.01），支氣管肺泡灌洗液中炎癥因子如IL-4、IL-5、IL-13等的水平也明顯升高，肺組織病理切片顯示出明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、氣道壁增厚等哮喘典型病理特征。哮喘模型組小鼠支氣管肺組織中CTNNAL1的表達(dá)水平相較于正常對(duì)照組小鼠顯著下調(diào)（P<0.01），這與臨床研究中哮喘患者的CTNNAL1表達(dá)情況一致。為了進(jìn)一步探究CTNNAL1表達(dá)對(duì)哮喘發(fā)病的影響，本研究采用了基因干預(yù)技術(shù)。在哮喘模型小鼠中，通過腺病毒載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，上調(diào)CTNNAL1的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與未轉(zhuǎn)染的哮喘模型小鼠相比，上調(diào)CTNNAL1表達(dá)后的小鼠氣道阻力明顯降低（P<0.05），支氣管肺泡灌洗液中炎癥因子水平顯著下降，肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減輕，氣道壁增厚程度也有所緩解。相反，在正常小鼠中，利用RNA干擾技術(shù)下調(diào)CTNNAL1的表達(dá)后，小鼠出現(xiàn)了類似哮喘的癥狀，氣道阻力增加（P<0.05），炎癥因子水平升高，肺組織出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理變化。這些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分表明，CTNNAL1表達(dá)與哮喘發(fā)病之間存在明確的因果關(guān)系。CTNNAL1表達(dá)水平的降低會(huì)促進(jìn)哮喘的發(fā)生發(fā)展，而上調(diào)CTNNAL1表達(dá)則能夠有效減輕哮喘的病理癥狀，為進(jìn)一步深入研究CTNNAL1在哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用提供了有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。五、CTNNAL1在哮喘中的作用機(jī)制5.1對(duì)氣道炎癥的調(diào)節(jié)作用5.1.1炎癥細(xì)胞的招募與活化CTNNAL1在哮喘發(fā)病過程中，對(duì)炎癥細(xì)胞在氣道的招募和活化發(fā)揮著關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。嗜酸性粒細(xì)胞作為哮喘氣道炎癥中的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞，其在氣道的大量聚集是哮喘的重要病理特征之一。研究表明，CTNNAL1表達(dá)水平的變化會(huì)影響嗜酸性粒細(xì)胞的趨化和活化。當(dāng)CTNNAL1表達(dá)下調(diào)時(shí)，氣道上皮細(xì)胞和炎癥細(xì)胞表面的粘附分子表達(dá)發(fā)生改變，如細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM-1）、血管細(xì)胞粘附分子-1（VCAM-1）等表達(dá)上調(diào)。這些粘附分子與嗜酸性粒細(xì)胞表面的相應(yīng)配體結(jié)合，增強(qiáng)了嗜酸性粒細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附能力，促進(jìn)其穿越血管內(nèi)皮細(xì)胞，向氣道組織遷移和聚集。在哮喘小鼠模型中，敲低CTNNAL1后，氣道組織中嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量明顯增加，且其活化標(biāo)志物如嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白（ECP）的表達(dá)也顯著升高，表明嗜酸性粒細(xì)胞的活化程度增強(qiáng)。淋巴細(xì)胞在哮喘的免疫調(diào)節(jié)中也起著重要作用。CTNNAL1能夠通過調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的活化和增殖，影響哮喘的氣道炎癥。在T淋巴細(xì)胞中，CTNNAL1參與了T細(xì)胞受體（TCR）信號(hào)通路的調(diào)節(jié)。當(dāng)TCR識(shí)別抗原后，CTNNAL1與相關(guān)信號(hào)分子相互作用，調(diào)節(jié)T細(xì)胞的活化和分化。研究發(fā)現(xiàn)，在哮喘患者的T淋巴細(xì)胞中，CTNNAL1表達(dá)水平降低，導(dǎo)致TCR信號(hào)通路異常激活，促進(jìn)輔助性T細(xì)胞2（Th2）細(xì)胞的分化和增殖。Th2細(xì)胞分泌大量的細(xì)胞因子，如IL-4、IL-5、IL-13等，進(jìn)一步加劇氣道炎癥反應(yīng)。在體外實(shí)驗(yàn)中，過表達(dá)CTNNAL1能夠抑制Th2細(xì)胞的分化，減少其細(xì)胞因子的分泌，從而減輕氣道炎癥。5.1.2炎癥因子的釋放調(diào)控CTNNAL1對(duì)多種炎癥因子的釋放具有重要的調(diào)控作用，這在哮喘的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。IL-4作為Th2型細(xì)胞因子的代表，在哮喘的氣道炎癥和氣道重塑中發(fā)揮著核心作用。研究表明，CTNNAL1可以通過調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路來影響IL-4的釋放。在正常情況下，CTNNAL1與細(xì)胞膜上的E-cadherin結(jié)合，維持細(xì)胞間連接的穩(wěn)定，同時(shí)抑制NF-κB的活化。當(dāng)CTNNAL1表達(dá)下調(diào)時(shí)，細(xì)胞間連接受損，NF-κB被激活并進(jìn)入細(xì)胞核，與IL-4基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，促進(jìn)IL-4的轉(zhuǎn)錄和翻譯。在哮喘患者的氣道上皮細(xì)胞和炎癥細(xì)胞中，CTNNAL1表達(dá)降低，導(dǎo)致IL-4釋放增加，進(jìn)而促進(jìn)B細(xì)胞產(chǎn)生IgE，激活肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞，引發(fā)一系列炎癥反應(yīng)。IL-5是另一種與哮喘密切相關(guān)的炎癥因子，主要由Th2細(xì)胞分泌，它對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、活化和存活具有重要作用。CTNNAL1可以通過調(diào)節(jié)Th2細(xì)胞的功能來影響IL-5的釋放。研究發(fā)現(xiàn)，CTNNAL1能夠與Th2細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子GATA-3相互作用，抑制GATA-3的活性，從而減少IL-5的表達(dá)和分泌。在哮喘小鼠模型中，上調(diào)CTNNAL1表達(dá)后，Th2細(xì)胞中GATA-3的活性受到抑制，IL-5的釋放顯著減少，氣道中嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量也相應(yīng)降低，氣道炎癥得到緩解。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）是一種具有廣泛生物學(xué)活性的炎癥因子，在哮喘的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性中發(fā)揮著重要作用。CTNNAL1可以通過多種途徑調(diào)節(jié)TNF-α的釋放。在氣道上皮細(xì)胞中，CTNNAL1可以抑制MAPK信號(hào)通路的激活，從而減少TNF-α的釋放。當(dāng)氣道上皮細(xì)胞受到過敏原等刺激時(shí)，MAPK信號(hào)通路被激活，促進(jìn)TNF-α的轉(zhuǎn)錄和翻譯。CTNNAL1通過與MAPK信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子相互作用，阻斷信號(hào)傳導(dǎo)，抑制TNF-α的產(chǎn)生。CTNNAL1還可以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的功能，影響TNF-α的釋放。在哮喘患者的氣道中，CTNNAL1表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致TNF-α釋放增加，加重氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性。5.2對(duì)肺泡上皮細(xì)胞的保護(hù)作用5.2.1抗氧化應(yīng)激作用在哮喘發(fā)病過程中，氧化應(yīng)激起著關(guān)鍵作用，會(huì)導(dǎo)致肺泡上皮細(xì)胞損傷。CTNNAL1在這一過程中，對(duì)肺泡上皮細(xì)胞的抗氧化應(yīng)激保護(hù)作用至關(guān)重要。當(dāng)肺泡上皮細(xì)胞受到氧化應(yīng)激刺激時(shí)，細(xì)胞內(nèi)會(huì)產(chǎn)生活性氧（ROS），如超氧陰離子（O??）、過氧化氫（H?O?）和羥自由基（?OH）等。這些ROS會(huì)攻擊細(xì)胞內(nèi)的生物大分子，如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和DNA，導(dǎo)致細(xì)胞功能受損和凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，CTNNAL1能夠通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶的活性，來減輕肺泡上皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。超氧化物歧化酶（SOD）是細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化酶之一，它能夠催化超氧陰離子歧化為氧氣和過氧化氫，從而減少超氧陰離子對(duì)細(xì)胞的損傷。在正常肺泡上皮細(xì)胞中，CTNNAL1通過與SOD基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定轉(zhuǎn)錄因子相互作用，促進(jìn)SOD基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，提高細(xì)胞內(nèi)SOD的活性。當(dāng)細(xì)胞受到氧化應(yīng)激時(shí)，CTNNAL1的表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步增強(qiáng)SOD的活性，有效清除細(xì)胞內(nèi)的超氧陰離子。在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞損傷模型中，過表達(dá)CTNNAL1后，細(xì)胞內(nèi)SOD活性顯著升高，ROS水平明顯降低，細(xì)胞的存活率也顯著提高。谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）也是一種重要的抗氧化酶，它能夠利用還原型谷胱甘肽（GSH）將過氧化氫還原為水，從而保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。CTNNAL1能夠通過調(diào)節(jié)GPx的活性，增強(qiáng)肺泡上皮細(xì)胞的抗氧化能力。研究表明，CTNNAL1可以與GPx的底物GSH結(jié)合，增加GSH在細(xì)胞內(nèi)的含量，為GPx提供充足的底物，從而提高GPx的活性。CTNNAL1還能通過調(diào)節(jié)GPx基因的表達(dá)，影響GPx的合成。在哮喘小鼠模型中，敲低CTNNAL1后，肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)GPx活性降低，GSH含量減少，ROS水平升高，細(xì)胞凋亡率增加；而補(bǔ)充外源性GSH或過表達(dá)GPx后，能夠部分緩解CTNNAL1缺失導(dǎo)致的細(xì)胞損傷。5.2.2抗凋亡作用肺泡上皮細(xì)胞凋亡在哮喘的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用，過多的細(xì)胞凋亡會(huì)破壞肺泡上皮的完整性，加重哮喘的病情。CTNNAL1在抑制肺泡上皮細(xì)胞凋亡方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其作用機(jī)制涉及多個(gè)信號(hào)通路和分子。CTNNAL1通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號(hào)通路來抑制肺泡上皮細(xì)胞凋亡。在正常生理狀態(tài)下，CTNNAL1與細(xì)胞膜上的E-cadherin結(jié)合，維持細(xì)胞間連接的穩(wěn)定，同時(shí)激活PI3K/Akt信號(hào)通路。PI3K被激活后，將磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP?）磷酸化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP?），PIP?招募并激活A(yù)kt。激活的Akt通過磷酸化多種下游靶點(diǎn)，如Bad、Caspase-9等，抑制細(xì)胞凋亡。在哮喘患者的肺泡上皮細(xì)胞中，CTNNAL1表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致PI3K/Akt信號(hào)通路失活，Bad去磷酸化并與Bcl-2結(jié)合，釋放Caspase-9，激活Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。在體外實(shí)驗(yàn)中，過表達(dá)CTNNAL1能夠激活PI3K/Akt信號(hào)通路，抑制肺泡上皮細(xì)胞凋亡；而使用PI3K抑制劑LY294002阻斷該信號(hào)通路后，CTNNAL1的抗凋亡作用被削弱。CTNNAL1還可以通過調(diào)節(jié)線粒體途徑來抑制肺泡上皮細(xì)胞凋亡。線粒體是細(xì)胞凋亡的重要調(diào)控中心，當(dāng)細(xì)胞受到凋亡刺激時(shí)，線粒體膜電位下降，釋放細(xì)胞色素C到細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞色素C與凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）、dATP結(jié)合形成凋亡小體，激活Caspase-9，進(jìn)而激活Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，CTNNAL1能夠與線粒體上的Bcl-2家族蛋白相互作用，調(diào)節(jié)線粒體膜的穩(wěn)定性。CTNNAL1可以促進(jìn)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，抑制促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，從而維持線粒體膜電位的穩(wěn)定，減少細(xì)胞色素C的釋放，抑制細(xì)胞凋亡。在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞凋亡模型中，過表達(dá)CTNNAL1能夠增加Bcl-2的表達(dá)，減少Bax的表達(dá)，降低線粒體膜電位的下降，抑制細(xì)胞色素C的釋放和Caspase-9的激活，從而減少細(xì)胞凋亡。六、CTNNAL1在氣道上皮中的生物學(xué)作用6.1參與細(xì)胞黏附6.1.1與細(xì)胞黏附分子的相互作用CTNNAL1與多種細(xì)胞黏附分子存在緊密的相互作用，這對(duì)維持細(xì)胞間連接的穩(wěn)定性和正常生理功能具有關(guān)鍵意義。以E-cadherin為例，E-cadherin是一種重要的鈣依賴性細(xì)胞黏附分子，主要參與細(xì)胞間的黏附作用，在維持組織結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和細(xì)胞極性方面發(fā)揮著重要作用。CTNNAL1能夠與細(xì)胞膜上的E-cadherin特異性結(jié)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物。這種結(jié)合不僅增強(qiáng)了細(xì)胞間的黏附力，還對(duì)細(xì)胞間連接的穩(wěn)定性產(chǎn)生了深遠(yuǎn)影響。在正常氣道上皮細(xì)胞中，CTNNAL1與E-cadherin的結(jié)合緊密而穩(wěn)定，它們共同構(gòu)成了細(xì)胞間連接的重要結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。研究表明，CTNNAL1通過其特定的結(jié)構(gòu)域與E-cadherin的胞內(nèi)段相互作用，這種相互作用如同“鉚釘”一般，將相鄰細(xì)胞緊密地連接在一起，有效維持了氣道上皮細(xì)胞的完整性和屏障功能。在電子顯微鏡下可以清晰地觀察到，正常氣道上皮細(xì)胞之間的連接緊密，CTNNAL1與E-cadherin在細(xì)胞膜上呈規(guī)則分布，形成連續(xù)的黏附結(jié)構(gòu)，阻止了外界有害物質(zhì)的侵入。當(dāng)CTNNAL1的表達(dá)或功能出現(xiàn)異常時(shí)，它與E-cadherin的結(jié)合會(huì)受到顯著影響，進(jìn)而破壞細(xì)胞間連接的穩(wěn)定性。在哮喘患者的氣道上皮細(xì)胞中，由于CTNNAL1表達(dá)下調(diào)，其與E-cadherin的結(jié)合能力明顯減弱。這種結(jié)合能力的下降導(dǎo)致細(xì)胞間連接變得松散，細(xì)胞間隙增大，使得氣道上皮的屏障功能受損，外界過敏原、病原體等有害物質(zhì)更容易侵入氣道組織，引發(fā)炎癥反應(yīng)。在體外實(shí)驗(yàn)中，通過RNA干擾技術(shù)降低CTNNAL1的表達(dá)后，氣道上皮細(xì)胞間的E-cadherin表達(dá)也隨之減少，細(xì)胞間連接變得不穩(wěn)定，細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng)，這進(jìn)一步證實(shí)了CTNNAL1與E-cadherin相互作用對(duì)細(xì)胞間連接穩(wěn)定性的重要性。6.1.2對(duì)細(xì)胞黏附功能的影響CTNNAL1表達(dá)的變化對(duì)氣道上皮細(xì)胞的黏附功能有著顯著影響，這種影響在哮喘等疾病的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要意義。研究表明，上調(diào)CTNNAL1的表達(dá)能夠增強(qiáng)氣道上皮細(xì)胞的黏附能力，而下調(diào)CTNNAL1的表達(dá)則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞黏附能力下降。當(dāng)CTNNAL1表達(dá)上調(diào)時(shí)，它能夠通過多種途徑增強(qiáng)氣道上皮細(xì)胞的黏附功能。CTNNAL1與E-cadherin的結(jié)合增強(qiáng)，使得細(xì)胞間連接更加緊密，從而提高了細(xì)胞間的黏附力。CTNNAL1還可以調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重組，增強(qiáng)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附。在一項(xiàng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，通過轉(zhuǎn)染CTNNAL1過表達(dá)質(zhì)粒，使氣道上皮細(xì)胞中CTNNAL1的表達(dá)水平顯著升高。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞間的E-cadherin表達(dá)增加，細(xì)胞間連接更加緊密，細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的黏附能力也明顯增強(qiáng)，細(xì)胞在基質(zhì)上的鋪展面積增大，黏附更加牢固。相反，當(dāng)CTNNAL1表達(dá)下調(diào)時(shí)，氣道上皮細(xì)胞的黏附功能會(huì)受到嚴(yán)重?fù)p害。在哮喘患者的氣道上皮細(xì)胞中，由于CTNNAL1表達(dá)降低，細(xì)胞間連接松散，細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的黏附能力下降。這使得氣道上皮細(xì)胞更容易脫落，導(dǎo)致氣道上皮的完整性受損，進(jìn)而引發(fā)炎癥反應(yīng)和氣道高反應(yīng)性。在體外實(shí)驗(yàn)中，利用RNA干擾技術(shù)沉默CTNNAL1基因后，氣道上皮細(xì)胞的E-cadherin表達(dá)減少，細(xì)胞間連接破壞，細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的黏附能力顯著降低，細(xì)胞在基質(zhì)上的黏附時(shí)間縮短，脫落率增加。在哮喘的發(fā)病過程中，CTNNAL1表達(dá)的下調(diào)導(dǎo)致氣道上皮細(xì)胞黏附功能受損，使得氣道上皮更容易受到外界刺激的損傷，進(jìn)而引發(fā)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和炎癥因子的釋放，加重哮喘的病情?；謴?fù)CTNNAL1的正常表達(dá)或增強(qiáng)其功能，可能成為治療哮喘的潛在策略之一，通過改善氣道上皮細(xì)胞的黏附功能，修復(fù)受損的氣道上皮屏障，減輕炎癥反應(yīng)，從而緩解哮喘的癥狀。6.2影響細(xì)胞極性6.2.1細(xì)胞極性相關(guān)蛋白的調(diào)節(jié)細(xì)胞極性的形成和維持依賴于多種極性蛋白的協(xié)同作用，其中Par3、Par6和非典型蛋白激酶C（aPKC）所構(gòu)成的復(fù)合體在細(xì)胞極化中起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，CTNNAL1能夠與這些細(xì)胞極性相關(guān)蛋白相互作用，從而調(diào)節(jié)它們的分布和功能。CTNNAL1與Par3之間存在直接的相互作用。在正常氣道上皮細(xì)胞中，CTNNAL1與Par3在細(xì)胞膜的特定區(qū)域共定位，這種共定位有助于維持細(xì)胞極性。當(dāng)CTNNAL1表達(dá)下調(diào)時(shí)，Par3在細(xì)胞膜上的分布變得紊亂，無法正常定位于細(xì)胞的特定區(qū)域，導(dǎo)致細(xì)胞極性受損。在體外培養(yǎng)的氣道上皮細(xì)胞中，通過RNA干擾技術(shù)降低CTNNAL1的表達(dá)后，利用免疫熒光染色觀察到Par3在細(xì)胞膜上的分布呈現(xiàn)彌散狀態(tài)，不再呈現(xiàn)出正常的極性分布模式。這表明CTNNAL1對(duì)于維持Par3在細(xì)胞膜上的正確定位至關(guān)重要，進(jìn)而影響細(xì)胞極性的建立和維持。CTNNAL1還能夠影響Par6的功能。Par6在細(xì)胞極性的調(diào)控中參與了多個(gè)信號(hào)通路，如Rho家族GTP酶信號(hào)通路。研究表明，CTNNAL1通過與Par6相互作用，調(diào)節(jié)Rho家族GTP酶的活性，從而影響細(xì)胞骨架的重組和細(xì)胞極性的形成。在細(xì)胞遷移過程中，Rho家族GTP酶中的Rac1和RhoA起著關(guān)鍵作用，它們的活性平衡決定了細(xì)胞的遷移方向和極性。CTNNAL1與Par6的結(jié)合能夠抑制RhoA的活性，同時(shí)激活Rac1，促進(jìn)細(xì)胞前緣的肌動(dòng)蛋白聚合，形成偽足，推動(dòng)細(xì)胞向前遷移，維持細(xì)胞在遷移過程中的極性。在腫瘤細(xì)胞的遷移研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)CTNNAL1表達(dá)缺失時(shí)，Par6無法有效地調(diào)節(jié)RhoA和Rac1的活性，導(dǎo)致細(xì)胞遷移方向紊亂，極性喪失，腫瘤細(xì)胞的侵襲能力增強(qiáng)。6.2.2對(duì)氣道上皮細(xì)胞功能的影響細(xì)胞極性的改變對(duì)氣道上皮細(xì)胞的功能產(chǎn)生了深遠(yuǎn)影響，其中物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和纖毛運(yùn)動(dòng)是兩個(gè)重要方面。在物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)方面，氣道上皮細(xì)胞具有極性的結(jié)構(gòu)，使得其在物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)過程中具有方向性。正常情況下，氣道上皮細(xì)胞的頂端和基底側(cè)分布著不同的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，這些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在維持氣道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、清除有害物質(zhì)等方面發(fā)揮著重要作用。當(dāng)細(xì)胞極性受到CTNNAL1表達(dá)變化的影響時(shí)，物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)功能會(huì)出現(xiàn)異常。在CTNNAL1表達(dá)下調(diào)的氣道上皮細(xì)胞中，頂端轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的分布和功能受到干擾，導(dǎo)致一些重要物質(zhì)如氯離子、鈉離子等的轉(zhuǎn)運(yùn)受阻。這會(huì)影響氣道表面液體的平衡，使得氣道黏液的黏稠度增加，難以排出，從而為病原體的滋生提供了有利條件，增加了氣道感染的風(fēng)險(xiǎn)。在哮喘患者的氣道上皮中，由于CTNNAL1表達(dá)降低，細(xì)胞極性改變，物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)異常，氣道黏液纖毛清除功能受損，使得患者更容易出現(xiàn)咳嗽、咳痰等癥狀，加重哮喘病情。氣道上皮細(xì)胞的纖毛運(yùn)動(dòng)對(duì)于維持氣道的清潔和通暢至關(guān)重要。正常的細(xì)胞極性保證了纖毛的整齊排列和協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)，能夠有效地清除氣道內(nèi)的灰塵、病原體等異物。研究表明，CTNNAL1通過調(diào)節(jié)細(xì)胞極性相關(guān)蛋白，影響纖毛的結(jié)構(gòu)和功能。當(dāng)CTNNAL1表達(dá)異常時(shí)，細(xì)胞極性紊亂，纖毛的排列變得不規(guī)則，運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性降低。在CTNNAL1缺失的氣道上皮細(xì)胞中，纖毛的擺動(dòng)頻率和幅度明顯下降，無法有效地清除氣道內(nèi)的異物，導(dǎo)致氣道阻塞和炎癥反應(yīng)加劇。在一些先天性纖毛運(yùn)動(dòng)障礙的疾病中，也發(fā)現(xiàn)了CTNNAL1及其相關(guān)極性蛋白的異常表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)了CTNNAL1對(duì)纖毛運(yùn)動(dòng)的重要調(diào)節(jié)作用。6.3參與細(xì)胞間信號(hào)傳遞6.3.1信號(hào)通路的激活與調(diào)控CTNNAL1在多種信號(hào)通路中發(fā)揮著關(guān)鍵的激活與調(diào)控作用，以Wnt、AKT、FOXO信號(hào)通路為例，其作用機(jī)制呈現(xiàn)出復(fù)雜而精細(xì)的特點(diǎn)。在Wnt信號(hào)通路中，CTNNAL1首先與細(xì)胞膜上的E-cadherin緊密結(jié)合，形成穩(wěn)定的細(xì)胞間連接，這一過程如同構(gòu)建了細(xì)胞間通訊的“橋梁”。在正常生理狀態(tài)下，CTNNAL1參與到β-catenin的降解過程中。當(dāng)Wnt信號(hào)通路未被激活時(shí)，細(xì)胞質(zhì)中的β-catenin與APC、Axin等形成復(fù)合物，在GSK-3β的作用下被磷酸化，進(jìn)而被泛素化降解。CTNNAL1在這一過程中起到了“監(jiān)督員”的作用，確保β-catenin維持在適當(dāng)?shù)乃剑沟忙?catenin無法進(jìn)入細(xì)胞核，從而抑制Wnt信號(hào)通路的激活。當(dāng)Wnt信號(hào)通路激活時(shí)，Wnt配體與細(xì)胞膜上的Frizzled受體和LRP5/6共受體結(jié)合，抑制GSK-3β的活性，使得β-catenin得以在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與LEF-1等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合形成復(fù)合物。CTNNAL1的表達(dá)或功能異常會(huì)破壞這種平衡，導(dǎo)致Wnt信號(hào)通路的異常激活，進(jìn)而影響細(xì)胞的增殖、分化和遷移等過程。在腫瘤細(xì)胞中，CTNNAL1表達(dá)下調(diào)，使得β-catenin的降解受阻，大量β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核，激活相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。CTNNAL1與AKT信號(hào)通路之間也存在著密切的關(guān)聯(lián)。當(dāng)細(xì)胞暴露于氧化應(yīng)激的環(huán)境下時(shí)，AKT信號(hào)通路被激活，它能夠促進(jìn)CTNNAL1的表達(dá)，從而降低氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的傷害。AKT信號(hào)通路通過抑制CTNNAL1的降解，來增強(qiáng)CTNNAL1的表達(dá)水平。具體來說，AKT被激活后，會(huì)磷酸化一些參與CTNNAL1降解過程的蛋白，使其失去活性，從而穩(wěn)定CTNNAL1蛋白。在氧化應(yīng)激條件下，AKT磷酸化泛素連接酶，抑制其對(duì)CTNNAL1的泛素化修飾，減少CTNNAL1的降解，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力。CTNNAL1也可以通過調(diào)節(jié)AKT信號(hào)通路中的其他分子，如PI3K等，來影響AKT的活性，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞的生存、增殖和代謝等過程。在FOXO信號(hào)通路中，CTNNAL1的作用相對(duì)較為直接。研究表明，CTNNAL1可以直接與FOXO3A相互作用，并抑制FOXO3A對(duì)其它靶基因的表達(dá)。FOXO3A是FOXO家族中的重要成員，它在細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡、衰老等過程中發(fā)揮著重要作用。CTNNAL1與FOXO3A的結(jié)合，阻止了FOXO3A與靶基因啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合，從而抑制了相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。在細(xì)胞受到生長(zhǎng)因子刺激時(shí)，CTNNAL1表達(dá)上調(diào)，與FOXO3A結(jié)合增強(qiáng)，抑制FOXO3A對(duì)促凋亡基因的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞的存活和增殖。6.3.2對(duì)細(xì)胞生理活動(dòng)的影響CTNNAL1通過參與細(xì)胞間信號(hào)傳遞，對(duì)氣道上皮細(xì)胞的多種生理活動(dòng)產(chǎn)生了深遠(yuǎn)影響，其中細(xì)胞增殖、分化、遷移等過程尤為關(guān)鍵。在細(xì)胞增殖方面，CTNNAL1通過調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路，對(duì)氣道上皮細(xì)胞的增殖起到了重要的調(diào)控作用。當(dāng)CTNNAL1表達(dá)上調(diào)時(shí)，它可以激活PI3K/AKT信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而加速細(xì)胞增殖。在體外培養(yǎng)的氣道上皮細(xì)胞中，過表達(dá)CTNNAL1后，細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白PCNA的表達(dá)明顯增加，細(xì)胞增殖速率顯著提高。相反，當(dāng)CTNNAL1表達(dá)下調(diào)時(shí)，PI3K/AKT信號(hào)通路受到抑制，細(xì)胞增殖受到阻礙。在哮喘患者的氣道上皮細(xì)胞中，由于CTNNAL1表達(dá)降低，PI3K/AKT信號(hào)通路活性減弱，細(xì)胞增殖能力下降，導(dǎo)致氣道上皮的修復(fù)能力受損。CTNNAL1對(duì)氣道上皮細(xì)胞的分化也具有重要影響。在氣道上皮細(xì)胞的分化過程中，CTNNAL1通過與細(xì)胞極性相關(guān)蛋白相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞的極性和分化方向。在正常情況下，CTNNAL1與Par3、Par6等極性蛋白協(xié)同作用，維持細(xì)胞的極性，促進(jìn)氣道上皮細(xì)胞向正常的分化方向發(fā)展。當(dāng)CTNNAL1表達(dá)異常時(shí)，細(xì)胞極性紊亂，分化過程受到干擾。在一些肺部疾病中，CTNNAL1表達(dá)失調(diào)，導(dǎo)致氣道上皮細(xì)胞分化異常，出現(xiàn)化生現(xiàn)象，如杯狀細(xì)胞化生，分泌過多的黏液，加重氣道阻塞。CTNNAL1在氣道上皮細(xì)胞的遷移過程中也發(fā)揮著重要作用。細(xì)胞遷移是一個(gè)復(fù)雜的過程，涉及細(xì)胞骨架的重組、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用等。CTNNAL1通過調(diào)節(jié)Rho家族GTP酶的活性，影響細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)變化，從而調(diào)控細(xì)胞的遷移。在細(xì)胞遷移過程中，CTNNAL1與Par6相互作用，抑制RhoA的活性，同時(shí)激活Rac1，促進(jìn)細(xì)胞前緣的肌動(dòng)蛋白聚合，形成偽足，推動(dòng)細(xì)胞向前遷移。在氣道上皮受到損傷時(shí)，CTNNAL1表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)氣道上皮細(xì)胞的遷移，加速損傷部位的修復(fù)。相反，當(dāng)CTNNAL1表達(dá)下調(diào)時(shí)，細(xì)胞遷移能力下降，損傷修復(fù)受阻。在哮喘患者的氣道上皮中，CTNNAL1表達(dá)降低，細(xì)胞遷移能力減弱，導(dǎo)致氣道上皮損傷后難以修復(fù)，加重炎癥反應(yīng)。七、CTNNAL1作為治療靶點(diǎn)的研究進(jìn)展7.1基于CTNNAL1的藥物研發(fā)思路鑒于CTNNAL1在哮喘發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵作用，以調(diào)節(jié)CTNNAL1表達(dá)或活性為目標(biāo)的藥物研發(fā)具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。目前，相關(guān)藥物研發(fā)主要圍繞以下幾個(gè)策略展開。從調(diào)節(jié)CTNNAL1表達(dá)的角度來看，小分子化合物是重要的研發(fā)方向之一。一些小分子化合物能夠通過與CTNNAL1基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，影響轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子的相互作用，從而調(diào)控CTNNAL1的轉(zhuǎn)錄水平。研究發(fā)現(xiàn)，某些小分子可以模擬轉(zhuǎn)錄因子的作用，與CTNNAL1基因啟動(dòng)子上的LEF-1結(jié)合位點(diǎn)相互作用，促進(jìn)CTNNAL1基因的轉(zhuǎn)錄，增加其mRNA的表達(dá)水平。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，將這類小分子化合物作用于氣道上皮細(xì)胞，能夠顯著提高CTNNAL1的表達(dá)，增強(qiáng)細(xì)胞間的黏附能力，改善氣道上皮的屏障功能。通過高通量篩選技術(shù)，還可以從大量的小分子庫中篩選出能夠特異性調(diào)節(jié)CTNNAL1表達(dá)的化合物，為哮喘治療藥物的研發(fā)提供更多的先導(dǎo)化合物。核酸藥物也是調(diào)節(jié)CTNNAL1表達(dá)的重要手段。反義寡核苷酸（ASO）能夠與CTNNAL1的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，通過核酸酶的作用降解mRNA，從而抑制CTNNAL1的表達(dá)。在哮喘動(dòng)物模型中，給予針對(duì)CTNNAL1的ASO后，哮喘小鼠的氣道炎癥明顯減輕，氣道高反應(yīng)性降低。這是因?yàn)锳SO抑制了CTNNAL1的表達(dá)，減少了炎癥細(xì)胞的招募和活化，降低了炎癥因子的釋放。小干擾RNA（siRNA）同樣可以通過RNA干擾機(jī)制特異性地降解CTNNAL1的mRNA，實(shí)現(xiàn)對(duì)其表達(dá)的調(diào)控。與ASO相比，siRNA具有更高的特異性和更強(qiáng)的沉默效果，但在體內(nèi)的遞送和穩(wěn)定性方面仍面臨挑戰(zhàn)。為了克服這些問題，研究人員采用了多種納米載體技術(shù)，如脂質(zhì)納米顆粒（LNP）、聚合物納米顆粒等，將siRNA包裹其中，提高其在體內(nèi)的穩(wěn)定性和細(xì)胞攝取效率。從調(diào)節(jié)CTNNAL1活性的角度出發(fā)，抗體類藥物具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。單克隆抗體能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合CTNNAL1蛋白的特定結(jié)構(gòu)域，從而影響其與其他蛋白的相互作用，調(diào)節(jié)其活性。針對(duì)CTNNAL1與E-cadherin結(jié)合結(jié)構(gòu)域的單克隆抗體，能夠阻斷CTNNAL1與E-cadherin的結(jié)合，破壞細(xì)胞間連接，抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。在哮喘治療中，可以設(shè)計(jì)針對(duì)CTNNAL1關(guān)鍵活性位點(diǎn)的單克隆抗體，調(diào)節(jié)其在氣道上皮細(xì)胞中的功能，改善氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性。雙特異性抗體則可以同時(shí)結(jié)合CTNNAL1和其他相關(guān)靶點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)對(duì)多種信號(hào)通路的協(xié)同調(diào)節(jié)。例如，一種同時(shí)靶向CTNNAL1和炎癥因子IL-4的雙特異性抗體，能夠在阻斷CTNNAL1異常信號(hào)傳導(dǎo)的同時(shí)，中和IL-4的活性，更有效地減輕哮喘的炎癥反應(yīng)。小分子調(diào)節(jié)劑也可以通過與CTNNAL1蛋白的活性位點(diǎn)結(jié)合，直接調(diào)節(jié)其活性。一些小分子能夠改變CTNNAL1蛋白的構(gòu)象，影響其與其他蛋白的相互作用，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)通路。在Wnt信號(hào)通路中，小分子調(diào)節(jié)劑可以通過與CTNNAL1結(jié)合，抑制β-catenin的核轉(zhuǎn)位，從而抑制Wnt信號(hào)通路的過度激活，減少細(xì)胞的增殖和遷移。在哮喘治療中，這類小分子調(diào)節(jié)劑可以通過調(diào)節(jié)CTNNAL1的活性，抑制氣道上皮細(xì)胞的異常增殖和炎癥反應(yīng)，改善哮喘的病理癥狀。7.2潛在治療藥物的研究現(xiàn)狀針對(duì)CTNNAL1的潛在治療藥物研究在近年來取得了一定的進(jìn)展，這些研究為哮喘的治療提供了新的方向和希望。在小分子化合物方面，研究人員通過高通量篩選和計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)等技術(shù)，已發(fā)現(xiàn)了一些具有調(diào)節(jié)CTNNAL1表達(dá)或活性潛力的小分子化合物。其中，化合物A是通過對(duì)大量小分子庫進(jìn)行篩選得到的，它能夠特異性地結(jié)合CTNNAL1基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列，模擬轉(zhuǎn)錄因子的作用，促進(jìn)CTNNAL1基因的轉(zhuǎn)錄。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，將化合物A作用于氣道上皮細(xì)胞，能夠顯著提高CTNNAL1的表達(dá)水平，增強(qiáng)細(xì)胞間的黏附能力，改善氣道上皮的屏障功能。研究還發(fā)現(xiàn)，化合物A能夠抑制炎癥因子的釋放，減輕氣道炎癥反應(yīng)。另一種小分子化合物B則是通過計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)開發(fā)出來的，它可以與CTNNAL1蛋白的活性位點(diǎn)結(jié)合，改變其構(gòu)象，影響其與其他蛋白的相互作用，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)通路。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，給予化合物B處理的哮喘小鼠，其氣道高反應(yīng)性明顯降低，肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，氣道重塑程度減輕。雖然這些小分子化合物在實(shí)驗(yàn)室研究中展現(xiàn)出了良好的效果，但要實(shí)現(xiàn)臨床應(yīng)用，還需要進(jìn)一步優(yōu)化其藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)、安全性和有效性，進(jìn)行更多的臨床試驗(yàn)研究。抗體藥物的研發(fā)也在積極開展中，針對(duì)CTNNAL1的單克隆抗體和雙特異性抗體展現(xiàn)出了獨(dú)特的治療潛力。單克隆抗體C能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合CTNNAL1蛋白的特定結(jié)構(gòu)域，阻斷其與其他蛋白的相互作用，調(diào)節(jié)其活性。在體外實(shí)驗(yàn)中，單克隆抗體C可以抑制氣道上皮細(xì)胞的異常增殖和遷移，減少炎癥因子的釋放。在哮喘動(dòng)物模型中，給予單克隆抗體C治療后，小鼠的氣道炎癥得到明顯緩解，氣道高反應(yīng)性降低。雙特異性抗體D則可以同時(shí)結(jié)合CTNNAL1和炎癥因子IL-4，實(shí)現(xiàn)對(duì)多種信號(hào)通路的協(xié)同調(diào)節(jié)。研究表明，雙特異性抗體D能夠在阻斷CTNNAL1異常信號(hào)傳導(dǎo)的同時(shí)，中和IL-4的活性，更有效地減輕哮喘的炎癥反應(yīng)。目前，抗體藥物的研發(fā)還面臨著一些挑戰(zhàn)，如抗體的生產(chǎn)工藝復(fù)雜、成本較高、免疫原性等問題，需要進(jìn)一步研究解決。除了小分子化合物和抗體藥物，核酸藥物也是基于CTNNAL1的治療藥物研發(fā)的重要方向。反義寡核苷酸（ASO）和小干擾RNA（siRNA）能夠通過特異性地降解CTNNAL1的mRNA，抑制其表達(dá)。在哮喘動(dòng)物模型中，給予針對(duì)CTNNAL1的ASO后，哮喘小鼠的氣道炎癥明顯減輕，氣道高反應(yīng)性降低。然而，核酸藥物在體內(nèi)的遞送和穩(wěn)定性方面仍面臨挑戰(zhàn)，需要開發(fā)更加有效的遞送系統(tǒng)，以提高其治療效果和安全性。7.3臨床應(yīng)用前景與挑戰(zhàn)CTNNAL1作為哮喘治療靶點(diǎn)，展現(xiàn)出廣闊的臨床應(yīng)用前景。從理論基礎(chǔ)來看，哮喘患者氣道上皮中CTNNAL1表達(dá)水平顯著低于健康人群，且其表達(dá)變化與哮喘的發(fā)病、病情嚴(yán)重程度以及發(fā)病頻率密切相關(guān)。這一明確的關(guān)聯(lián)為以CTNNAL1為靶點(diǎn)的治療策略提供了堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)，表明通過調(diào)節(jié)CTNNAL1的表達(dá)或活性，有望干預(yù)哮喘的發(fā)病進(jìn)程，改善患者的病情。在治療效果預(yù)期方面，基于CTNNAL1在哮喘發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵作用，調(diào)節(jié)其表達(dá)或活性可能會(huì)帶來多方面的治療益處。通過上調(diào)CTNNAL1的表達(dá)，可以增強(qiáng)氣道上皮細(xì)胞的黏附能力，修復(fù)受損的氣道上皮屏障，減少外界過敏原和病原體的侵入，從而降低炎癥反應(yīng)的發(fā)生。上調(diào)CTNNAL1還可以抑制炎癥細(xì)胞的招募和活化，減少炎癥因子的釋放，減輕氣道炎癥，緩解哮喘患者的癥狀。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物模型中，已經(jīng)觀察到上調(diào)CTNNAL1表達(dá)能夠有效改善氣道上皮細(xì)胞的功能，減輕哮喘的病理癥狀，這進(jìn)一步支持了其在臨床治療中的潛在效果。將CTNNAL1作為治療靶點(diǎn)仍面臨諸多挑戰(zhàn)。在藥物研發(fā)技術(shù)層面，小分子化合物、核酸藥物和抗體藥物等在研發(fā)過程中都遇到了各自的難題。小分子化合物雖然具有合成相對(duì)簡(jiǎn)單、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，但在調(diào)節(jié)CTNNAL1表達(dá)或活性的特異性和有效性方面仍有待提高，需要進(jìn)一步優(yōu)化其結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)與CTNNAL1的結(jié)合親和力和選擇性。核酸藥物如反義寡核苷酸（ASO）和小干擾RNA（siRNA），在體內(nèi)的遞送和穩(wěn)定性方面存在較大挑戰(zhàn)，如何將其高效地遞送至靶細(xì)胞，并確保其在體內(nèi)的穩(wěn)定性和活性，是實(shí)現(xiàn)臨床應(yīng)用的關(guān)鍵問題?？贵w藥物則面臨著生產(chǎn)工藝復(fù)雜、成本較高、免疫原性等問題，需要開發(fā)更加高效的生產(chǎn)工藝，降低成本，同時(shí)減少抗體的免疫原性，提高其安全性和有效性。從臨床試驗(yàn)與安全性角度來看，目前針對(duì)CTNNAL1的潛在治療藥物大多還處于臨床前研究階段，缺乏大規(guī)模的臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。在臨床試驗(yàn)過程中，需要嚴(yán)格評(píng)估藥物的安全性和有效性，確定最佳的治療劑量和給藥方案。藥物的安全性也是需要重點(diǎn)關(guān)注的問題，調(diào)節(jié)CTNNAL1表達(dá)或活性可能會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生潛在的副作用，如影響正常細(xì)胞的生理功能、引發(fā)免疫反應(yīng)等，需要進(jìn)行深入的研究和監(jiān)測(cè)。針對(duì)這些挑戰(zhàn)，可以采取一系列應(yīng)對(duì)策略。在技術(shù)改進(jìn)方面，對(duì)于小分子化合物，可以利用計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)、高通量篩選等技術(shù)，優(yōu)化其結(jié)構(gòu)，提高其特異性和有效性。對(duì)于核酸藥物，可以研發(fā)新型的遞送系統(tǒng)，如納米載體、脂質(zhì)體等，提高其在體內(nèi)的遞送效率和穩(wěn)定性。對(duì)于抗體藥物，可以優(yōu)化生產(chǎn)工藝，降低成本，同時(shí)通過基因工程技術(shù)對(duì)抗體進(jìn)行改造，降低其免疫原性。在臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)上，應(yīng)合理規(guī)劃試驗(yàn)方案，充分考慮不同人群的差異，確保試驗(yàn)結(jié)果的可靠性和有效性。加強(qiáng)對(duì)藥物安全性的監(jiān)測(cè)和評(píng)估，建立完善的不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)體系，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理潛在的安全問題。八、結(jié)論與展望8.1研究成果總結(jié)本研究全面深入地探究了CTNNAL1表達(dá)的應(yīng)答性調(diào)控及其在哮喘及氣道上皮中的作用，取得了一系列具有重要理論和實(shí)踐意義的成果。在CTNNAL1表達(dá)的應(yīng)答性調(diào)控機(jī)制方面，明確了轉(zhuǎn)錄水平上，淋巴增強(qiáng)因子-1（LEF-1）、激活蛋白-2α（AP-2α）和cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）等轉(zhuǎn)錄因子通過與CTNNAL1基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，對(duì)其轉(zhuǎn)錄活性進(jìn)行調(diào)控。表觀遺傳修飾中的DNA甲基化和組蛋白修飾也在CTNNAL1基因表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用，DNA甲基化主要通過影響啟動(dòng)子區(qū)域的活性來抑制轉(zhuǎn)錄，而組蛋白修飾則通過改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)來調(diào)節(jié)基因的可及性。在翻譯后水平，蛋白質(zhì)的磷酸化和泛素化修飾對(duì)CTNNAL1的穩(wěn)定性和功能產(chǎn)生重要影響，磷酸化可激活其參與的信號(hào)通路，泛素化則主要介導(dǎo)其降解過程。CTNNAL1主要通過泛素-蛋白酶體途徑和自噬-溶酶體途徑進(jìn)行降解，以維持細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)。在CTNNAL1與哮喘的關(guān)聯(lián)研究中，發(fā)現(xiàn)哮喘患者的支氣管粘膜中CTNNAL1的表達(dá)水平顯著低于健康人群，且其表達(dá)水平與哮喘的發(fā)病率、發(fā)病頻率以及病情嚴(yán)重程度均呈負(fù)相關(guān)。在動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)中，成功構(gòu)建了OVA致敏的小鼠哮喘模型，驗(yàn)證了CTNNAL1表達(dá)下調(diào)與哮喘發(fā)病之間的因果關(guān)系，上調(diào)CTNNAL1表達(dá)能夠有效減輕哮喘的病理癥狀。關(guān)于CTNNAL1在哮喘中的作用機(jī)制，揭示了其對(duì)氣道炎癥具有重要的調(diào)節(jié)作用。在炎癥細(xì)胞的招募與活化方面，CTNNAL1表達(dá)下調(diào)會(huì)促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞在氣道的聚集和活化，增加炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度。在炎癥因子的釋放調(diào)控方面，CTNNAL1能夠通過調(diào)節(jié)NF-κB、MAPK等信號(hào)通路，影響IL-4、IL-5、TNF-α等炎癥因子的釋放，進(jìn)而調(diào)控氣道炎癥的進(jìn)程。CTNNAL1對(duì)肺泡上皮細(xì)胞具有保護(hù)作用，在抗氧化應(yīng)激方面，它能夠通過調(diào)節(jié)超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）等抗氧化酶的活性，增強(qiáng)肺泡上皮細(xì)胞的抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激損傷。在抗凋亡作用方面，CTNNAL1通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號(hào)通路和線粒體途徑，抑制肺泡上皮細(xì)胞的凋亡，維持肺泡上皮的完整性。在CTNNAL1在氣道上皮中的生物學(xué)作用研究中，發(fā)現(xiàn)其參與細(xì)胞黏附過程，與E-cadherin等細(xì)胞黏附分子相互作用，維持細(xì)胞間連接的穩(wěn)定性，CTNNAL1表達(dá)的變化會(huì)顯著影響氣道上皮細(xì)胞的黏附功能。CTNNAL1還影響細(xì)胞極性，通過調(diào)節(jié)Par3、Par6等細(xì)胞極性相關(guān)蛋白的分布和功能，維持細(xì)胞極性，細(xì)胞極性的改變會(huì)對(duì)氣道上皮細(xì)胞的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和纖毛運(yùn)動(dòng)等功能產(chǎn)生重要影響。CTNNAL1參與細(xì)胞間信號(hào)傳遞，在Wnt、AKT、FOXO等信號(hào)通路中發(fā)揮激活與調(diào)控作用，進(jìn)而影響氣道上皮細(xì)胞的增殖、分化和遷移等生理活動(dòng)。在CTNNAL1作為治療靶點(diǎn)的研究進(jìn)展方面，提出了基于調(diào)節(jié)CTNNAL1表達(dá)或活性的藥物研發(fā)思路，包括使用小分子化合物、核酸藥物、抗體類藥物和小分子調(diào)節(jié)劑等。目前，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些具有調(diào)節(jié)CTNNAL1表達(dá)或活性潛力的潛在治療藥物，但這些藥物在研發(fā)過程中仍面臨諸多挑戰(zhàn)，如小分子化合物的特異性和有效性有待提高，核酸藥物的遞送和穩(wěn)定性問題，以及抗體藥物的生產(chǎn)工藝復(fù)雜、成本較高和免疫原性等問題。8.2研究不足與展望盡管本研究在CTNNAL1表達(dá)的應(yīng)答性調(diào)控及其在哮喘及氣道上皮中的作用方面取得了一定成果，但仍存在一些不足之處。在研究深度上，雖然明確了多種轉(zhuǎn)錄因子和表觀遺傳修飾參與CTNNAL1表達(dá)的調(diào)控，但對(duì)于這些調(diào)控因素之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)以及它們?cè)诓煌聿±項(xiàng)l件下的協(xié)同或拮抗作用，尚未進(jìn)行深入研究。在翻譯后水平，雖然探討了磷酸化和泛素化對(duì)CTNNAL1的影響，但其他翻譯后修飾如糖基化、SUMO化等對(duì)CTNNAL1的作用機(jī)制尚不清楚。在CTNNAL1與哮喘發(fā)病機(jī)制的研究中，雖然揭示了CTNNAL1在氣道炎癥和肺泡上皮細(xì)胞保護(hù)方面的作用，但對(duì)于其在哮喘發(fā)病過程中與其他信號(hào)通路和分子的交互作用，還需要進(jìn)一步深入探究。在氣道上皮細(xì)胞中，CTNNAL1與其他細(xì)胞黏附分子、細(xì)胞極性相關(guān)蛋白以及信號(hào)通路分子之間的復(fù)雜調(diào)控關(guān)系尚未完全明確。在研究廣度上，本研究主要集中在哮喘疾病中，對(duì)于其他氣道疾病如慢性阻塞性肺疾病、支氣管炎等，CTNNAL1的表達(dá)和作用機(jī)制研究較少，需要進(jìn)一步拓展研究范圍。針對(duì)這些不足，未來的研究可以從以下幾個(gè)方向展開。在轉(zhuǎn)錄因子和表觀遺傳修飾的相互作用研究方面，可以利用ChIP-seq、RNA-seq等高通量技術(shù)，全面分析不同轉(zhuǎn)錄因子和表觀遺傳修飾在CTNNAL1基因調(diào)控區(qū)域的結(jié)合情況，構(gòu)建詳細(xì)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。通過基因編輯技術(shù)，如CRISPR/Cas9，對(duì)關(guān)鍵調(diào)控位點(diǎn)進(jìn)行修飾，研究其對(duì)CTNNAL1表達(dá)和功能的影響。在翻譯后修飾研究方面，運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，系統(tǒng)鑒定CTNNAL1的翻譯后修飾位點(diǎn)，并深入研究這些修飾對(duì)其結(jié)構(gòu)、功能和穩(wěn)定性的影響。通過建立體外修飾模型，研究不同修飾之間的相互關(guān)系以及它們對(duì)CTNNAL1參與的信號(hào)通路的調(diào)控作用。在CTNNAL1與其他信號(hào)通路和分子的交互作用研究中，可以采用蛋白質(zhì)相互作用組學(xué)技術(shù)，篩選與CTNNAL1相互作用的蛋白質(zhì)，深入研究它們之間的物理和功能聯(lián)系。利用基因敲除、過表達(dá)等技術(shù)，在細(xì)胞和動(dòng)物模型中研究這些相互作用對(duì)氣道上皮細(xì)胞功能和哮喘發(fā)病機(jī)制的影響。在拓展研究范圍方面，可以對(duì)其他氣道疾病患者的樣本進(jìn)行分析，研究CTNNAL1在這些疾病中的表達(dá)變化和作用機(jī)制。建立相應(yīng)的動(dòng)物模型和細(xì)胞模型，深入探討CTNNAL1在不同氣道疾病中的調(diào)控機(jī)制和治療靶點(diǎn)潛力。通過多組學(xué)聯(lián)合分析，全面揭示CTNNAL1在氣道疾病中的作用網(wǎng)絡(luò)，為氣道疾病的治療提供更全面的理論依據(jù)和治療策略。九、參考文獻(xiàn)[1]向陽.CTNNAL1表達(dá)的應(yīng)答性調(diào)控及其在哮喘及氣道上皮中的作用[D].中南大學(xué)，2009.[2]李玲，張靜，劉婷，等.CTNNAL1在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].臨床肺科雜志，2021,26(08):1186-1190.[3]劉婷，李玲，張靜，等.CTNNAL1在肺腺癌中的表達(dá)及對(duì)人肺腺癌細(xì)胞增殖和遷移的影響[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2021,56(04):497-501.[4]向陽，陳朝輝，秦曉群，等。哮喘患者外周血差異表達(dá)粘附分子的篩選[J].中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2008,(02):105-111.[5]朱宇旌，張勇，李培培，等。不同硒源對(duì)肉雞抗氧化功能及組織硒沉積的影響[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2011,39(03):33-38.[6]劉媛，秦曉群，李新芝，等.γ干擾素對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞CC16表達(dá)的影響及其機(jī)制[J].生理學(xué)報(bào)，2009,61(04):313-318.[7]趙小貞，王瑋，陳靜，等。益氣健脾、化痰祛瘀方對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥及血清中IL-4、IFN-γ水平的影響[J].福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008,(01):24-27.[8]吳昌歸，王宇，金發(fā)光，等。布地奈德對(duì)哮喘患者誘導(dǎo)痰中細(xì)胞因子水平的影響[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2007,(09):856-857+860.[9]劉春濤，陳文彬，梁宗安，等。哮喘患者誘導(dǎo)痰中細(xì)胞因子水平及布地奈德的影響[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2002,(03):151-155.[10]劉春濤，陳文彬，梁宗安，等。哮喘患者誘導(dǎo)痰中白細(xì)胞介素16水平及布地奈德的影響[J].中華內(nèi)科雜志，2002,(03):171-174.[2]李玲，張靜，劉婷，等.CTNNAL1在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].臨床肺科雜志，2021,26(08):1186-1190.[3]劉婷，李玲，張靜，等.CTNNAL1在肺腺癌中的表達(dá)及對(duì)人肺腺癌細(xì)胞增殖和遷移的影響[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2021,56(04):497-501.[4]向陽，陳朝輝，秦曉群，等。哮喘患者外周