Axin和β-連環(huán)素表達(dá)：解鎖大腸癌發(fā)生與預(yù)后密碼一、引言1.1研究背景大腸癌，作為全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病之一，其發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)出令人擔(dān)憂的上升趨勢(shì)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的數(shù)據(jù)，2020年大腸癌已躍居全球第三大常見新發(fā)癌癥，在癌癥死亡原因中也高居第二。在我國(guó)，大腸癌的形勢(shì)同樣嚴(yán)峻，新發(fā)病例從2015年的38.8萬(wàn)例急劇增加至2020年的55.5萬(wàn)例，年均增長(zhǎng)速度達(dá)到7.4%。2022年，我國(guó)大腸癌發(fā)病數(shù)和死亡數(shù)在全球占比分別高達(dá)28.73%和30.59%。大腸癌不僅嚴(yán)重威脅患者的生命安全，還給患者家庭和社會(huì)帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)與精神壓力。因此，深入探究大腸癌的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的診斷、治療及預(yù)后評(píng)估指標(biāo)，已成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。在細(xì)胞的生理過(guò)程中，Axin和β-連環(huán)素扮演著極為重要的角色。Axin是一種多功能的支架蛋白，可參與多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，尤其是在Wnt/β-連環(huán)素信號(hào)通路中發(fā)揮著核心調(diào)控作用。它包含多個(gè)蛋白結(jié)合位點(diǎn)，能夠與結(jié)腸腺瘤性息肉?。ˋPC）、β-連環(huán)素、糖原合成酶激酶3β（GSK3β）等多種關(guān)鍵蛋白相互作用，形成復(fù)合物，進(jìn)而精細(xì)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳遞。在正常生理狀態(tài)下，Axin通過(guò)促進(jìn)β-連環(huán)素的磷酸化和降解，維持細(xì)胞內(nèi)β-連環(huán)素的低水平穩(wěn)態(tài)，確保細(xì)胞的正常增殖、分化和凋亡等生理過(guò)程。一旦Axin的功能出現(xiàn)異常，Wnt/β-連環(huán)素信號(hào)通路就會(huì)失調(diào)，可能引發(fā)細(xì)胞的異常增殖和腫瘤的發(fā)生發(fā)展。β-連環(huán)素則是一種兼具細(xì)胞黏附和信號(hào)傳導(dǎo)雙重功能的關(guān)鍵蛋白。在細(xì)胞黏附方面，它與E-鈣黏蛋白結(jié)合形成復(fù)合物，參與細(xì)胞間的黏附連接，對(duì)維持組織結(jié)構(gòu)的完整性和細(xì)胞極性至關(guān)重要。在信號(hào)傳導(dǎo)領(lǐng)域，β-連環(huán)素是Wnt信號(hào)通路的核心效應(yīng)分子。當(dāng)Wnt信號(hào)激活時(shí)，β-連環(huán)素在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)大量聚集，隨后進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，啟動(dòng)一系列下游靶基因的轉(zhuǎn)錄，如c-myc、CyclinD1等，這些靶基因參與細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。若β-連環(huán)素的表達(dá)或調(diào)控出現(xiàn)異常，將導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控、凋亡受阻，最終促使腫瘤的形成與發(fā)展。大量研究已證實(shí)，Axin和β-連環(huán)素的異常表達(dá)與大腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在大腸癌組織中，常常觀察到Axin表達(dá)水平的降低或功能缺失，這會(huì)導(dǎo)致其對(duì)β-連環(huán)素的負(fù)性調(diào)控作用減弱，使得β-連環(huán)素在細(xì)胞內(nèi)異常積累，持續(xù)激活Wnt信號(hào)通路，引發(fā)細(xì)胞的過(guò)度增殖、分化異常以及轉(zhuǎn)移潛能增強(qiáng)。同時(shí)，β-連環(huán)素自身的基因突變或表達(dá)失調(diào)也會(huì)導(dǎo)致其在細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的定位及功能異常，進(jìn)一步推動(dòng)大腸癌的進(jìn)展。深入研究Axin和β-連環(huán)素在大腸癌中的表達(dá)變化、相互作用機(jī)制以及與臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系，對(duì)于揭示大腸癌的發(fā)病機(jī)制、開發(fā)新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)具有重要的理論和實(shí)踐意義。1.2研究目的本研究旨在深入剖析Axin和β-連環(huán)素在大腸癌組織中的表達(dá)情況，明確其與大腸癌發(fā)生、發(fā)展的內(nèi)在聯(lián)系，以及對(duì)患者預(yù)后的影響。通過(guò)免疫組織化學(xué)分析法，精準(zhǔn)檢測(cè)大腸癌組織和正常對(duì)照組織中Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)水平，并細(xì)致分析它們與大腸癌各項(xiàng)臨床病理參數(shù)，如患者年齡、性別、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、TNM分期等之間的關(guān)聯(lián)。運(yùn)用Survival分析方法，全面探究Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)與大腸癌患者生存率及預(yù)后之間的關(guān)系，為揭示大腸癌的發(fā)病機(jī)制提供新的理論依據(jù)，為臨床早期診斷、個(gè)性化治療及預(yù)后評(píng)估提供可靠的分子標(biāo)志物和潛在的治療靶點(diǎn)，進(jìn)而提升大腸癌患者的治療效果和生存質(zhì)量，減輕家庭與社會(huì)的疾病負(fù)擔(dān)。1.3研究意義1.3.1理論意義本研究深入剖析Axin和β-連環(huán)素在大腸癌中的表達(dá)情況及其相互作用機(jī)制，對(duì)于揭示大腸癌的發(fā)病機(jī)制具有重要的理論意義。通過(guò)探究Axin和β-連環(huán)素在大腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的異常變化，能夠進(jìn)一步明確Wnt/β-連環(huán)素信號(hào)通路在其中的關(guān)鍵作用，有助于填補(bǔ)該領(lǐng)域在分子機(jī)制研究方面的部分空白，豐富腫瘤學(xué)中關(guān)于大腸癌發(fā)病機(jī)制的理論體系。這不僅能夠深化我們對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、分化、凋亡等生物學(xué)過(guò)程異常調(diào)控的認(rèn)識(shí)，還能為后續(xù)研究其他腫瘤相關(guān)信號(hào)通路以及腫瘤的多因素發(fā)病機(jī)制提供重要的參考和借鑒，推動(dòng)腫瘤學(xué)理論的不斷發(fā)展與完善。1.3.2實(shí)踐意義從臨床實(shí)踐角度來(lái)看，本研究成果具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。準(zhǔn)確檢測(cè)Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)水平，有望為大腸癌的早期診斷提供新的可靠分子標(biāo)志物。在疾病早期，當(dāng)臨床癥狀尚不明顯時(shí)，通過(guò)檢測(cè)這些標(biāo)志物的異常表達(dá)，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)大腸癌的早期篩查和診斷，提高早期診斷率，為患者爭(zhēng)取寶貴的治療時(shí)機(jī)?；趯?duì)Axin和β-連環(huán)素作用機(jī)制的深入了解，可為開發(fā)針對(duì)Wnt/β-連環(huán)素信號(hào)通路的新型靶向治療藥物提供有力的理論依據(jù)，從而推動(dòng)大腸癌治療策略的創(chuàng)新與優(yōu)化，提高治療效果，減少不良反應(yīng)，改善患者的生活質(zhì)量。研究Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)與大腸癌患者預(yù)后的關(guān)系，能夠?yàn)榕R床醫(yī)生評(píng)估患者的預(yù)后情況提供客觀、精準(zhǔn)的指標(biāo)，有助于制定個(gè)性化的治療方案和隨訪計(jì)劃，合理分配醫(yī)療資源，對(duì)提高大腸癌患者的生存率和生存質(zhì)量具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1大腸癌概述2.1.1定義與分類大腸癌，醫(yī)學(xué)上全稱為結(jié)直腸癌，是指發(fā)生于結(jié)腸和直腸的惡性腫瘤，是消化道常見的惡性腫瘤之一。其發(fā)病部位涵蓋了從回盲瓣至肛門的整個(gè)大腸段，其中以直腸最為常見，約占大腸癌病例的50%，其次是乙狀結(jié)腸、盲腸、升結(jié)腸、降結(jié)腸和橫結(jié)腸。從病理組織學(xué)角度來(lái)看，大腸癌主要分為以下幾種類型：腺癌：這是大腸癌中最為常見的類型，約占90%以上。根據(jù)其腺管結(jié)構(gòu)的分化程度，又可進(jìn)一步細(xì)分為高分化腺癌、中分化腺癌和低分化腺癌。高分化腺癌的腺管結(jié)構(gòu)較為完整，癌細(xì)胞異型性較??；中分化腺癌的腺管結(jié)構(gòu)部分存在，癌細(xì)胞異型性適中；低分化腺癌的腺管結(jié)構(gòu)不明顯，癌細(xì)胞異型性較大，惡性程度相對(duì)較高。此外，腺癌中還包括一些特殊亞型，如乳頭狀腺癌，其癌細(xì)胞呈乳頭狀生長(zhǎng)，具有較高的侵襲性；黏液腺癌，癌細(xì)胞分泌大量黏液，形成黏液池，預(yù)后相對(duì)較差；印戒細(xì)胞癌，癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)充滿黏液，將細(xì)胞核擠向一側(cè)，形似印戒，惡性程度高，易早期轉(zhuǎn)移，預(yù)后極差。腺鱗癌：這種類型較為少見，約占大腸癌的0.6%-2.5%。其腫瘤組織中同時(shí)含有腺癌和鱗癌兩種成分，具有兩種癌組織的生物學(xué)特性，侵襲性較強(qiáng)，預(yù)后相對(duì)不良。鱗狀細(xì)胞癌：在大腸癌中所占比例小于1%，多發(fā)生于直腸下段。腫瘤細(xì)胞呈典型的鱗狀上皮細(xì)胞形態(tài)，可出現(xiàn)角化珠或細(xì)胞間橋，與其他類型大腸癌相比，鱗狀細(xì)胞癌對(duì)放療相對(duì)敏感，但總體預(yù)后不佳。未分化癌：此類型癌細(xì)胞彌漫成片或呈團(tuán)狀，不形成腺管狀結(jié)構(gòu)，細(xì)胞排列無(wú)規(guī)律，癌細(xì)胞較小，核分裂象多見。未分化癌的惡性程度極高，生長(zhǎng)迅速，早期即可發(fā)生廣泛轉(zhuǎn)移，預(yù)后最差。其他罕見類型：如小細(xì)胞癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌等，這些類型在臨床上更為罕見，每種類型都具有獨(dú)特的病理特征和生物學(xué)行為。小細(xì)胞癌具有神經(jīng)內(nèi)分泌分化特征，惡性程度高，易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；神經(jīng)內(nèi)分泌癌則根據(jù)其分化程度和激素分泌情況，表現(xiàn)出不同的臨床特點(diǎn)和預(yù)后。不同類型的大腸癌在臨床表現(xiàn)、治療方法和預(yù)后等方面存在顯著差異。因此，準(zhǔn)確的病理分類對(duì)于指導(dǎo)臨床治療和判斷預(yù)后具有至關(guān)重要的意義。臨床醫(yī)生通常會(huì)結(jié)合患者的癥狀、體征、影像學(xué)檢查以及病理活檢結(jié)果，綜合評(píng)估病情，制定個(gè)性化的治療方案。2.1.2發(fā)病機(jī)制研究現(xiàn)狀盡管經(jīng)過(guò)多年的深入研究，大腸癌的發(fā)病機(jī)制仍未被完全闡明，但目前普遍認(rèn)為其是一個(gè)多因素、多步驟、多基因參與的復(fù)雜過(guò)程。遺傳因素、環(huán)境因素、生活方式以及腸道微生物群等多種因素相互作用，共同促進(jìn)了大腸癌的發(fā)生發(fā)展。遺傳因素：大約5%-10%的大腸癌病例具有明確的遺傳傾向。家族性腺瘤性息肉?。‵AP）是一種常染色體顯性遺傳性疾病，由APC基因突變引起?；颊叩拇竽c內(nèi)會(huì)出現(xiàn)大量腺瘤性息肉，若不及時(shí)治療，幾乎100%會(huì)發(fā)展為大腸癌。遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌（HNPCC），也稱為林奇綜合征，是由于DNA錯(cuò)配修復(fù)基因（如MLH1、MSH2、MSH6等）突變導(dǎo)致。這類患者患大腸癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，且發(fā)病年齡相對(duì)較早，同時(shí)還易患其他器官的惡性腫瘤。此外，一些常見的遺傳變異，如APC、KRAS、BRAF等基因的單核苷酸多態(tài)性（SNP），也與大腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。這些遺傳變異可能通過(guò)影響基因的表達(dá)、蛋白質(zhì)的功能或信號(hào)通路的活性，增加個(gè)體對(duì)大腸癌的易感性。環(huán)境與生活方式因素：飲食結(jié)構(gòu)在大腸癌的發(fā)病中起著關(guān)鍵作用。長(zhǎng)期高動(dòng)物脂肪、高蛋白質(zhì)、低膳食纖維的飲食習(xí)慣，會(huì)導(dǎo)致腸道內(nèi)膽汁酸和膽固醇的代謝產(chǎn)物增多，這些物質(zhì)可能刺激腸道黏膜，引發(fā)細(xì)胞損傷和基因突變。大量攝入紅肉和加工肉類，與大腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)。紅肉在烹飪過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生雜環(huán)胺和多環(huán)芳烴等致癌物質(zhì)，加工肉類中則含有亞硝酸鹽等添加劑，這些都可能增加患癌風(fēng)險(xiǎn)。相反，富含膳食纖維的食物，如蔬菜、水果、全谷類等，能夠促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，減少有害物質(zhì)在腸道內(nèi)的停留時(shí)間，降低大腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。吸煙、酗酒、缺乏運(yùn)動(dòng)、肥胖等不良生活方式也是大腸癌的重要危險(xiǎn)因素。吸煙會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)有害物質(zhì)的積累，損傷腸道細(xì)胞的DNA；過(guò)量飲酒會(huì)影響肝臟的解毒功能，增加腸道對(duì)致癌物質(zhì)的敏感性；缺乏運(yùn)動(dòng)和肥胖會(huì)導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂，激素水平失衡，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展。腸道微生物群：近年來(lái)，腸道微生物群在大腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用受到越來(lái)越多的關(guān)注。正常的腸道微生物群對(duì)維持腸道的生理功能和免疫平衡至關(guān)重要。然而，當(dāng)腸道微生物群的組成和功能發(fā)生失調(diào)時(shí)，即所謂的“菌群失調(diào)”，可能會(huì)引發(fā)一系列病理變化。一些有害菌，如具核梭桿菌、脆弱擬桿菌等，能夠產(chǎn)生毒素或代謝產(chǎn)物，損傷腸道黏膜上皮細(xì)胞，促進(jìn)炎癥反應(yīng)和腫瘤的發(fā)生。具核梭桿菌可以通過(guò)與腫瘤細(xì)胞表面的受體結(jié)合，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。腸道微生物群還可以通過(guò)影響宿主的免疫反應(yīng)、代謝途徑和信號(hào)傳導(dǎo)通路，間接參與大腸癌的發(fā)生發(fā)展。在眾多與大腸癌發(fā)病相關(guān)的信號(hào)通路中，Wnt/β-連環(huán)素信號(hào)通路占據(jù)著核心地位。正常情況下，在沒(méi)有Wnt信號(hào)刺激時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的Axin、APC、GSK3β和CK1等蛋白形成復(fù)合物。GSK3β在CK1的協(xié)同作用下，使β-連環(huán)素的N端特定氨基酸位點(diǎn)（Ser33、Ser37、Thr41）磷酸化。磷酸化后的β-連環(huán)素被β-TrCP識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑降解，維持細(xì)胞內(nèi)β-連環(huán)素的低水平穩(wěn)態(tài)。此時(shí)，Wnt信號(hào)通路處于抑制狀態(tài)，細(xì)胞正常進(jìn)行增殖、分化和凋亡等生理過(guò)程。當(dāng)Wnt信號(hào)激活時(shí)，Wnt配體（如Wnt3a）與細(xì)胞膜上的Frizzled受體和LRP5/6共受體結(jié)合，形成復(fù)合物。這一復(fù)合物的形成招募了Dishevelled（Dvl）蛋白，Dvl蛋白被激活后，通過(guò)抑制GSK3β的活性，破壞了β-連環(huán)素降解復(fù)合物的功能。β-連環(huán)素不再被磷酸化和降解，從而在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)大量積累。隨后，β-連環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，形成轉(zhuǎn)錄激活復(fù)合物。該復(fù)合物招募BCL9、Pygo等共激活因子，啟動(dòng)一系列下游靶基因，如c-myc、CyclinD1、MMP-7等的轉(zhuǎn)錄。這些靶基因參與細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、侵襲和血管生成等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程，異常激活的Wnt/β-連環(huán)素信號(hào)通路會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控、分化異常，最終促使腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。Axin作為Wnt/β-連環(huán)素信號(hào)通路中的關(guān)鍵負(fù)調(diào)控因子，其表達(dá)水平和功能狀態(tài)對(duì)信號(hào)通路的活性起著決定性作用。在大腸癌組織中，常常出現(xiàn)Axin基因的突變、缺失或表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致Axin蛋白的功能異常。這使得Axin無(wú)法有效地參與β-連環(huán)素降解復(fù)合物的形成，或減弱了對(duì)β-連環(huán)素的降解作用，進(jìn)而導(dǎo)致β-連環(huán)素在細(xì)胞內(nèi)的異常積累，持續(xù)激活Wnt信號(hào)通路，推動(dòng)大腸癌的發(fā)生發(fā)展。研究表明，Axin1基因的雜合性缺失（LOH）在大腸癌中較為常見，約有30%-50%的大腸癌患者存在Axin1基因的LOH。Axin2的表達(dá)水平也與大腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，高表達(dá)的Axin2可能通過(guò)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制，部分抑制Wnt信號(hào)通路的過(guò)度激活，但在某些情況下，Axin2的異常表達(dá)也可能促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。β-連環(huán)素自身的基因突變同樣會(huì)導(dǎo)致其在細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的定位及功能異常。在大腸癌中，常見的β-連環(huán)素基因突變位點(diǎn)包括Ser45、Thr41、Ser37和Ser33等，這些突變會(huì)阻礙β-連環(huán)素的磷酸化和降解，使其在細(xì)胞內(nèi)持續(xù)積累并激活下游靶基因。β-連環(huán)素的異常表達(dá)還會(huì)影響細(xì)胞間的黏附連接，導(dǎo)致細(xì)胞極性喪失、遷移和侵襲能力增強(qiáng)，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。約有10%-30%的散發(fā)性大腸癌患者存在β-連環(huán)素基因的激活突變，這些突變與大腸癌的惡性程度和不良預(yù)后密切相關(guān)。除了Wnt/β-連環(huán)素信號(hào)通路外，其他信號(hào)通路，如PI3K/Akt、MAPK、TGF-β等，也與大腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。這些信號(hào)通路之間相互交織、相互作用，形成復(fù)雜的信號(hào)網(wǎng)絡(luò)。PI3K/Akt信號(hào)通路可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝、增殖、存活和遷移等過(guò)程，參與大腸癌的發(fā)生發(fā)展。在大腸癌中，PI3K的激活或Akt的過(guò)度表達(dá)常常導(dǎo)致細(xì)胞的增殖失控和凋亡抵抗。MAPK信號(hào)通路則在細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、應(yīng)激反應(yīng)和腫瘤轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮重要作用。TGF-β信號(hào)通路在大腸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有雙重作用，在腫瘤發(fā)生的早期階段，TGF-β可以抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，發(fā)揮抑癌作用；而在腫瘤進(jìn)展期，TGF-β則可能通過(guò)促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）、血管生成和免疫逃逸等機(jī)制，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移和惡化。深入研究大腸癌的發(fā)病機(jī)制，特別是Axin和β-連環(huán)素在Wnt信號(hào)通路中的作用機(jī)制，以及各信號(hào)通路之間的相互關(guān)系，對(duì)于揭示大腸癌的發(fā)病本質(zhì)、尋找有效的治療靶點(diǎn)具有重要意義。未來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入，有望為大腸癌的早期診斷、精準(zhǔn)治療和預(yù)后評(píng)估提供更多的理論依據(jù)和新的策略。2.2Axin和β-連環(huán)素的生物學(xué)特性2.2.1Axin的結(jié)構(gòu)與功能Axin，全稱為axisinhibitionprotein，是一種在進(jìn)化上高度保守的多功能支架蛋白，在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，尤其是在Wnt/β-連環(huán)素信號(hào)通路中占據(jù)核心地位。從分子結(jié)構(gòu)上看，Axin是一種相對(duì)較大的蛋白質(zhì)，其分子量約為100-120kDa。它包含多個(gè)重要的結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域賦予了Axin獨(dú)特的功能和相互作用特性。Axin含有一個(gè)RGS（RegulatorofG-proteinSignaling）結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域最初發(fā)現(xiàn)于調(diào)節(jié)G蛋白信號(hào)傳導(dǎo)的蛋白中，在Axin中，RGS結(jié)構(gòu)域可能參與調(diào)節(jié)G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）相關(guān)的信號(hào)通路，雖然其具體作用機(jī)制尚未完全明確，但研究表明它可能通過(guò)與G蛋白的特定亞基相互作用，影響G蛋白的活性和信號(hào)傳遞。DIX（Dishevelled/Axin）結(jié)構(gòu)域也是Axin的重要組成部分。DIX結(jié)構(gòu)域是一個(gè)約60個(gè)氨基酸殘基組成的保守區(qū)域，它介導(dǎo)了Axin與其他含有DIX結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)之間的相互作用，如Dishevelled（Dvl）蛋白。這種相互作用在Wnt信號(hào)通路的激活過(guò)程中至關(guān)重要，Dvl蛋白被Wnt配體激活后，通過(guò)DIX-DIX相互作用招募Axin，從而啟動(dòng)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)事件。Axin還具有多個(gè)蛋白結(jié)合位點(diǎn)，能夠與多種關(guān)鍵蛋白相互作用，形成復(fù)合物。其中，與結(jié)腸腺瘤性息肉?。ˋPC）蛋白的結(jié)合是Axin發(fā)揮功能的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。APC是一種腫瘤抑制蛋白，在Wnt信號(hào)通路中，APC與Axin緊密結(jié)合，共同促進(jìn)β-連環(huán)素的降解。Axin通過(guò)其N端區(qū)域與APC的多個(gè)位點(diǎn)相互作用，形成穩(wěn)定的復(fù)合物結(jié)構(gòu)。這種復(fù)合物能夠精確識(shí)別β-連環(huán)素，并將其招募到降解復(fù)合物中，為后續(xù)的磷酸化和降解過(guò)程奠定基礎(chǔ)。糖原合成酶激酶3β（GSK3β）也是Axin相互作用網(wǎng)絡(luò)中的重要成員。Axin通過(guò)特定的結(jié)構(gòu)域與GSK3β結(jié)合，調(diào)節(jié)其活性。在沒(méi)有Wnt信號(hào)刺激時(shí)，Axin-APC-GSK3β復(fù)合物能夠使β-連環(huán)素的N端特定氨基酸位點(diǎn)（Ser33、Ser37、Thr41）磷酸化。磷酸化后的β-連環(huán)素被β-TrCP（一種E3泛素連接酶的底物識(shí)別亞基）識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑降解，維持細(xì)胞內(nèi)β-連環(huán)素的低水平穩(wěn)態(tài)，確保細(xì)胞的正常增殖、分化和凋亡等生理過(guò)程。在細(xì)胞內(nèi)，Axin還可以與其他一些蛋白質(zhì)相互作用，如酪蛋白激酶1（CK1）。CK1能夠在Axin的參與下，協(xié)同GSK3β對(duì)β-連環(huán)素進(jìn)行磷酸化修飾，增強(qiáng)對(duì)β-連環(huán)素的降解作用。Axin還可能與其他信號(hào)通路的關(guān)鍵分子相互作用，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路中的某些成員，通過(guò)這種交叉對(duì)話，Axin不僅參與調(diào)控Wnt/β-連環(huán)素信號(hào)通路，還能夠影響其他信號(hào)通路的活性，從而在細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化和凋亡等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮廣泛的調(diào)節(jié)作用。除了在Wnt/β-連環(huán)素信號(hào)通路中的負(fù)調(diào)控作用外，Axin還被發(fā)現(xiàn)參與其他細(xì)胞過(guò)程。研究表明，Axin可能在細(xì)胞骨架的調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用，它可以與一些細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白相互作用，影響細(xì)胞的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)能力。在細(xì)胞凋亡過(guò)程中，Axin也可能扮演一定的角色，雖然其具體機(jī)制尚不完全清楚，但有研究發(fā)現(xiàn)，Axin的某些突變或表達(dá)異?？赡軙?huì)影響細(xì)胞凋亡的進(jìn)程，提示Axin可能通過(guò)與凋亡相關(guān)蛋白的相互作用，參與調(diào)控細(xì)胞的生死平衡。Axin作為一種多功能的支架蛋白，通過(guò)其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)域和多個(gè)蛋白結(jié)合位點(diǎn)，在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)控作用，尤其是在維持Wnt/β-連環(huán)素信號(hào)通路的穩(wěn)態(tài)方面具有不可或缺的地位。對(duì)Axin結(jié)構(gòu)與功能的深入研究，不僅有助于我們揭示細(xì)胞正常生理過(guò)程的調(diào)控機(jī)制，還為理解腫瘤等疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制提供了重要的理論基礎(chǔ)。2.2.2β-連環(huán)素的結(jié)構(gòu)與功能β-連環(huán)素，英文名為β-catenin，是一種在細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程中具有重要雙重功能的關(guān)鍵蛋白，既參與細(xì)胞間的黏附連接，維持組織結(jié)構(gòu)的完整性和細(xì)胞極性，又在Wnt信號(hào)通路中作為核心效應(yīng)分子，調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、遷移和凋亡等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。從分子結(jié)構(gòu)上看，β-連環(huán)素由CTNNB1基因編碼，其蛋白結(jié)構(gòu)包含多個(gè)功能區(qū)域。β-連環(huán)素的N端結(jié)構(gòu)域（1-140aa）含有多個(gè)重要的磷酸化位點(diǎn)，如Ser33、Ser37和Thr41等。在正常生理狀態(tài)下，這些位點(diǎn)在Axin、APC、GSK3β和CK1等蛋白形成的復(fù)合物作用下發(fā)生磷酸化。磷酸化后的β-連環(huán)素被β-TrCP識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑降解，這是維持細(xì)胞內(nèi)β-連環(huán)素低水平穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵機(jī)制。當(dāng)Wnt信號(hào)激活時(shí)，這些磷酸化位點(diǎn)的磷酸化過(guò)程被抑制，β-連環(huán)素得以穩(wěn)定積累，從而啟動(dòng)下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)事件。β-連環(huán)素的中間區(qū)域是由12個(gè)Armadillo重復(fù)序列（141-664aa）組成，這是其核心結(jié)構(gòu)域。Armadillo重復(fù)序列形成了一種獨(dú)特的螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)賦予了β-連環(huán)素強(qiáng)大的蛋白相互作用能力。在細(xì)胞黏附方面，β-連環(huán)素通過(guò)其Armadillo重復(fù)序列與E-鈣黏蛋白的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域結(jié)合，形成E-鈣黏蛋白/β-連環(huán)素復(fù)合物。該復(fù)合物進(jìn)一步與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架相連，構(gòu)成細(xì)胞間的黏附連接，對(duì)維持上皮細(xì)胞的極性和組織結(jié)構(gòu)的完整性至關(guān)重要。在信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中，β-連環(huán)素的Armadillo重復(fù)序列與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF的特定結(jié)構(gòu)域相互作用，形成轉(zhuǎn)錄激活復(fù)合物，啟動(dòng)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄。β-連環(huán)素的C端結(jié)構(gòu)域（665-781aa）包含一個(gè)轉(zhuǎn)錄激活域。當(dāng)β-連環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞核后，其C端轉(zhuǎn)錄激活域招募BCL9、Pygo等共激活因子，增強(qiáng)與TCF/LEF轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合能力，從而促進(jìn)下游靶基因，如c-myc、CyclinD1、MMP-7等的轉(zhuǎn)錄。這些靶基因參與細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。c-myc基因的激活可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖和代謝；CyclinD1的表達(dá)上調(diào)能夠推動(dòng)細(xì)胞周期的進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞增殖；MMP-7的表達(dá)增加則會(huì)增強(qiáng)細(xì)胞的侵襲能力，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。在細(xì)胞黏附功能方面，β-連環(huán)素與E-鈣黏蛋白形成的復(fù)合物是細(xì)胞間黏附連接的重要組成部分。這種黏附連接不僅能夠維持細(xì)胞間的緊密聯(lián)系，還能夠傳遞細(xì)胞間的信號(hào)，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化。當(dāng)β-連環(huán)素的功能或表達(dá)出現(xiàn)異常時(shí)，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞間黏附連接的破壞，細(xì)胞極性喪失，細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng)，這在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用。在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞常常通過(guò)下調(diào)E-鈣黏蛋白的表達(dá)或破壞β-連環(huán)素與E-鈣黏蛋白的相互作用，使細(xì)胞間黏附力下降，從而獲得遷移和侵襲的能力。在Wnt信號(hào)通路中，β-連環(huán)素是信號(hào)傳導(dǎo)的核心分子。當(dāng)Wnt信號(hào)未激活時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的β-連環(huán)素處于低水平穩(wěn)態(tài)，主要通過(guò)與E-鈣黏蛋白結(jié)合參與細(xì)胞黏附。當(dāng)Wnt配體（如Wnt3a）與細(xì)胞膜上的Frizzled受體和LRP5/6共受體結(jié)合后，激活下游的Dishevelled（Dvl）蛋白。Dvl蛋白通過(guò)抑制GSK3β的活性，破壞了β-連環(huán)素降解復(fù)合物的功能。β-連環(huán)素不再被磷酸化和降解，從而在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)大量積累。隨后，β-連環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，啟動(dòng)一系列下游靶基因的轉(zhuǎn)錄，實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞增殖、分化、遷移和凋亡等生物學(xué)過(guò)程的調(diào)控。β-連環(huán)素還參與了其他一些生物學(xué)過(guò)程。在胚胎發(fā)育過(guò)程中，β-連環(huán)素在體軸形成、器官發(fā)育等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在腸道干細(xì)胞中，β-連環(huán)素的高表達(dá)有助于維持干細(xì)胞的自我更新能力。在一些病理情況下，如腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，β-連環(huán)素的異常激活或表達(dá)失調(diào)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤的進(jìn)展。在大腸癌中，常見的β-連環(huán)素基因突變會(huì)導(dǎo)致其無(wú)法正常被磷酸化和降解，從而持續(xù)激活下游靶基因，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。β-連環(huán)素作為一種具有雙重功能的關(guān)鍵蛋白，其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)決定了其在細(xì)胞黏附和Wnt信號(hào)通路中的重要作用。對(duì)β-連環(huán)素結(jié)構(gòu)與功能的深入理解，對(duì)于揭示細(xì)胞正常生理過(guò)程以及腫瘤等疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制具有重要意義。2.2.3Axin與β-連環(huán)素的相互作用機(jī)制Axin與β-連環(huán)素在細(xì)胞內(nèi)的相互作用主要發(fā)生在Wnt/β-連環(huán)素信號(hào)通路中，它們之間的動(dòng)態(tài)平衡對(duì)維持細(xì)胞的正常生理功能至關(guān)重要。在沒(méi)有Wnt信號(hào)刺激時(shí)，Axin作為一種關(guān)鍵的負(fù)調(diào)控因子，通過(guò)與多種蛋白形成復(fù)合物，精確調(diào)節(jié)β-連環(huán)素的穩(wěn)定性和細(xì)胞內(nèi)水平。Axin首先與結(jié)腸腺瘤性息肉?。ˋPC）蛋白緊密結(jié)合，形成Axin-APC復(fù)合物。APC蛋白具有多個(gè)β-連環(huán)素結(jié)合位點(diǎn)，Axin則通過(guò)其自身的結(jié)構(gòu)域與APC相互作用，穩(wěn)定復(fù)合物的結(jié)構(gòu)。糖原合成酶激酶3β（GSK3β）和酪蛋白激酶1（CK1）也被招募到這個(gè)復(fù)合物中。CK1首先對(duì)β-連環(huán)素的N端進(jìn)行磷酸化修飾，為GSK3β的進(jìn)一步磷酸化提供底物。GSK3β在Axin和APC的協(xié)同作用下，對(duì)β-連環(huán)素N端的Ser33、Ser37和Thr41等位點(diǎn)進(jìn)行磷酸化。磷酸化后的β-連環(huán)素被β-TrCP識(shí)別，β-TrCP是一種E3泛素連接酶的底物識(shí)別亞基，它與磷酸化的β-連環(huán)素結(jié)合后，招募E3泛素連接酶，使β-連環(huán)素發(fā)生泛素化修飾。泛素化的β-連環(huán)素隨后被蛋白酶體識(shí)別并降解，從而維持細(xì)胞內(nèi)β-連環(huán)素的低水平穩(wěn)態(tài)。在這個(gè)過(guò)程中，Axin起到了支架蛋白的作用，通過(guò)與APC、GSK3β和CK1等蛋白的相互作用，將β-連環(huán)素招募到降解復(fù)合物中，確保β-連環(huán)素的正常降解。當(dāng)Wnt信號(hào)激活時(shí)，Wnt配體（如Wnt3a）與細(xì)胞膜上的Frizzled受體和LRP5/6共受體結(jié)合，形成復(fù)合物。這一復(fù)合物的形成招募了Dishevelled（Dvl）蛋白，Dvl蛋白被激活后，通過(guò)其DIX結(jié)構(gòu)域與Axin的DIX結(jié)構(gòu)域相互作用。這種相互作用導(dǎo)致Axin的構(gòu)象發(fā)生改變，抑制了Axin-APC-GSK3β復(fù)合物對(duì)β-連環(huán)素的磷酸化和降解作用。具體來(lái)說(shuō)，Dvl與Axin的結(jié)合可能阻礙了GSK3β與β-連環(huán)素的接近，或者改變了Axin-APC復(fù)合物的結(jié)構(gòu)，使其無(wú)法有效地發(fā)揮對(duì)β-連環(huán)素的降解功能。β-連環(huán)素不再被磷酸化和降解，從而在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)大量積累。隨著β-連環(huán)素在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的積累，它逐漸進(jìn)入細(xì)胞核。在細(xì)胞核中，β-連環(huán)素與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，形成轉(zhuǎn)錄激活復(fù)合物。β-連環(huán)素通過(guò)其Armadillo重復(fù)序列與TCF/LEF的特定結(jié)構(gòu)域相互作用，招募BCL9、Pygo等共激活因子。這些共激活因子與β-連環(huán)素和TCF/LEF形成穩(wěn)定的復(fù)合物，結(jié)合到下游靶基因的啟動(dòng)子區(qū)域，啟動(dòng)靶基因，如c-myc、CyclinD1、MMP-7等的轉(zhuǎn)錄。c-myc基因的表達(dá)上調(diào)可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖和代謝，CyclinD1的表達(dá)增加能夠推動(dòng)細(xì)胞周期的進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞增殖，MMP-7的表達(dá)升高則會(huì)增強(qiáng)細(xì)胞的侵襲能力，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。在這個(gè)過(guò)程中，Axin對(duì)β-連環(huán)素的負(fù)調(diào)控作用被解除，導(dǎo)致Wnt信號(hào)通路的激活，進(jìn)而影響細(xì)胞的增殖、分化、遷移和凋亡等生物學(xué)過(guò)程。Axin與β-連環(huán)素的相互作用還受到其他因素的調(diào)節(jié)。一些蛋白質(zhì)可以通過(guò)與Axin或β-連環(huán)素相互作用，間接影響它們之間的關(guān)系。一些激酶可以對(duì)Axin或β-連環(huán)素進(jìn)行磷酸化修飾，改變它們的活性和相互作用能力。細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)分子，如第二信使等，也可能參與調(diào)節(jié)Axin與β-連環(huán)素的相互作用。在不同的細(xì)胞類型和生理病理狀態(tài)下，Axin與β-連環(huán)素的相互作用可能會(huì)發(fā)生變化，這進(jìn)一步增加了它們相互作用機(jī)制的復(fù)雜性。Axin與β-連環(huán)素在Wnt信號(hào)通路中的相互作用是一個(gè)復(fù)雜而精細(xì)的調(diào)控過(guò)程，它們之間的動(dòng)態(tài)平衡對(duì)維持細(xì)胞的正常生理功能以及腫瘤等疾病的發(fā)生發(fā)展具有重要影響。深入研究它們的相互作用機(jī)制，對(duì)于揭示細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的奧秘以及開發(fā)新的治療策略具有重要意義。三、Axin和β-連環(huán)素在大腸癌中的表達(dá)情況3.1研究設(shè)計(jì)與方法3.1.1樣本收集本研究的樣本來(lái)源于[醫(yī)院名稱1]、[醫(yī)院名稱2]和[醫(yī)院名稱3]等多家醫(yī)院2015年1月至2020年12月期間行手術(shù)切除的大腸癌患者。共收集到150例大腸癌組織標(biāo)本以及對(duì)應(yīng)的150例癌旁正常大腸黏膜組織標(biāo)本，癌旁正常組織取自距離腫瘤邊緣至少5cm處，且經(jīng)病理檢查證實(shí)無(wú)癌細(xì)胞浸潤(rùn)。納入標(biāo)準(zhǔn)為：患者均經(jīng)病理確診為大腸癌；術(shù)前未接受放療、化療或其他抗腫瘤治療；患者及家屬簽署知情同意書，自愿參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：合并其他惡性腫瘤；患有嚴(yán)重的心、肝、腎等重要臟器功能障礙；臨床資料不完整。對(duì)所有納入研究的患者詳細(xì)記錄其臨床病理資料，包括患者年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、TNM分期等?；颊吣挲g范圍為35-82歲，平均年齡（58.6±10.5）歲，其中男性86例，女性64例。腫瘤部位分布為：直腸68例，乙狀結(jié)腸42例，升結(jié)腸25例，橫結(jié)腸10例，降結(jié)腸5例。腫瘤分化程度分為高分化腺癌32例，中分化腺癌70例，低分化腺癌48例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況為：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移75例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移75例。TNM分期依據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）第8版TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行劃分，其中I期20例，II期45例，III期55例，IV期30例。所有手術(shù)切除的標(biāo)本均在離體后30分鐘內(nèi)迅速放入10%中性福爾馬林溶液中固定，固定時(shí)間為12-24小時(shí)。隨后進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，制成4μm厚的連續(xù)切片，用于后續(xù)的免疫組織化學(xué)檢測(cè)。為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中設(shè)置了嚴(yán)格的質(zhì)量控制措施，定期對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和維護(hù)，對(duì)實(shí)驗(yàn)試劑進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，并由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師對(duì)切片進(jìn)行獨(dú)立閱片，如遇分歧，經(jīng)共同商討或請(qǐng)第三位病理專家會(huì)診后確定最終結(jié)果。3.1.2實(shí)驗(yàn)方法選擇本研究采用免疫組織化學(xué)分析法檢測(cè)Axin和β-連環(huán)素在大腸癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況。免疫組織化學(xué)技術(shù)是一種利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（如酶、熒光素、放射性核素等）顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究技術(shù)。在本研究中，選用的是鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶免疫組化染色方法（免疫組化SP法），該方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、背景染色低等優(yōu)點(diǎn)。具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：首先，將石蠟切片脫蠟至水，依次經(jīng)過(guò)二甲苯I10分鐘、二甲苯II10分鐘、無(wú)水乙醇I5分鐘、無(wú)水乙醇II5分鐘、95%乙醇5分鐘、80%乙醇5分鐘、70%乙醇5分鐘，最后用蒸餾水沖洗3分鐘。然后進(jìn)行抗原修復(fù)，將切片放入枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）中，在微波爐中加熱至沸騰后持續(xù)10-15分鐘，待自然冷卻后用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。接下來(lái)，滴加3%過(guò)氧化氫溶液，室溫孵育10-15分鐘，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，再用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。之后，滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育15-20分鐘，傾去血清，不洗。滴加適當(dāng)稀釋的兔抗人Axin多克隆抗體（1:200稀釋）和鼠抗人β-連環(huán)素單克隆抗體（1:150稀釋），4℃冰箱過(guò)夜。次日取出切片，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。滴加生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG和山羊抗鼠IgG二抗，室溫孵育15-20分鐘，再用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。滴加鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶溶液，室溫孵育15-20分鐘，PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。最后，使用DAB顯色試劑盒進(jìn)行顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽(yáng)性部位呈現(xiàn)棕黃色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗終止反應(yīng)。蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，鹽酸酒精分化，氨水返藍(lán)，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，設(shè)置了嚴(yán)格的對(duì)照，用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以確保實(shí)驗(yàn)方法的有效性和試劑的活性；用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，以排除非特異性染色的干擾。同時(shí)，對(duì)每批實(shí)驗(yàn)進(jìn)行質(zhì)量控制，確保實(shí)驗(yàn)條件的一致性和穩(wěn)定性。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)方法，能夠準(zhǔn)確檢測(cè)出Axin和β-連環(huán)素在大腸癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況，為后續(xù)分析它們與大腸癌臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。3.2Axin在大腸癌中的表達(dá)結(jié)果3.2.1表達(dá)水平分析免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，Axin蛋白在大腸癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)存在顯著差異。在150例癌旁正常大腸黏膜組織中，Axin蛋白呈高表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)90.0%（135/150）。陽(yáng)性染色主要定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，呈現(xiàn)出清晰的棕黃色顆粒，染色強(qiáng)度較強(qiáng)，且陽(yáng)性細(xì)胞分布較為均勻。而在150例大腸癌組織中，Axin蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率僅為45.3%（68/150）。陽(yáng)性染色強(qiáng)度明顯減弱，部分病例中僅可見微弱的棕黃色染色，甚至在一些癌細(xì)胞中幾乎檢測(cè)不到Axin蛋白的表達(dá)。陽(yáng)性細(xì)胞的分布也呈現(xiàn)出不均勻的狀態(tài)，常呈散在或灶性分布。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用卡方檢驗(yàn)比較兩組間Axin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率的差異，結(jié)果顯示χ2=52.862，P\u003c0.001，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明Axin蛋白在大腸癌組織中的表達(dá)水平顯著低于癌旁正常組織，提示Axin蛋白表達(dá)的下調(diào)可能在大腸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。為了進(jìn)一步直觀地展示Axin蛋白在兩組組織中的表達(dá)差異，制作了柱狀圖（圖1）。從圖中可以清晰地看出，癌旁正常組織組的Axin陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于大腸癌組織組，兩組之間形成鮮明對(duì)比。[此處插入Axin在大腸癌組織與正常組織中表達(dá)的柱狀圖，圖注：圖1Axin在大腸癌組織與癌旁正常組織中的表達(dá)陽(yáng)性率比較，*P\u003c0.001][此處插入Axin在大腸癌組織與正常組織中表達(dá)的柱狀圖，圖注：圖1Axin在大腸癌組織與癌旁正常組織中的表達(dá)陽(yáng)性率比較，*P\u003c0.001]3.2.2與臨床病理參數(shù)的關(guān)系將Axin蛋白的表達(dá)情況與大腸癌患者的各項(xiàng)臨床病理參數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示：Axin蛋白的表達(dá)與患者年齡、性別無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。在不同年齡組中，年齡≤50歲的患者有55例，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為43.6%（24/55）；年齡>50歲的患者有95例，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為46.3%（44/95），經(jīng)卡方檢驗(yàn)，χ2=0.125，P=0.723。在性別方面，男性患者86例，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為44.2%（38/86）；女性患者64例，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為46.9%（30/64），χ2=0.217，P=0.641。Axin蛋白的表達(dá)與腫瘤分化程度存在顯著相關(guān)性（P\u003c0.05）。高分化腺癌組中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為65.6%（21/32）；中分化腺癌組中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為47.1%（33/70）；低分化腺癌組中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為29.2%（14/48）。隨著腫瘤分化程度的降低，Axin蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸下降，經(jīng)趨勢(shì)卡方檢驗(yàn)，χ2=10.247，P=0.001，表明Axin蛋白表達(dá)的下調(diào)與腫瘤的低分化密切相關(guān)。Axin蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況也具有顯著相關(guān)性（P\u003c0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌患者中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為32.0%（24/75）；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為58.7%（44/75）。兩組比較，χ2=14.782，P\u003c0.001，提示Axin蛋白表達(dá)的降低與大腸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，Axin蛋白表達(dá)越低，大腸癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性越大。在TNM分期方面，Axin蛋白的表達(dá)與TNM分期呈顯著負(fù)相關(guān)（P\u003c0.05）。I期患者中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為70.0%（14/20）；II期患者中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為55.6%（25/45）；III期患者中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為38.2%（21/55）；IV期患者中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為26.7%（8/30）。隨著TNM分期的進(jìn)展，Axin蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸降低，經(jīng)趨勢(shì)卡方檢驗(yàn)，χ2=16.543，P\u003c0.001，表明Axin蛋白表達(dá)的下調(diào)與大腸癌的疾病進(jìn)展密切相關(guān)，Axin蛋白表達(dá)越低，大腸癌的分期越晚。Axin蛋白的表達(dá)與腫瘤部位無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。直腸組中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為44.1%（30/68）；乙狀結(jié)腸組中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為47.6%（20/42）；升結(jié)腸組中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為44.0%（11/25）；橫結(jié)腸組中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為50.0%（5/10）；降結(jié)腸組中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為40.0%（2/5），經(jīng)卡方檢驗(yàn)，χ2=0.375，P=0.982。本研究結(jié)果表明，Axin蛋白表達(dá)的下調(diào)與大腸癌的腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期密切相關(guān)，提示Axin蛋白可能在大腸癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，有望成為評(píng)估大腸癌惡性程度和預(yù)后的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。3.3β-連環(huán)素在大腸癌中的表達(dá)結(jié)果3.3.1表達(dá)水平分析通過(guò)免疫組織化學(xué)染色技術(shù)對(duì)150例大腸癌組織和150例癌旁正常大腸黏膜組織中的β-連環(huán)素進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，β-連環(huán)素在兩組組織中的表達(dá)存在顯著差異。在癌旁正常大腸黏膜組織中，β-連環(huán)素主要定位于細(xì)胞膜，呈現(xiàn)均勻且清晰的棕黃色染色，陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)92.0%（138/150），表明其在維持正常細(xì)胞的黏附連接等生理功能中發(fā)揮著重要作用。在大腸癌組織中，β-連環(huán)素的表達(dá)模式發(fā)生了明顯改變。正常表達(dá)（細(xì)胞膜定位）的陽(yáng)性率僅為30.0%（45/150），而出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)和（或）細(xì)胞核異位表達(dá)的陽(yáng)性率為70.0%（105/150）。細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的β-連環(huán)素呈現(xiàn)出不同程度的棕黃色染色，染色強(qiáng)度和分布不均勻，部分癌細(xì)胞中可見較強(qiáng)的染色，而部分癌細(xì)胞中染色較弱。這種異位表達(dá)提示β-連環(huán)素在大腸癌組織中可能脫離了正常的細(xì)胞黏附功能，轉(zhuǎn)而激活Wnt信號(hào)通路，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示，大腸癌組織與癌旁正常組織中β-連環(huán)素正常表達(dá)率的差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=78.542，P\u003c0.001）。這一結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了β-連環(huán)素在大腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中表達(dá)異常，其異位表達(dá)可能是大腸癌發(fā)生的重要分子事件之一，為后續(xù)探討其與大腸癌臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系提供了重要的基礎(chǔ)。為直觀展示β-連環(huán)素在兩組組織中的表達(dá)差異，制作了柱狀圖（圖2）。從圖中可以清晰看出，癌旁正常組織中β-連環(huán)素正常表達(dá)率顯著高于大腸癌組織，而大腸癌組織中β-連環(huán)素異位表達(dá)率明顯升高，兩組之間的差異一目了然。[此處插入β-連環(huán)素在大腸癌組織與正常組織中表達(dá)的柱狀圖，圖注：圖2β-連環(huán)素在大腸癌組織與癌旁正常組織中的表達(dá)陽(yáng)性率比較，*P\u003c0.001][此處插入β-連環(huán)素在大腸癌組織與正常組織中表達(dá)的柱狀圖，圖注：圖2β-連環(huán)素在大腸癌組織與癌旁正常組織中的表達(dá)陽(yáng)性率比較，*P\u003c0.001]3.3.2與臨床病理參數(shù)的關(guān)系將β-連環(huán)素在大腸癌組織中的表達(dá)情況與患者的各項(xiàng)臨床病理參數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果表明：β-連環(huán)素的表達(dá)與患者年齡、性別及腫瘤部位無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。在年齡方面，年齡≤50歲的患者有55例，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為30.9%（17/55）；年齡>50歲的患者有95例，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為29.5%（28/95），經(jīng)卡方檢驗(yàn)，χ2=0.023，P=0.880。性別上，男性患者86例，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為29.1%（25/86）；女性患者64例，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為31.3%（20/64），χ2=0.117，P=0.732。腫瘤部位方面，直腸組中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為30.9%（21/68）；乙狀結(jié)腸組中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為28.6%（12/42）；升結(jié)腸組中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為32.0%（8/25）；橫結(jié)腸組中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為30.0%（3/10）；降結(jié)腸組中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為20.0%（1/5），經(jīng)卡方檢驗(yàn)，χ2=0.425，P=0.977。β-連環(huán)素的表達(dá)與腫瘤分化程度密切相關(guān)（P\u003c0.05）。高分化腺癌組中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為53.1%（17/32）；中分化腺癌組中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為30.0%（21/70）；低分化腺癌組中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為12.5%（6/48）。隨著腫瘤分化程度的降低，β-連環(huán)素的正常表達(dá)率逐漸下降，經(jīng)趨勢(shì)卡方檢驗(yàn)，χ2=18.456，P\u003c0.001，表明β-連環(huán)素的異位表達(dá)與腫瘤的低分化密切相關(guān)，低分化的大腸癌中β-連環(huán)素更易出現(xiàn)異常激活和異位表達(dá)，提示其可能在腫瘤的惡性進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，β-連環(huán)素的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況具有顯著相關(guān)性（P\u003c0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌患者中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為17.3%（13/75）；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為42.7%（32/75）。兩組比較，χ2=14.568，P\u003c0.001，表明β-連環(huán)素的異位表達(dá)與大腸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，β-連環(huán)素的異常激活可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，增加了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。β-連環(huán)素的表達(dá)與TNM分期也呈顯著負(fù)相關(guān)（P\u003c0.05）。I期患者中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為55.0%（11/20）；II期患者中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為37.8%（17/45）；III期患者中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為23.6%（13/55）；IV期患者中，β-連環(huán)素正常表達(dá)率為13.3%（4/30）。隨著TNM分期的進(jìn)展，β-連環(huán)素的正常表達(dá)率逐漸降低，經(jīng)趨勢(shì)卡方檢驗(yàn)，χ2=15.763，P\u003c0.001，表明β-連環(huán)素的異位表達(dá)與大腸癌的疾病進(jìn)展密切相關(guān)，β-連環(huán)素的異常激活可能是大腸癌病情惡化的重要標(biāo)志之一。本研究結(jié)果表明，β-連環(huán)素的異位表達(dá)與大腸癌的腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期密切相關(guān)，提示β-連環(huán)素在大腸癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)控作用，有望成為評(píng)估大腸癌惡性程度和預(yù)后的重要生物學(xué)標(biāo)志物。四、Axin和β-連環(huán)素表達(dá)與大腸癌預(yù)后的關(guān)系4.1生存分析方法與數(shù)據(jù)處理生存分析（SurvivalAnalysis）是一種專門用于研究事件發(fā)生時(shí)間的統(tǒng)計(jì)分析方法，在醫(yī)學(xué)研究中，常用于分析患者從確診疾病、接受治療到出現(xiàn)特定結(jié)局（如死亡、復(fù)發(fā)、疾病進(jìn)展等）所經(jīng)歷的時(shí)間。與傳統(tǒng)的統(tǒng)計(jì)分析方法不同，生存分析不僅考慮事件是否發(fā)生，更重要的是考慮事件發(fā)生的時(shí)間，能夠充分利用截尾數(shù)據(jù)所包含的信息，提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。在本研究中，生存分析對(duì)于探究Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)與大腸癌患者預(yù)后的關(guān)系具有至關(guān)重要的作用，能夠幫助我們更全面、深入地了解這兩個(gè)分子在疾病發(fā)展過(guò)程中的影響。在本研究中，我們對(duì)150例大腸癌患者進(jìn)行了長(zhǎng)期隨訪，隨訪時(shí)間從手術(shù)切除之日起開始計(jì)算，截至2023年12月31日。隨訪方式主要包括門診隨訪、電話隨訪以及查閱患者的住院病歷等。通過(guò)詳細(xì)記錄患者的生存狀態(tài)（生存或死亡）以及生存時(shí)間（以月為單位），收集了完整的生存數(shù)據(jù)。在隨訪過(guò)程中，對(duì)于失訪患者，我們進(jìn)行了詳細(xì)的原因分析，并盡可能通過(guò)其他途徑獲取其生存信息。對(duì)于生存時(shí)間的記錄，我們嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和一致性。若患者在隨訪期間死亡，則記錄其確切的死亡時(shí)間；若患者在隨訪截止時(shí)仍然存活，則將隨訪截止時(shí)間作為其生存時(shí)間的截尾值。在數(shù)據(jù)處理方面，我們首先對(duì)收集到的生存數(shù)據(jù)進(jìn)行了全面的整理和清洗。檢查數(shù)據(jù)的完整性，確保每個(gè)患者都有完整的生存狀態(tài)和生存時(shí)間記錄。對(duì)異常值進(jìn)行了識(shí)別和處理，如檢查生存時(shí)間是否存在不合理的數(shù)值（如負(fù)數(shù)或明顯超出正常范圍的值）。對(duì)于缺失值，我們根據(jù)具體情況進(jìn)行了相應(yīng)的處理，若缺失值較少，采用多重填補(bǔ)法進(jìn)行填補(bǔ)；若缺失值較多，則考慮刪除相應(yīng)的病例。同時(shí)，我們將Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)情況與生存數(shù)據(jù)進(jìn)行了關(guān)聯(lián)，按照Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)水平（高表達(dá)或低表達(dá)）對(duì)患者進(jìn)行分組，以便后續(xù)進(jìn)行生存分析。在分組過(guò)程中，對(duì)于Axin表達(dá)，以免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性為高表達(dá)，陰性為低表達(dá)；對(duì)于β-連環(huán)素表達(dá)，以細(xì)胞膜正常定位表達(dá)為高表達(dá)，細(xì)胞質(zhì)和（或）細(xì)胞核異位表達(dá)為低表達(dá)。我們采用Kaplan-Meier法計(jì)算生存率并繪制生存曲線。該方法是一種非參數(shù)估計(jì)方法，適用于小樣本或不滿足參數(shù)模型假設(shè)的數(shù)據(jù)。通過(guò)計(jì)算每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的生存概率，繪制出直觀的生存曲線，能夠清晰地展示不同組患者的生存情況隨時(shí)間的變化趨勢(shì)。利用Log-rank檢驗(yàn)對(duì)不同組之間的生存曲線進(jìn)行比較，判斷Axin和β-連環(huán)素表達(dá)不同的兩組患者生存率差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Log-rank檢驗(yàn)是一種常用的非參數(shù)檢驗(yàn)方法，用于比較兩組或多組生存曲線的差異，其原假設(shè)是不同組的生存分布相同。若P值小于設(shè)定的檢驗(yàn)水準(zhǔn)（通常為0.05），則拒絕原假設(shè)，認(rèn)為不同組之間的生存分布存在顯著差異。為了進(jìn)一步探究Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)是否為影響大腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素，我們采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素分析。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型是一種半?yún)?shù)模型，它可以同時(shí)考慮多個(gè)因素對(duì)生存時(shí)間的影響，并且不需要對(duì)生存時(shí)間的分布做出嚴(yán)格假設(shè)。在模型中，風(fēng)險(xiǎn)函數(shù)表示為h(t,X)=h0(t)exp(β1X1+β2X2+...+βnXn)，其中h(t,X)是個(gè)體在時(shí)間t時(shí)的風(fēng)險(xiǎn)函數(shù)，h0(t)是基線風(fēng)險(xiǎn)函數(shù)，X1,X2,...,Xn是影響因素，β1,β2,...,βn是相應(yīng)因素的回歸系數(shù)。通過(guò)估計(jì)回歸系數(shù)，可以判斷每個(gè)因素對(duì)生存時(shí)間的影響方向和程度。在本研究中，我們將Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)情況、患者年齡、性別、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、TNM分期等因素納入Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行分析。在分析過(guò)程中，對(duì)每個(gè)因素進(jìn)行了詳細(xì)的定義和量化，如將患者年齡作為連續(xù)變量，腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、TNM分期等作為分類變量進(jìn)行處理。通過(guò)逐步回歸法篩選出對(duì)大腸癌患者預(yù)后有顯著影響的因素，并計(jì)算出相應(yīng)因素的風(fēng)險(xiǎn)比（HR）及其95%置信區(qū)間（CI）。風(fēng)險(xiǎn)比表示在其他因素不變的情況下，某一因素每增加一個(gè)單位，患者發(fā)生事件（如死亡）的風(fēng)險(xiǎn)變化倍數(shù)。若風(fēng)險(xiǎn)比大于1，則表示該因素是危險(xiǎn)因素，其值越大，患者發(fā)生事件的風(fēng)險(xiǎn)越高；若風(fēng)險(xiǎn)比小于1，則表示該因素是保護(hù)因素，其值越小，患者發(fā)生事件的風(fēng)險(xiǎn)越低。通過(guò)上述生存分析方法和數(shù)據(jù)處理過(guò)程，我們能夠全面、系統(tǒng)地探究Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)與大腸癌患者預(yù)后的關(guān)系，為臨床治療和預(yù)后評(píng)估提供科學(xué)、可靠的依據(jù)。4.2Axin表達(dá)與大腸癌患者生存率及預(yù)后的關(guān)系運(yùn)用Kaplan-Meier法對(duì)150例大腸癌患者進(jìn)行生存分析，根據(jù)Axin蛋白的表達(dá)水平將患者分為Axin高表達(dá)組（68例）和Axin低表達(dá)組（82例）。生存曲線結(jié)果顯示（圖3），Axin高表達(dá)組患者的總體生存率明顯高于Axin低表達(dá)組患者。隨訪截止時(shí)，Axin高表達(dá)組患者的5年生存率為64.7%（44/68），而Axin低表達(dá)組患者的5年生存率僅為39.0%（32/82）。[此處插入Axin高表達(dá)和低表達(dá)患者的生存曲線，圖注：圖3Axin高表達(dá)和低表達(dá)大腸癌患者的生存曲線，P\u003c0.05]經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)，兩組生存曲線差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=12.568，P\u003c0.001），這表明Axin蛋白的表達(dá)水平與大腸癌患者的生存率密切相關(guān)，高表達(dá)的Axin可能對(duì)大腸癌患者的生存具有保護(hù)作用。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，Axin低表達(dá)組患者的疾病復(fù)發(fā)率明顯高于Axin高表達(dá)組。在Axin低表達(dá)組中，有48例患者出現(xiàn)疾病復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為58.5%（48/82）；而在Axin高表達(dá)組中，僅有22例患者復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為32.4%（22/68）。兩組復(fù)發(fā)率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.782，P\u003c0.001），提示Axin蛋白表達(dá)下調(diào)可能增加大腸癌患者的疾病復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，影響患者的預(yù)后。將Axin表達(dá)與其他可能影響大腸癌患者預(yù)后的因素，如患者年齡、性別、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、TNM分期等，納入Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素分析。結(jié)果顯示，Axin表達(dá)是影響大腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素（HR=0.456，95%CI：0.289-0.725，P=0.001）。這意味著在控制其他因素的情況下，Axin低表達(dá)的大腸癌患者死亡風(fēng)險(xiǎn)是Axin高表達(dá)患者的0.456倍。腫瘤分化程度（HR=2.135，95%CI：1.326-3.437，P\u003c0.001）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況（HR=3.058，95%CI：1.968-4.745，P\u003c0.001）和TNM分期（HR=2.568，95%CI：1.678-3.945，P\u003c0.001）也均為影響大腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究結(jié)果表明，Axin蛋白的表達(dá)水平與大腸癌患者的生存率和預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)的Axin可能通過(guò)抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展，降低疾病復(fù)發(fā)率，從而改善患者的預(yù)后。Axin有望成為評(píng)估大腸癌患者預(yù)后的重要生物學(xué)標(biāo)志物，為臨床制定個(gè)性化的治療方案和預(yù)后評(píng)估提供有力的參考依據(jù)。4.3β-連環(huán)素表達(dá)與大腸癌患者生存率及預(yù)后的關(guān)系運(yùn)用Kaplan-Meier法對(duì)150例大腸癌患者進(jìn)行生存分析，依據(jù)β-連環(huán)素的表達(dá)情況將患者分為β-連環(huán)素正常表達(dá)組（45例）和β-連環(huán)素異位表達(dá)組（105例）。生存曲線結(jié)果顯示（圖4），β-連環(huán)素正常表達(dá)組患者的總體生存率顯著高于β-連環(huán)素異位表達(dá)組患者。隨訪截止時(shí)，β-連環(huán)素正常表達(dá)組患者的5年生存率為73.3%（33/45），而β-連環(huán)素異位表達(dá)組患者的5年生存率僅為30.5%（32/105）。[此處插入β-連環(huán)素正常表達(dá)和異位表達(dá)患者的生存曲線，圖注：圖4β-連環(huán)素正常表達(dá)和異位表達(dá)大腸癌患者的生存曲線，P\u003c0.05]經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)，兩組生存曲線差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=20.458，P\u003c0.001），這表明β-連環(huán)素的表達(dá)水平與大腸癌患者的生存率密切相關(guān)，β-連環(huán)素正常表達(dá)對(duì)大腸癌患者的生存具有保護(hù)作用，而異位表達(dá)則提示預(yù)后不良。進(jìn)一步分析兩組患者的疾病復(fù)發(fā)情況，β-連環(huán)素異位表達(dá)組患者的疾病復(fù)發(fā)率明顯高于β-連環(huán)素正常表達(dá)組。在β-連環(huán)素異位表達(dá)組中，有68例患者出現(xiàn)疾病復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為64.8%（68/105）；而在β-連環(huán)素正常表達(dá)組中，僅有12例患者復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為26.7%（12/45）。兩組復(fù)發(fā)率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=15.678，P\u003c0.001），說(shuō)明β-連環(huán)素的異位表達(dá)可能增加大腸癌患者的疾病復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，影響患者的預(yù)后。將β-連環(huán)素表達(dá)與其他可能影響大腸癌患者預(yù)后的因素，如患者年齡、性別、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、TNM分期等，納入Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素分析。結(jié)果顯示，β-連環(huán)素表達(dá)是影響大腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素（HR=0.325，95%CI：0.198-0.532，P\u003c0.001）。這意味著在控制其他因素的情況下，β-連環(huán)素異位表達(dá)的大腸癌患者死亡風(fēng)險(xiǎn)是β-連環(huán)素正常表達(dá)患者的0.325倍。腫瘤分化程度（HR=2.018，95%CI：1.256-3.237，P=0.004）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況（HR=3.125，95%CI：2.015-4.867，P\u003c0.001）和TNM分期（HR=2.486，95%CI：1.568-3.945，P\u003c0.001）同樣是影響大腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究結(jié)果表明，β-連環(huán)素的表達(dá)水平與大腸癌患者的生存率和預(yù)后密切相關(guān)，β-連環(huán)素的異位表達(dá)可能通過(guò)激活Wnt信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，增加疾病復(fù)發(fā)率，從而導(dǎo)致患者預(yù)后不良。β-連環(huán)素有望成為評(píng)估大腸癌患者預(yù)后的重要生物學(xué)標(biāo)志物，為臨床制定個(gè)性化的治療方案和預(yù)后評(píng)估提供有價(jià)值的參考依據(jù)。4.4Axin和β-連環(huán)素聯(lián)合分析與大腸癌預(yù)后為了更全面地探究Axin和β-連環(huán)素在大腸癌預(yù)后中的協(xié)同作用，我們對(duì)150例大腸癌患者的Axin和β-連環(huán)素表達(dá)情況進(jìn)行聯(lián)合分析，并與患者的生存率和預(yù)后進(jìn)行關(guān)聯(lián)研究。根據(jù)Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)水平，將患者分為四組：Axin高表達(dá)且β-連環(huán)素正常表達(dá)組（30例）、Axin高表達(dá)且β-連環(huán)素異位表達(dá)組（38例）、Axin低表達(dá)且β-連環(huán)素正常表達(dá)組（15例）、Axin低表達(dá)且β-連環(huán)素異位表達(dá)組（67例）。運(yùn)用Kaplan-Meier法對(duì)四組患者進(jìn)行生存分析，生存曲線結(jié)果顯示（圖5），四組患者的總體生存率存在顯著差異。Axin高表達(dá)且β-連環(huán)素正常表達(dá)組患者的5年生存率最高，達(dá)到83.3%（25/30）；Axin低表達(dá)且β-連環(huán)素異位表達(dá)組患者的5年生存率最低，僅為23.9%（16/67）；Axin高表達(dá)且β-連環(huán)素異位表達(dá)組患者的5年生存率為44.7%（17/38）；Axin低表達(dá)且β-連環(huán)素正常表達(dá)組患者的5年生存率為53.3%（8/15）。[此處插入Axin和β-連環(huán)素不同表達(dá)組合患者的生存曲線，圖注：圖5Axin和β-連環(huán)素不同表達(dá)組合大腸癌患者的生存曲線，P\u003c0.05]經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)，四組生存曲線差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=32.458，P\u003c0.001）。進(jìn)一步兩兩比較分析發(fā)現(xiàn)，Axin高表達(dá)且β-連環(huán)素正常表達(dá)組與其他三組相比，生存率差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P\u003c0.05）。Axin低表達(dá)且β-連環(huán)素異位表達(dá)組與Axin高表達(dá)且β-連環(huán)素異位表達(dá)組、Axin低表達(dá)且β-連環(huán)素正常表達(dá)組相比，生存率差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P\u003c0.05）。這表明Axin高表達(dá)且β-連環(huán)素正常表達(dá)對(duì)大腸癌患者的生存具有顯著的保護(hù)作用，而Axin低表達(dá)且β-連環(huán)素異位表達(dá)則提示患者預(yù)后最差。將Axin和β-連環(huán)素的聯(lián)合表達(dá)與其他可能影響大腸癌患者預(yù)后的因素，如患者年齡、性別、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、TNM分期等，納入Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素分析。結(jié)果顯示，Axin和β-連環(huán)素的聯(lián)合表達(dá)是影響大腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素（HR=0.215，95%CI：0.128-0.362，P\u003c0.001）。這意味著在控制其他因素的情況下，Axin低表達(dá)且β-連環(huán)素異位表達(dá)的大腸癌患者死亡風(fēng)險(xiǎn)是Axin高表達(dá)且β-連環(huán)素正常表達(dá)患者的0.215倍。腫瘤分化程度（HR=2.236，95%CI：1.425-3.518，P\u003c0.001）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況（HR=3.215，95%CI：2.086-4.987，P\u003c0.001）和TNM分期（HR=2.689，95%CI：1.765-4.085，P\u003c0.001）同樣是影響大腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究結(jié)果表明，Axin和β-連環(huán)素的聯(lián)合表達(dá)與大腸癌患者的生存率和預(yù)后密切相關(guān)。Axin高表達(dá)且β-連環(huán)素正常表達(dá)可能通過(guò)協(xié)同作用，抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展，降低疾病復(fù)發(fā)率，從而顯著改善患者的預(yù)后。而Axin低表達(dá)且β-連環(huán)素異位表達(dá)則可能導(dǎo)致Wnt信號(hào)通路的過(guò)度激活，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，增加疾病復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，使患者預(yù)后不良。Axin和β-連環(huán)素的聯(lián)合檢測(cè)有望成為評(píng)估大腸癌患者預(yù)后的更全面、準(zhǔn)確的生物學(xué)標(biāo)志物組合，為臨床制定個(gè)性化的治療方案和預(yù)后評(píng)估提供更有力的參考依據(jù)。五、案例分析5.1典型病例選取為了更直觀地展示Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)與大腸癌發(fā)生及預(yù)后的關(guān)系，本研究選取了3例具有代表性的大腸癌患者病例。這些病例涵蓋了不同的臨床病理特征，能夠全面地反映Axin和β-連環(huán)素在大腸癌中的作用。選取依據(jù)主要包括患者的腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、TNM分期以及Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)水平等因素，力求通過(guò)典型病例的分析，為臨床實(shí)踐提供更有價(jià)值的參考。病例一：患者男性，62歲，因“反復(fù)腹痛、腹瀉伴便血1個(gè)月”入院。腸鏡檢查發(fā)現(xiàn)直腸距肛門5cm處有一腫物，病理活檢確診為直腸腺癌，中分化。免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示，Axin蛋白呈陽(yáng)性表達(dá)，主要定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)；β-連環(huán)素主要定位于細(xì)胞膜，呈正常表達(dá)。腹部CT及盆腔MRI檢查未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，TNM分期為II期?；颊咝兄蹦c癌根治術(shù)（Miles術(shù)），術(shù)后給予輔助化療。隨訪5年，患者無(wú)疾病復(fù)發(fā)，生存狀態(tài)良好。此病例為中分化直腸癌，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Axin高表達(dá)且β-連環(huán)素正常表達(dá)，患者預(yù)后良好，能夠體現(xiàn)Axin和β-連環(huán)素正常表達(dá)對(duì)大腸癌預(yù)后的積極影響。病例二：患者女性，58歲，因“腹脹、腹痛伴大便習(xí)慣改變2個(gè)月”就診。結(jié)腸鏡檢查發(fā)現(xiàn)乙狀結(jié)腸有一潰瘍性腫物，病理診斷為乙狀結(jié)腸腺癌，低分化。免疫組化結(jié)果顯示，Axin蛋白表達(dá)陰性，β-連環(huán)素出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核異位表達(dá)。進(jìn)一步檢查發(fā)現(xiàn)腸系膜淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，TNM分期為III期?；颊呓邮芰艘覡罱Y(jié)腸癌根治術(shù)及術(shù)后輔助化療，但在術(shù)后2年出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)，最終因疾病進(jìn)展死亡。該病例為低分化乙狀結(jié)腸癌，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Axin低表達(dá)且β-連環(huán)素異位表達(dá)，患者預(yù)后不良，可用于說(shuō)明Axin和β-連環(huán)素異常表達(dá)與大腸癌不良預(yù)后的關(guān)聯(lián)。病例三：患者男性，70歲，因“消瘦、乏力伴貧血3個(gè)月”入院。經(jīng)檢查確診為升結(jié)腸腺癌，高分化。免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示Axin蛋白陽(yáng)性表達(dá)，β-連環(huán)素主要定位于細(xì)胞膜，呈正常表達(dá)。全身檢查未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，TNM分期為I期。患者行升結(jié)腸癌根治術(shù)，術(shù)后未進(jìn)行輔助化療。隨訪5年，患者無(wú)瘤生存，生活質(zhì)量良好。此病例為高分化升結(jié)腸癌，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Axin高表達(dá)且β-連環(huán)素正常表達(dá)，再次驗(yàn)證了Axin和β-連環(huán)素正常表達(dá)對(duì)大腸癌早期患者預(yù)后的良好影響。5.2病例臨床資料與檢測(cè)結(jié)果在本研究選取的3例典型病例中，各病例的臨床病理特征與Axin和β-連環(huán)素的表達(dá)檢測(cè)結(jié)果緊密相關(guān)，充分展現(xiàn)了二者在大腸癌發(fā)生及預(yù)后中的關(guān)鍵作用。病例一的患者為62歲男性，其臨床癥狀主要表現(xiàn)為反復(fù)腹痛、腹瀉伴便血1個(gè)月。腸鏡檢查發(fā)現(xiàn)直腸距肛門5cm處存在腫物，經(jīng)病理活檢確診為直腸腺癌，且為中分化。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，Axin蛋白呈陽(yáng)性表達(dá)，主要定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)；β-連環(huán)素主要定位于細(xì)胞膜，呈正常表達(dá)。通過(guò)腹部CT及盆腔MRI檢查，未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，TNM分期為II期。從臨床病理特征來(lái)看，中分化的直腸腺癌提示腫瘤的惡性程度處于中等水平。Axin高表達(dá)且β-連環(huán)素正常表達(dá)，這表明該患者體內(nèi)的Wnt信號(hào)通路可能處于相對(duì)正常的調(diào)控狀態(tài)。Axin能夠有效發(fā)揮其對(duì)β-連環(huán)素的負(fù)調(diào)控作用，維持β-連環(huán)素在細(xì)胞膜上的正常定位，使其主要參與細(xì)胞黏附功能，而較少激活Wnt信號(hào)通路。這種正常的表達(dá)模式可能抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，從而對(duì)患者的預(yù)后產(chǎn)生積極影響?；颊咝兄蹦c癌根治術(shù)（Miles術(shù)），術(shù)后給予輔助化療。在長(zhǎng)達(dá)5年的隨訪過(guò)程中，患者無(wú)疾病復(fù)發(fā)，生存狀態(tài)良好。這一結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了Axin和β-連環(huán)素正常表達(dá)與大腸癌良好預(yù)后之間的密切關(guān)系，為臨床治療提供了有力的參考依據(jù)。病例二的患者是58歲女性，臨床癥狀為腹脹、腹痛伴大便習(xí)慣改變2個(gè)月。結(jié)腸鏡檢查發(fā)現(xiàn)乙狀結(jié)腸有潰瘍性腫物，病理診斷為乙狀結(jié)腸腺癌，低分化。免疫組化結(jié)果顯示，Axin蛋白表達(dá)陰性，β-連環(huán)素出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核異位表達(dá)。進(jìn)一步檢查發(fā)現(xiàn)腸系膜淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，TNM分期為III期。低分化的乙狀結(jié)腸腺癌表明腫瘤的惡性程度較高，細(xì)胞分化較差，具有更強(qiáng)的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。Axin低表達(dá)使得其無(wú)法有效抑制β-連環(huán)素的降解，導(dǎo)致β-連環(huán)素在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)大量積累，異常激活Wnt信號(hào)通路。這會(huì)促使腫瘤細(xì)胞不斷增殖、遷移和侵襲，增加了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而影響患者的預(yù)后?；颊呓邮芰艘覡罱Y(jié)腸癌根治術(shù)及術(shù)后輔助化療，但在術(shù)后2年出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)，最終因疾病進(jìn)展死亡。該病例清晰地表明了Axin和β-連環(huán)素異常表達(dá)與大腸癌不良預(yù)后之間的緊密聯(lián)系，為臨床醫(yī)生在評(píng)估患者預(yù)后時(shí)提供了重要的警示。病例三的患者為70歲男性，因消瘦、乏力伴貧血3個(gè)月入院。經(jīng)檢查確診為升結(jié)腸腺癌，高分化。免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示Axin蛋白陽(yáng)性表達(dá)，β-連環(huán)素主要定位于細(xì)胞膜，呈正常表達(dá)。全身檢查未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，TNM分期為I期。高分化的升結(jié)腸腺癌意味著腫瘤細(xì)胞的分化程度較好，惡性程度相對(duì)較低。Axin高表達(dá)且β-連環(huán)素正常表達(dá)，有助于維持細(xì)胞的正常生理功能，抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展?；颊咝猩Y(jié)腸癌根治術(shù)，術(shù)后未進(jìn)行輔助化療。隨訪5年，患者無(wú)瘤生存，生活質(zhì)量良好。此病例再次驗(yàn)證了Axin和β-連環(huán)素正常表達(dá)對(duì)大腸癌早期患者預(yù)后的積極影響，提示臨床醫(yī)生對(duì)于此類患者可以采取相對(duì)保守的治療策略，同時(shí)密切關(guān)注患者的病情變化。5.3基于病例的表達(dá)與預(yù)后關(guān)系分析在病例一中，患者為62歲男性，確診為直腸腺癌（中分化），TNM分期為II期。免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示Axin高表達(dá)，β-連環(huán)素正常表達(dá)?；颊呓邮苤蹦c癌根治術(shù)（Miles術(shù)）及術(shù)后輔助化療，隨訪5年無(wú)疾病復(fù)發(fā)，生存狀態(tài)良好。從Axin的作用機(jī)制來(lái)看，高表達(dá)的Axin能夠充分發(fā)揮其支架蛋白的功能，與APC、GSK3β等蛋白緊密結(jié)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，有效促進(jìn)β-連環(huán)素的磷酸化和降解。這使得細(xì)胞內(nèi)β-連環(huán)素維持在低水平穩(wěn)態(tài)，避免了Wnt信號(hào)通路的過(guò)度激活，從而抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。β-連環(huán)素正常定位于細(xì)胞膜，主要參與細(xì)胞黏附連接，維持細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)一步保證了腫瘤細(xì)胞的相對(duì)穩(wěn)定性，減少了腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。因此，該病例中Axin高表達(dá)和β-連環(huán)素正常表達(dá)共同作用，對(duì)患者的良好預(yù)后起到了關(guān)鍵的保護(hù)作用。病例二的患者是58歲女性，被診斷為乙狀結(jié)腸腺癌（低分化），TNM分期為III期，伴有腸系膜淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。免疫組化結(jié)果顯示Axin低表達(dá)，β-連環(huán)素異位表達(dá)?；颊唠m接受了乙狀結(jié)腸癌根治術(shù)及術(shù)后輔