DB42Determinationofenzymeactivityofzearalenone-degrad湖北省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I 2 2 2 2 2 3 4 5 6本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件起草單位：湖北大學、中國農(nóng)業(yè)科學院油料作物玉米赤霉烯酮降解酶活力的測定尚沒有相關國家和行業(yè)標準，本文件的實施解決了玉米赤霉烯酮素脫毒技術的發(fā)展，對推動玉米赤霉烯酮降解酶本文件通過紫外檢測器和熒光檢測器兩種方法來檢測玉米赤霉烯酮降解酶的酶活力，兩種方法的都具備，更具有普遍性，更容易被廣大企事業(yè)單位接1玉米赤霉烯酮降解酶活力的測定本文件規(guī)定了玉米赤霉烯酮降解酶（zearalenone-degradingenzyme，英文縮寫：ZHD本文件適用于玉米赤霉烯酮降解酶產(chǎn)品，最低檢出量為0.2U/g(U/mL)。3.1玉米赤霉烯酮降解酶活力單位/ZHD活力單位（U）在37℃、pH值為5.5的條件下，每分鐘從濃度為10μg/mL的玉米赤霉烯酮溶液中降解1μg玉米赤霉烯酮所需的酶量為一個玉米赤霉烯酮降解酶活力單位通過高效液相色譜檢測反應前和反應后殘留的ZEN含量，可以計算得出玉米赤霉烯酮降解酶ZHD活力單5.2甲醇（CH3OH色譜純。5.3乙腈（CH3CN色譜純。）：2）：）：大約18mL0.2mol/L檸檬酸溶液進行調節(jié)，用pH計測定使緩沖液pH為5.5。本文件通過測定ZEN的殘留量來計算ZHD活力單位，ZEN的殘留量測定分為高效液相色譜紫外檢測法7.2試樣酶液的制備固態(tài)試樣應粉碎或充分碾碎，過0.25mm孔徑篩。稱取適量試樣兩份，精確至0.1mg，分別置于2004000r/min離心5min，取上清液再用磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶移取適量樣品，用磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液（見5.11）進行稀釋、定容，稀釋后的待測酶液中7.3高效液相色譜紫外檢測法）；3取5支1.5mL的塑料小管，用色譜純甲醇將ZEN標準溶液逐級稀釋得到濃度為2μg/mL、4μg/mL、6），）；檢測波長：激發(fā)波長274nm，發(fā)射波長440nm；4），試樣中ZHD活力單位以XD表示，單位為酶活），XD=······················XD——試樣稀釋液中ZHD活力單位，單位為酶活力單位每毫升（U/mL1——最后反應體系體積1mL；）；5試樣ZHD活力單位以X表示，單位為酶活力單位每克（U/g）或者酶活力單位每毫升（U/mL按式X=XD×n·········································X——試樣中ZHD活力單位，單位為酶活力單位每毫