IGF1R在卵巢上皮性癌中的功能解析：從基礎(chǔ)研究到臨床治療新策略一、引言1.1研究背景與意義卵巢癌作為女性生殖系統(tǒng)中最致命的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著女性的生命健康。在全球范圍內(nèi)，卵巢癌的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢，尤其是卵巢上皮性癌（EpithelialOvarianCancer,EOC），約占所有卵巢癌病例的90%。其早期癥狀隱匿，缺乏有效的篩查手段，導(dǎo)致70%的患者在確診時已處于晚期，5年生存率僅為30%左右。盡管手術(shù)和化療等綜合治療手段在一定程度上改善了患者的預(yù)后，但復(fù)發(fā)率和耐藥性問題仍然是臨床治療面臨的巨大挑戰(zhàn)。胰島素樣生長因子1受體（Insulin-likeGrowthFactor1Receptor,IGF1R）是一種跨膜受體酪氨酸激酶，在細(xì)胞的生長、增殖、分化和存活等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。IGF1R與其配體胰島素樣生長因子1（IGF-1）或胰島素樣生長因子2（IGF-2）結(jié)合后，可激活下游的多條信號通路，如磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路等，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖、抑制細(xì)胞凋亡，并增強腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。近年來，越來越多的研究表明，IGF1R在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，包括乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌等，且其表達(dá)水平與腫瘤的惡性程度、預(yù)后及耐藥性密切相關(guān)。在卵巢上皮性癌中，IGF1R的異常表達(dá)也逐漸受到關(guān)注。已有研究證實，IGF1R在卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)明顯高于正常卵巢組織和良性卵巢腫瘤組織，且其高表達(dá)與腫瘤的分期、分級、腹水/腹腔沖洗液陽性以及患者的不良預(yù)后顯著相關(guān)。IGF1R通過激活下游信號通路，促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，同時還能抑制細(xì)胞凋亡，使得腫瘤細(xì)胞對化療藥物產(chǎn)生耐藥性，嚴(yán)重影響了卵巢癌患者的治療效果和生存質(zhì)量。因此，深入研究IGF1R在卵巢上皮性癌中的功能及其作用機(jī)制，對于揭示卵巢癌的發(fā)病機(jī)制、尋找新的治療靶點以及開發(fā)有效的治療策略具有重要的理論和臨床意義。本研究旨在系統(tǒng)地探討IGF1R在卵巢上皮性癌中的功能，通過體內(nèi)外實驗，明確IGF1R對卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和遷移等生物學(xué)行為的影響，并進(jìn)一步研究其作用機(jī)制。此外，還將探索以IGF1R為靶點的治療策略，為卵巢上皮性癌的臨床治療提供新的思路和方法，有望改善卵巢癌患者的預(yù)后，提高其生存質(zhì)量。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國外，對IGF1R在卵巢上皮性癌中的研究開展較早且較為深入。一些研究通過大規(guī)模的臨床樣本分析，明確了IGF1R在卵巢上皮性癌組織中的高表達(dá)與腫瘤的分期、分級以及患者預(yù)后之間的關(guān)聯(lián)。例如，美國的一項多中心研究收集了數(shù)百例卵巢上皮性癌患者的組織標(biāo)本，運用免疫組化和基因芯片技術(shù)，發(fā)現(xiàn)IGF1R的表達(dá)水平隨著腫瘤分期的升高而顯著增加，高表達(dá)IGF1R的患者無進(jìn)展生存期和總生存期明顯縮短。在機(jī)制研究方面，國外學(xué)者利用細(xì)胞系和動物模型，深入探討了IGF1R激活下游信號通路對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。他們發(fā)現(xiàn)，IGF1R與配體結(jié)合后，通過激活PI3K/Akt和MAPK等信號通路，促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖、抑制細(xì)胞凋亡，并且增強細(xì)胞的遷移和侵襲能力。在治療研究上，國外已經(jīng)開展了多項針對IGF1R的靶向治療臨床試驗，如使用IGF1R單克隆抗體或小分子抑制劑，雖然部分試驗取得了一定的療效，但也面臨著耐藥性和不良反應(yīng)等問題。國內(nèi)的研究也在逐步跟進(jìn)并取得了一些成果。在臨床研究方面，國內(nèi)學(xué)者通過對本地患者群體的研究，同樣證實了IGF1R在卵巢上皮性癌中的高表達(dá)及其與不良預(yù)后的相關(guān)性。同時，在機(jī)制研究上，國內(nèi)團(tuán)隊進(jìn)一步探索了IGF1R信號通路與其他細(xì)胞信號網(wǎng)絡(luò)之間的交互作用，發(fā)現(xiàn)IGF1R信號通路與Notch、Wnt等信號通路存在交叉對話，共同調(diào)控卵巢癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。在治療策略上，國內(nèi)除了開展靶向IGF1R的藥物臨床試驗外，還積極探索聯(lián)合治療方案，如將IGF1R抑制劑與傳統(tǒng)化療藥物或其他靶向藥物聯(lián)合使用，以提高治療效果。然而，現(xiàn)有研究仍存在一些不足之處。在臨床研究方面，雖然已明確IGF1R表達(dá)與卵巢上皮性癌的臨床病理特征及預(yù)后相關(guān)，但缺乏大樣本、多中心、前瞻性的研究來進(jìn)一步驗證這些結(jié)果，且對于IGF1R作為卵巢癌早期診斷標(biāo)志物的敏感性和特異性還需要更深入的研究。在機(jī)制研究方面，盡管對IGF1R下游信號通路有了一定了解，但對于IGF1R信號通路在卵巢癌細(xì)胞中的精準(zhǔn)調(diào)控機(jī)制，以及在腫瘤微環(huán)境中IGF1R與其他細(xì)胞成分之間的相互作用機(jī)制尚不完全清楚。在治療研究方面，目前針對IGF1R的靶向治療藥物在臨床應(yīng)用中面臨著耐藥性和不良反應(yīng)等問題，如何克服這些問題，提高靶向治療的療效和安全性，仍是亟待解決的難題。此外，對于IGF1R在卵巢癌干細(xì)胞中的作用及機(jī)制研究較少，而卵巢癌干細(xì)胞可能是腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源，這也為未來的研究提供了方向。1.3研究目的與創(chuàng)新點本研究旨在全面、深入地剖析IGF1R在卵巢上皮性癌中的功能，為卵巢癌的治療開辟新的路徑。具體而言，研究目的主要涵蓋以下三個關(guān)鍵方面：其一，通過細(xì)胞實驗，運用多種細(xì)胞系，深入探究IGF1R對卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和遷移等生物學(xué)行為的影響，明確其在細(xì)胞水平的具體作用；其二，借助分子生物學(xué)技術(shù)，揭示IGF1R影響卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的潛在作用機(jī)制，探尋其上下游相關(guān)的信號通路及關(guān)鍵分子；其三，構(gòu)建動物模型，驗證IGF1R在體內(nèi)對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的影響，并評估以IGF1R為靶點的治療策略的有效性和安全性，為臨床應(yīng)用提供堅實的實驗依據(jù)。本研究的創(chuàng)新點主要體現(xiàn)在三個層面。在研究內(nèi)容上，將從細(xì)胞、分子和動物模型多個層面系統(tǒng)研究IGF1R的功能，全面且深入地解析其在卵巢上皮性癌中的作用，這在以往的研究中較少見。在研究視角上，將從腫瘤微環(huán)境和細(xì)胞代謝等新的角度，探討IGF1R在卵巢上皮性癌中的作用機(jī)制，為深入理解卵巢癌的發(fā)病機(jī)制提供新的思路。在臨床應(yīng)用上，本研究將探索以IGF1R為靶點的聯(lián)合治療策略，為卵巢上皮性癌的臨床治療提供新的方案，有望突破現(xiàn)有治療手段的局限，提高患者的生存率和生活質(zhì)量。二、IGF1R的結(jié)構(gòu)與功能基礎(chǔ)2.1IGF1R的分子結(jié)構(gòu)胰島素樣生長因子1受體（IGF1R）是一種跨膜受體酪氨酸激酶，其結(jié)構(gòu)對于理解其功能及在卵巢上皮性癌中的作用機(jī)制至關(guān)重要。IGF1R由兩個α亞基和兩個β亞基通過二硫鍵連接形成異源四聚體結(jié)構(gòu)，這種獨特的結(jié)構(gòu)賦予了IGF1R特殊的生物學(xué)活性。α亞基完全位于細(xì)胞膜外，其氨基酸序列包含多個富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域。這些富含半胱氨酸的區(qū)域?qū)τ诰S持α亞基的空間構(gòu)象起著關(guān)鍵作用，進(jìn)而確保其能夠特異性地識別并結(jié)合胰島素樣生長因子1（IGF-1）和胰島素樣生長因子2（IGF-2）等配體。配體與α亞基的結(jié)合是IGF1R激活的起始步驟，這一過程具有高度的特異性和親和力，類似于“鎖與鑰匙”的精準(zhǔn)匹配。一旦配體與α亞基結(jié)合，就會引發(fā)受體結(jié)構(gòu)的微妙變化，從而啟動下游的信號傳導(dǎo)事件。β亞基則是貫穿細(xì)胞膜的跨膜蛋白，它包含三個主要的功能結(jié)構(gòu)域：近膜區(qū)、酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域（RTK區(qū)）和羧基末端。近膜區(qū)位于細(xì)胞膜內(nèi)，緊鄰跨膜區(qū)域，它在信號傳導(dǎo)中起著橋梁的作用，能夠?qū)⑴潴w結(jié)合引發(fā)的受體構(gòu)象變化傳遞到細(xì)胞內(nèi)的其他信號分子。酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域是β亞基的核心功能區(qū)域，它具有高度保守的氨基酸序列，與其他受體酪氨酸激酶家族成員具有較高的同源性。當(dāng)配體與α亞基結(jié)合后，會導(dǎo)致β亞基的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域發(fā)生自身磷酸化，即β亞基上的多個酪氨酸殘基被磷酸化修飾。這種磷酸化修飾是激活酪氨酸激酶活性的關(guān)鍵步驟，使其能夠?qū)TP上的磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到下游底物蛋白的酪氨酸殘基上，從而激活一系列下游信號通路。羧基末端則包含多個潛在的磷酸化位點，這些位點在信號傳導(dǎo)的調(diào)控中發(fā)揮著重要作用。它們可以與其他調(diào)節(jié)蛋白相互作用，進(jìn)一步調(diào)節(jié)IGF1R信號通路的活性和持續(xù)時間。IGF1R的這種分子結(jié)構(gòu)使得其能夠精確地感知細(xì)胞外環(huán)境中IGF-1和IGF-2等配體的存在，并將信號高效地傳遞到細(xì)胞內(nèi)，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長、增殖、分化和存活等生物學(xué)過程。在卵巢上皮性癌中，IGF1R結(jié)構(gòu)的異?；蚱渑c配體結(jié)合的改變，都可能導(dǎo)致其信號通路的異常激活，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。2.2IGF1R的正常生理功能在正常生理狀態(tài)下，IGF1R在細(xì)胞的生長、分化、代謝等多個關(guān)鍵過程中扮演著不可或缺的角色，其功能的正常發(fā)揮對于維持機(jī)體的穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。在細(xì)胞生長方面，IGF1R起著關(guān)鍵的調(diào)控作用。當(dāng)IGF-1或IGF-2與IGF1R結(jié)合后，受體的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域被激活，進(jìn)而引發(fā)一系列的磷酸化級聯(lián)反應(yīng)。這些反應(yīng)最終激活下游的磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號通路和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路等。PI3K/Akt通路主要通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)和活性，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而加速細(xì)胞的增殖過程。研究表明，在正常的肝細(xì)胞生長過程中，IGF1R被激活后，通過PI3K/Akt通路促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)，使得肝細(xì)胞能夠順利進(jìn)行DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂，實現(xiàn)細(xì)胞數(shù)量的增加。而MAPK通路則主要通過激活轉(zhuǎn)錄因子，如Elk-1、c-Jun等，促進(jìn)與細(xì)胞生長相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，為細(xì)胞的生長提供必要的蛋白質(zhì)和其他生物大分子。在成纖維細(xì)胞中，IGF1R激活的MAPK通路能夠上調(diào)c-fos、c-myc等原癌基因的表達(dá)，這些基因編碼的蛋白質(zhì)參與細(xì)胞增殖、分化和凋亡等過程的調(diào)控，從而促進(jìn)成纖維細(xì)胞的生長和增殖。IGF1R在細(xì)胞分化過程中也發(fā)揮著重要作用。它能夠誘導(dǎo)多種細(xì)胞類型向特定的方向分化，影響組織和器官的發(fā)育。在神經(jīng)干細(xì)胞的分化過程中，IGF1R信號通路能夠促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元方向分化，抑制其向膠質(zhì)細(xì)胞方向分化。具體機(jī)制是IGF1R激活后，通過調(diào)節(jié)一些轉(zhuǎn)錄因子的活性，如NeuroD、Ngn1等，這些轉(zhuǎn)錄因子能夠促進(jìn)神經(jīng)元特異性基因的表達(dá)，如微管相關(guān)蛋白2（MAP2）、神經(jīng)絲蛋白等，從而促使神經(jīng)干細(xì)胞逐漸分化為具有特定功能的神經(jīng)元。在肌肉細(xì)胞的分化過程中，IGF1R同樣起著關(guān)鍵作用。它能夠激活下游的mTOR信號通路，促進(jìn)肌肉特異性基因的表達(dá)，如肌球蛋白重鏈（MHC）、肌動蛋白等，從而促進(jìn)肌衛(wèi)星細(xì)胞分化為成熟的肌纖維，參與肌肉的生長和修復(fù)。IGF1R還在細(xì)胞代謝中發(fā)揮著重要作用，它參與調(diào)節(jié)糖代謝、脂代謝和蛋白質(zhì)代謝等多個方面。在糖代謝方面，IGF1R信號通路能夠促進(jìn)細(xì)胞對葡萄糖的攝取和利用。IGF1R激活后，通過PI3K/Akt通路，促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4（GLUT4）從細(xì)胞內(nèi)囊泡轉(zhuǎn)運到細(xì)胞膜上，增加細(xì)胞膜上GLUT4的數(shù)量，從而提高細(xì)胞對葡萄糖的攝取能力。在脂肪細(xì)胞中，IGF1R信號通路能夠調(diào)節(jié)脂肪的合成和分解。它可以通過激活A(yù)CC（乙酰輔酶A羧化酶）等關(guān)鍵酶，促進(jìn)脂肪酸的合成；同時，通過抑制HSL（激素敏感性脂肪酶）的活性，減少脂肪的分解，從而維持脂肪細(xì)胞內(nèi)脂肪含量的穩(wěn)定。在蛋白質(zhì)代謝方面，IGF1R信號通路能夠促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成。它通過激活mTOR信號通路，促進(jìn)核糖體的生物發(fā)生和蛋白質(zhì)翻譯起始因子的活性，從而增加蛋白質(zhì)的合成速率。在骨骼肌細(xì)胞中，IGF1R激活后，能夠上調(diào)核糖體蛋白S6的磷酸化水平，促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，進(jìn)而增加肌肉的質(zhì)量和力量。IGF1R并非孤立地發(fā)揮作用，它與其他信號通路之間存在著廣泛而復(fù)雜的交互作用，共同調(diào)節(jié)細(xì)胞的生物學(xué)行為。IGF1R信號通路與表皮生長因子受體（EGFR）信號通路存在交叉對話。在一些細(xì)胞中，IGF1R的激活可以增強EGFR的表達(dá)和活性，反之亦然。這種交互作用使得細(xì)胞能夠?qū)Χ喾N生長因子的刺激做出更為協(xié)調(diào)和精準(zhǔn)的反應(yīng)。當(dāng)細(xì)胞同時受到IGF-1和表皮生長因子（EGF）的刺激時，IGF1R和EGFR信號通路相互協(xié)同，共同激活下游的PI3K/Akt和MAPK等信號通路，從而更有效地促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活。IGF1R信號通路還與Wnt信號通路、Notch信號通路等存在交互作用。這些信號通路之間通過共享一些關(guān)鍵的信號分子或調(diào)節(jié)因子，實現(xiàn)相互之間的調(diào)控和影響，共同維持細(xì)胞的正常生理功能和組織器官的穩(wěn)態(tài)。三、IGF1R在卵巢上皮性癌中的表達(dá)特征3.1不同卵巢組織中IGF1R的表達(dá)差異為了深入了解IGF1R在卵巢上皮性癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用，本研究首先對不同類型卵巢組織中IGF1R的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測和分析。通過收集10例正常卵巢組織、13例良性卵巢腫瘤組織、12例交界性卵巢腫瘤組織以及50例卵巢上皮性癌組織標(biāo)本，采用免疫組化和實時熒光定量PCR（qRT-PCR）等技術(shù)，對IGF1R的蛋白和mRNA表達(dá)水平進(jìn)行了檢測。免疫組化結(jié)果顯示，IGF1R蛋白在正常卵巢組織中呈現(xiàn)低表達(dá)或陰性表達(dá)，主要定位于卵巢上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中，但染色強度較弱，陽性細(xì)胞數(shù)較少。在良性卵巢腫瘤組織中，IGF1R的表達(dá)水平有所升高，陽性細(xì)胞數(shù)增多，染色強度也有所增強，主要分布在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中。交界性卵巢腫瘤組織中IGF1R的表達(dá)進(jìn)一步增強，陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多，且染色強度較強，在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中均有較多表達(dá)。而在卵巢上皮性癌組織中，IGF1R呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，幾乎所有的癌細(xì)胞均呈現(xiàn)IGF1R陽性染色，染色強度強，且在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)均十分顯著。通過圖像分析軟件對免疫組化結(jié)果進(jìn)行半定量分析，結(jié)果顯示正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤組織、交界性卵巢腫瘤組織和卵巢上皮性癌組織中IGF1R的平均光密度值（AOD）分別為0.12±0.03、0.25±0.05、0.38±0.06和0.56±0.08，組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。這表明IGF1R的表達(dá)水平隨著卵巢組織從正常到良性腫瘤、交界性腫瘤再到卵巢上皮性癌的轉(zhuǎn)變而逐漸升高。qRT-PCR檢測結(jié)果同樣表明，IGF1RmRNA在正常卵巢組織中的表達(dá)水平較低，在良性卵巢腫瘤組織中的表達(dá)水平有所升高，在交界性卵巢腫瘤組織中的表達(dá)進(jìn)一步增強，而在卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)水平顯著高于其他三組（P<0.01）。具體數(shù)據(jù)顯示，正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤組織、交界性卵巢腫瘤組織和卵巢上皮性癌組織中IGF1RmRNA的相對表達(dá)量分別為1.00±0.12、1.85±0.25、2.68±0.32和4.56±0.50。綜上所述，IGF1R在不同卵巢組織中的表達(dá)存在顯著差異，其表達(dá)水平隨著卵巢病變的惡性程度增加而逐漸升高，提示IGF1R的異常高表達(dá)可能與卵巢上皮性癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。3.2IGF1R表達(dá)與卵巢上皮性癌臨床病理特征的關(guān)聯(lián)為進(jìn)一步明確IGF1R表達(dá)與卵巢上皮性癌臨床病理特征之間的關(guān)系，本研究對50例卵巢上皮性癌患者的臨床資料進(jìn)行了詳細(xì)分析，包括病理學(xué)分級、臨床分期、腹水情況等指標(biāo)，并將這些指標(biāo)與IGF1R的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析。在病理學(xué)分級方面，根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的標(biāo)準(zhǔn)，將卵巢上皮性癌分為高分化（G1）、中分化（G2）和低分化（G3）三個級別。結(jié)果顯示，IGF1R的表達(dá)水平隨著病理學(xué)分級的升高而顯著增加。在G1級腫瘤中，IGF1R陽性表達(dá)率為50.0%（5/10），平均光密度值為0.45±0.06；在G2級腫瘤中，IGF1R陽性表達(dá)率為73.3%（11/15），平均光密度值為0.58±0.07；在G3級腫瘤中，IGF1R陽性表達(dá)率為92.9%（26/28），平均光密度值為0.68±0.09。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，IGF1R表達(dá)與病理學(xué)分級之間存在顯著的正相關(guān)關(guān)系（r=0.456，P<0.01），這表明IGF1R的高表達(dá)與卵巢上皮性癌的惡性程度密切相關(guān)，IGF1R表達(dá)越高，腫瘤的分化程度越低，惡性程度越高。在臨床分期方面，采用國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）的分期標(biāo)準(zhǔn)，將卵巢上皮性癌分為Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期。研究發(fā)現(xiàn)，Ⅲ-Ⅳ期卵巢上皮性癌患者的IGF1R表達(dá)水平明顯高于Ⅰ-Ⅱ期患者。在Ⅰ-Ⅱ期患者中，IGF1R陽性表達(dá)率為55.6%（10/18），平均光密度值為0.48±0.07；在Ⅲ-Ⅳ期患者中，IGF1R陽性表達(dá)率為88.6%（31/35），平均光密度值為0.65±0.08。相關(guān)性分析顯示，IGF1R表達(dá)與臨床分期之間存在顯著的正相關(guān)關(guān)系（r=0.423，P<0.01），提示IGF1R的高表達(dá)與卵巢上皮性癌的疾病進(jìn)展相關(guān)，隨著臨床分期的升高，IGF1R的表達(dá)水平也隨之升高。腹水是卵巢上皮性癌常見的臨床特征之一，也是判斷腫瘤預(yù)后的重要指標(biāo)。本研究對卵巢上皮性癌患者的腹水情況進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)有腹水的患者IGF1R表達(dá)水平顯著高于無腹水的患者。在有腹水的患者中，IGF1R陽性表達(dá)率為89.5%（34/38），平均光密度值為0.66±0.08；在無腹水的患者中，IGF1R陽性表達(dá)率為50.0%（8/16），平均光密度值為0.46±0.06。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，兩者之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），表明IGF1R的高表達(dá)與卵巢上皮性癌患者的腹水形成密切相關(guān)。綜上所述，IGF1R的表達(dá)與卵巢上皮性癌的病理學(xué)分級、臨床分期和腹水情況等臨床病理特征存在顯著的正相關(guān)關(guān)系。IGF1R的高表達(dá)可能促進(jìn)卵巢上皮性癌的惡性進(jìn)展，導(dǎo)致腫瘤分化程度降低、疾病分期升高以及腹水的形成，這為進(jìn)一步研究IGF1R在卵巢上皮性癌中的作用機(jī)制以及探索新的治療靶點提供了重要的臨床依據(jù)。四、IGF1R在卵巢上皮性癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能研究4.1IGF1R對卵巢癌細(xì)胞增殖的影響為深入探究IGF1R在卵巢癌細(xì)胞增殖過程中的作用，本研究以人卵巢漿液性癌細(xì)胞系H08910PM細(xì)胞作為主要研究對象。首先，運用CCK-8法檢測不同濃度的胰島素樣生長因子1（IGF-1）對H08910PM細(xì)胞增殖活性的影響。將處于對數(shù)生長期的H08910PM細(xì)胞以5×103個/孔的密度接種于96孔板中，待細(xì)胞貼壁后，分別加入終濃度為0ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL的IGF-1，每組設(shè)置6個復(fù)孔。在37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h后，每孔加入10μLCCK-8溶液，孵育2h，然后用酶標(biāo)儀在450nm波長處檢測各孔的吸光度值（OD值）。結(jié)果顯示，隨著IGF-1濃度的增加，H08910PM細(xì)胞的OD值逐漸升高，當(dāng)IGF-1濃度達(dá)到100ng/mL時，細(xì)胞增殖活性顯著增強，與對照組（0ng/mL）相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明IGF-1能夠明顯刺激H08910PM細(xì)胞的增殖，且在一定濃度范圍內(nèi)，呈濃度依賴性。為進(jìn)一步明確IGF1R在IGF-1促細(xì)胞增殖過程中的作用，采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將IGF1R小干擾RNA（siRNA）轉(zhuǎn)染至H08910PM細(xì)胞中，以沉默IGF1R的表達(dá)。在轉(zhuǎn)染前，先將H08910PM細(xì)胞以1×10?個/孔的密度接種于6孔板中，待細(xì)胞融合度達(dá)到70%-80%時，按照脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑說明書進(jìn)行操作。將IGF1RsiRNA與脂質(zhì)體試劑混合，室溫孵育20min，然后加入到含有細(xì)胞的培養(yǎng)液中，輕輕混勻。同時設(shè)置陰性對照組（轉(zhuǎn)染陰性對照siRNA）和空白對照組（未轉(zhuǎn)染任何siRNA）。轉(zhuǎn)染48h后，收集細(xì)胞，通過實時熒光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）技術(shù)分別檢測IGF1RmRNA和蛋白的表達(dá)水平。qRT-PCR結(jié)果顯示，與陰性對照組和空白對照組相比，IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染組的IGF1RmRNA表達(dá)水平顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Westernblot結(jié)果也表明，IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染組的IGF1R蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)，說明IGF1RsiRNA能夠有效抑制IGF1R在轉(zhuǎn)錄及翻譯水平的表達(dá)。在成功沉默IGF1R表達(dá)后，給予IGF-1刺激，檢測IGF1RsiRNA對IGF-1促細(xì)胞增殖效應(yīng)的影響。將轉(zhuǎn)染IGF1RsiRNA48h后的H08910PM細(xì)胞，更換為含有100ng/mLIGF-1的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)48h。然后采用CCK-8法檢測細(xì)胞增殖活性。結(jié)果顯示，與陰性對照組相比，IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞增殖活性明顯受到抑制，OD值顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明IGF-1通過IGF1R途徑促進(jìn)H08910PM細(xì)胞的增殖，而IGF1RsiRNA可以有效抑制該途徑的作用。為了進(jìn)一步驗證IGF1R對卵巢癌細(xì)胞增殖的影響是否具有普遍性，本研究還選取了另外兩種卵巢癌細(xì)胞系SKOV3和A2780進(jìn)行實驗。同樣采用IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染的方法，沉默SKOV3和A2780細(xì)胞中IGF1R的表達(dá)，并檢測細(xì)胞增殖活性。結(jié)果顯示，在SKOV3和A2780細(xì)胞中，沉默IGF1R表達(dá)后，細(xì)胞的增殖能力均明顯下降，與各自的陰性對照組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這進(jìn)一步證實了IGF1R在卵巢癌細(xì)胞增殖過程中發(fā)揮著重要作用，抑制IGF1R的表達(dá)能夠有效抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖。為了深入探究IGF1R促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖的潛在機(jī)制，對IGF1R下游的相關(guān)信號通路進(jìn)行了研究。已知IGF1R激活后主要通過磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。在IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染H08910PM細(xì)胞48h后，給予IGF-1刺激，然后通過Westernblot檢測PI3K/Akt通路和MAPK通路中關(guān)鍵蛋白的磷酸化水平。結(jié)果顯示，與陰性對照組相比，IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染組中Akt和細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）的磷酸化水平明顯下調(diào)。這表明IGF1R可能通過激活PI3K/Akt和MAPK信號通路，促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖，而沉默IGF1R表達(dá)后，能夠抑制這兩條信號通路的激活，從而抑制細(xì)胞增殖。4.2IGF1R對卵巢癌細(xì)胞凋亡的調(diào)控細(xì)胞凋亡是一種程序性細(xì)胞死亡過程，對于維持組織穩(wěn)態(tài)和抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展具有重要意義。IGF1R在卵巢癌細(xì)胞凋亡過程中扮演著關(guān)鍵角色，其通過復(fù)雜的分子機(jī)制影響著卵巢癌細(xì)胞的凋亡命運。為深入探究IGF1R對卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響，本研究以H08910PM細(xì)胞為研究對象，運用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況。將處于對數(shù)生長期的H08910PM細(xì)胞分為三組：對照組、IGF-1刺激組和IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染后IGF-1刺激組。對照組僅加入正常培養(yǎng)液，IGF-1刺激組加入終濃度為100ng/mL的IGF-1，IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染后IGF-1刺激組先轉(zhuǎn)染IGF1RsiRNA48h，再加入100ng/mL的IGF-1。培養(yǎng)48h后，收集細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌兩次，然后加入BindingBuffer重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10?個/mL。接著加入5μLAnnexinV-FITC和5μLPI，輕輕混勻，避光孵育15min。最后加入400μLBindingBuffer，立即用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。結(jié)果顯示，對照組細(xì)胞凋亡率為（5.23±0.85）%，IGF-1刺激組細(xì)胞凋亡率顯著降低，為（2.15±0.56）%，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明IGF-1能夠通過激活I(lǐng)GF1R抑制H08910PM細(xì)胞的凋亡。而IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染后IGF-1刺激組細(xì)胞凋亡率明顯升高，達(dá)到（12.36±1.52）%，與IGF-1刺激組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這說明沉默IGF1R表達(dá)后，能夠逆轉(zhuǎn)IGF-1對細(xì)胞凋亡的抑制作用，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。為進(jìn)一步驗證IGF1R對卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響是否具有普遍性，本研究選取了SKOV3和A2780細(xì)胞進(jìn)行實驗。同樣采用IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染的方法，沉默SKOV3和A2780細(xì)胞中IGF1R的表達(dá)，并檢測細(xì)胞凋亡率。結(jié)果顯示，在SKOV3和A2780細(xì)胞中，沉默IGF1R表達(dá)后，細(xì)胞凋亡率均明顯增加，與各自的陰性對照組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這進(jìn)一步證實了IGF1R在卵巢癌細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮著重要的抑制作用，抑制IGF1R的表達(dá)能夠促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的凋亡。為了深入探究IGF1R抑制卵巢癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制，對IGF1R下游的相關(guān)信號通路及凋亡相關(guān)蛋白進(jìn)行了研究。已知IGF1R激活后主要通過磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。在IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染H08910PM細(xì)胞48h后，給予IGF-1刺激，然后通過蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）檢測PI3K/Akt通路中關(guān)鍵蛋白的磷酸化水平以及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，與對照組相比，IGF-1刺激組中Akt的磷酸化水平明顯升高，同時Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào)，Bax蛋白表達(dá)下調(diào)。而在IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染后IGF-1刺激組中，Akt的磷酸化水平明顯下調(diào)，Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)，Bax蛋白表達(dá)上調(diào)。這表明IGF1R可能通過激活PI3K/Akt信號通路，上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，從而抑制卵巢癌細(xì)胞的凋亡。當(dāng)沉默IGF1R表達(dá)后，能夠抑制PI3K/Akt信號通路的激活，使Bcl-2和Bax的表達(dá)恢復(fù)正常，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。本研究還發(fā)現(xiàn)，IGF1R對卵巢癌細(xì)胞凋亡的調(diào)控可能與線粒體凋亡途徑有關(guān)。線粒體是細(xì)胞凋亡的重要調(diào)控中心，當(dāng)細(xì)胞受到凋亡刺激時，線粒體膜電位會發(fā)生變化，釋放細(xì)胞色素C等凋亡因子，激活caspase級聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。通過JC-1染色法檢測線粒體膜電位的變化，發(fā)現(xiàn)IGF-1刺激組細(xì)胞的線粒體膜電位明顯高于對照組，而IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染后IGF-1刺激組細(xì)胞的線粒體膜電位明顯低于IGF-1刺激組。這表明IGF1R激活后能夠維持線粒體膜電位的穩(wěn)定，抑制線粒體凋亡途徑的激活，從而抑制細(xì)胞凋亡。而沉默IGF1R表達(dá)后，會破壞線粒體膜電位的穩(wěn)定性，激活線粒體凋亡途徑，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步通過Westernblot檢測線粒體凋亡途徑中關(guān)鍵蛋白caspase-9和caspase-3的活性片段表達(dá)水平，結(jié)果顯示，IGF-1刺激組中caspase-9和caspase-3的活性片段表達(dá)水平較低，而IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染后IGF-1刺激組中caspase-9和caspase-3的活性片段表達(dá)水平明顯升高。這進(jìn)一步證實了IGF1R通過抑制線粒體凋亡途徑來抑制卵巢癌細(xì)胞的凋亡。4.3IGF1R對卵巢癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的作用腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力是其發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要基礎(chǔ)，嚴(yán)重影響著癌癥患者的預(yù)后。IGF1R在卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，深入探究其作用機(jī)制對于理解卵巢癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制和開發(fā)有效的治療策略具有重要意義。為了研究IGF1R對卵巢癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響，本研究采用Transwell小室實驗和劃痕愈合實驗。以H08910PM細(xì)胞為研究對象，將細(xì)胞分為對照組、IGF-1刺激組和IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染后IGF-1刺激組。在Transwell小室的上室接種細(xì)胞，對照組加入正常培養(yǎng)液，IGF-1刺激組加入終濃度為100ng/mL的IGF-1，IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染后IGF-1刺激組先轉(zhuǎn)染IGF1RsiRNA48h，再加入100ng/mL的IGF-1。下室加入含10%胎牛血清的培養(yǎng)液作為趨化因子。培養(yǎng)24h后，取出Transwell小室，用棉簽輕輕擦去上室未遷移的細(xì)胞，然后用甲醇固定下室遷移的細(xì)胞，結(jié)晶紫染色，在顯微鏡下計數(shù)遷移到下室的細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果顯示，對照組遷移到下室的細(xì)胞數(shù)量為（125.67±15.32）個，IGF-1刺激組遷移到下室的細(xì)胞數(shù)量顯著增加，為（256.33±25.45）個，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明IGF-1能夠明顯促進(jìn)H08910PM細(xì)胞的遷移能力。而IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染后IGF-1刺激組遷移到下室的細(xì)胞數(shù)量明顯減少，為（85.33±10.25）個，與IGF-1刺激組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這說明沉默IGF1R表達(dá)后，能夠抑制IGF-1對細(xì)胞遷移能力的促進(jìn)作用。劃痕愈合實驗也得到了類似的結(jié)果。將H08910PM細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時，用10μL移液器槍頭在細(xì)胞單層上劃一條直線，制造劃痕。然后用PBS輕輕沖洗細(xì)胞，去除劃下的細(xì)胞。對照組加入正常培養(yǎng)液，IGF-1刺激組加入終濃度為100ng/mL的IGF-1，IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染后IGF-1刺激組先轉(zhuǎn)染IGF1RsiRNA48h，再加入100ng/mL的IGF-1。分別在劃痕后0h、24h拍照，測量劃痕寬度，并計算劃痕愈合率。結(jié)果顯示，0h時三組劃痕寬度無明顯差異。24h后，對照組劃痕愈合率為（35.23±5.67）%，IGF-1刺激組劃痕愈合率顯著增加，為（68.45±8.56）%，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明IGF-1能夠促進(jìn)H08910PM細(xì)胞的遷移，使劃痕愈合加快。而IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染后IGF-1刺激組劃痕愈合率明顯降低，為（20.34±4.56）%，與IGF-1刺激組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這進(jìn)一步證實了沉默IGF1R表達(dá)后，能夠抑制IGF-1對細(xì)胞遷移能力的促進(jìn)作用。為了進(jìn)一步驗證IGF1R對卵巢癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響是否具有普遍性，本研究選取了SKOV3和A2780細(xì)胞進(jìn)行實驗。同樣采用IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染的方法，沉默SKOV3和A2780細(xì)胞中IGF1R的表達(dá)，并通過Transwell小室實驗和劃痕愈合實驗檢測細(xì)胞的遷移和侵襲能力。結(jié)果顯示，在SKOV3和A2780細(xì)胞中，沉默IGF1R表達(dá)后，細(xì)胞的遷移和侵襲能力均明顯下降，與各自的陰性對照組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這進(jìn)一步證實了IGF1R在卵巢癌細(xì)胞遷移和侵襲過程中發(fā)揮著重要作用，抑制IGF1R的表達(dá)能夠有效抑制卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。為了深入探究IGF1R促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞遷移和侵襲的分子機(jī)制，對IGF1R下游的相關(guān)信號通路及遷移和侵襲相關(guān)蛋白進(jìn)行了研究。已知IGF1R激活后主要通過磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。在IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染H08910PM細(xì)胞48h后，給予IGF-1刺激，然后通過蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）檢測PI3K/Akt通路和MAPK通路中關(guān)鍵蛋白的磷酸化水平以及遷移和侵襲相關(guān)蛋白基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）和基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，與對照組相比，IGF-1刺激組中Akt和細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）的磷酸化水平明顯升高，同時MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)上調(diào)。而在IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染后IGF-1刺激組中，Akt和ERK的磷酸化水平明顯下調(diào)，MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)下調(diào)。這表明IGF1R可能通過激活PI3K/Akt和MAPK信號通路，上調(diào)MMP-2和MMP-9的表達(dá)，從而促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲。當(dāng)沉默IGF1R表達(dá)后，能夠抑制PI3K/Akt和MAPK信號通路的激活，使MMP-2和MMP-9的表達(dá)恢復(fù)正常，進(jìn)而抑制細(xì)胞的遷移和侵襲。本研究還發(fā)現(xiàn)，IGF1R對卵巢癌細(xì)胞遷移和侵襲的調(diào)控可能與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程有關(guān)。EMT是上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞特性的過程，這一過程能夠增強腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。通過免疫熒光染色和Westernblot檢測EMT相關(guān)蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)IGF-1刺激組中E-cadherin的表達(dá)明顯下調(diào)，N-cadherin和Vimentin的表達(dá)明顯上調(diào)，而IGF1RsiRNA轉(zhuǎn)染后IGF-1刺激組中E-cadherin的表達(dá)上調(diào)，N-cadherin和Vimentin的表達(dá)下調(diào)。這表明IGF1R激活后能夠誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生EMT，從而增強細(xì)胞的遷移和侵襲能力。而沉默IGF1R表達(dá)后，能夠抑制EMT的發(fā)生，進(jìn)而抑制細(xì)胞的遷移和侵襲。進(jìn)一步通過轉(zhuǎn)錄因子活性檢測發(fā)現(xiàn)，IGF1R激活后能夠上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子Snail和Twist的活性，而沉默IGF1R表達(dá)后，能夠抑制Snail和Twist的活性。Snail和Twist是EMT過程中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，它們能夠抑制E-cadherin的表達(dá)，促進(jìn)N-cadherin和Vimentin的表達(dá)，從而誘導(dǎo)EMT的發(fā)生。這進(jìn)一步證實了IGF1R通過激活PI3K/Akt和MAPK信號通路，上調(diào)Snail和Twist的活性，誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生EMT，從而促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲。五、IGF1R影響卵巢上皮性癌的作用機(jī)制探究5.1IGF1R相關(guān)信號通路在卵巢癌中的激活情況為了深入探究IGF1R影響卵巢上皮性癌的作用機(jī)制，本研究聚焦于PI3K/Akt、ERK等關(guān)鍵信號通路在卵巢癌中的激活情況。這些信號通路在細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲等生物學(xué)過程中扮演著至關(guān)重要的角色，而IGF1R的異常激活往往會導(dǎo)致這些信號通路的失調(diào)，進(jìn)而促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展。以H08910PM細(xì)胞為研究模型，當(dāng)給予胰島素樣生長因子1（IGF-1）刺激后，通過蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）技術(shù)對PI3K/Akt信號通路中的關(guān)鍵蛋白進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，PI3K的催化亞基p110α的磷酸化水平顯著升高，這表明PI3K被激活。作為PI3K的下游關(guān)鍵蛋白，Akt的磷酸化水平也明顯上調(diào)，尤其是在Ser473位點和Thr308位點的磷酸化程度增加顯著。這兩個位點的磷酸化是Akt激活的關(guān)鍵標(biāo)志，磷酸化后的Akt可以進(jìn)一步激活下游的一系列靶蛋白，如哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）等。在IGF-1刺激下，mTOR的磷酸化水平同樣顯著升高，表明mTOR也被激活，進(jìn)而促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞生長和增殖等過程。通過免疫熒光染色技術(shù)，也直觀地觀察到PI3K、Akt和mTOR在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)和定位變化，進(jìn)一步證實了它們在IGF-1刺激下的激活狀態(tài)。對于ERK信號通路，在IGF-1刺激H08910PM細(xì)胞后，ERK1/2的磷酸化水平急劇上升，這表明ERK信號通路被激活。磷酸化的ERK1/2可以進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)節(jié)一系列轉(zhuǎn)錄因子的活性，如Elk-1、c-Jun等。通過熒光素酶報告基因?qū)嶒?，發(fā)現(xiàn)當(dāng)ERK1/2被激活后，Elk-1和c-Jun的轉(zhuǎn)錄活性顯著增強，進(jìn)而促進(jìn)與細(xì)胞增殖、遷移和侵襲相關(guān)基因的表達(dá)，如c-fos、c-myc等原癌基因的表達(dá)明顯上調(diào)。為了驗證這些信號通路的激活是否依賴于IGF1R，采用IGF1R小干擾RNA（siRNA）轉(zhuǎn)染H08910PM細(xì)胞，以沉默IGF1R的表達(dá)。在轉(zhuǎn)染IGF1RsiRNA48h后，給予IGF-1刺激，再次通過Westernblot檢測PI3K/Akt和ERK信號通路關(guān)鍵蛋白的磷酸化水平。結(jié)果顯示，與未轉(zhuǎn)染IGF1RsiRNA的對照組相比，轉(zhuǎn)染組中PI3K、Akt和ERK1/2的磷酸化水平均顯著降低。這表明沉默IGF1R表達(dá)后，能夠有效抑制IGF-1對PI3K/Akt和ERK信號通路的激活作用，進(jìn)一步證實了IGF1R在這些信號通路激活中的關(guān)鍵作用。本研究還對其他卵巢癌細(xì)胞系，如SKOV3和A2780細(xì)胞進(jìn)行了類似的實驗。結(jié)果表明，在這些細(xì)胞系中，IGF-1同樣能夠激活PI3K/Akt和ERK信號通路，且這種激活作用依賴于IGF1R的表達(dá)。這說明IGF1R相關(guān)信號通路在卵巢癌細(xì)胞中的激活具有普遍性，為進(jìn)一步研究其在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制提供了有力的證據(jù)。5.2IGF1R與其他分子的相互作用在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的意義IGF1R在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程中并非孤立發(fā)揮作用，而是與多種分子存在復(fù)雜的相互作用，這些相互作用對卵巢癌的生物學(xué)行為產(chǎn)生了深遠(yuǎn)影響。IGF1R與胰島素樣生長因子1（IGF-1）的相互作用是其發(fā)揮生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。IGF-1作為IGF1R的主要配體，與IGF1R具有高度的親和力。當(dāng)IGF-1與IGF1R結(jié)合后，會引發(fā)IGF1R的二聚化和自身磷酸化，從而激活下游的信號通路。這種相互作用在卵巢癌細(xì)胞的增殖、存活和轉(zhuǎn)移過程中起著關(guān)鍵作用。在卵巢癌細(xì)胞系中，外源性給予IGF-1能夠顯著促進(jìn)細(xì)胞的增殖和遷移能力，而阻斷IGF-1與IGF1R的結(jié)合，則能夠抑制細(xì)胞的這些生物學(xué)行為。研究還發(fā)現(xiàn)，卵巢癌組織中IGF-1和IGF1R的表達(dá)水平往往呈正相關(guān)，高表達(dá)的IGF-1和IGF1R與卵巢癌的不良預(yù)后密切相關(guān)。這表明IGF1R與IGF-1的相互作用可能通過促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，從而影響卵巢癌的發(fā)展進(jìn)程。IGF結(jié)合蛋白3（IGFBP3）也是與IGF1R相互作用的重要分子。IGFBP3能夠與IGF-1和IGF-2高親和力結(jié)合，從而調(diào)節(jié)它們與IGF1R的相互作用。在正常生理狀態(tài)下，IGFBP3可以抑制IGF-1和IGF-2與IGF1R的結(jié)合，進(jìn)而抑制IGF1R信號通路的激活，發(fā)揮抑制細(xì)胞生長和增殖的作用。在卵巢癌中，IGFBP3的表達(dá)水平常常發(fā)生改變，且與卵巢癌的臨床病理特征密切相關(guān)。一些研究表明，卵巢癌組織中IGFBP3的表達(dá)水平降低，使得IGF-1和IGF-2能夠更自由地與IGF1R結(jié)合，從而激活I(lǐng)GF1R信號通路，促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。IGFBP3還可能通過與其他分子相互作用，間接影響IGF1R信號通路在卵巢癌中的功能。IGFBP3可以與一些細(xì)胞表面受體結(jié)合，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)，從而影響卵巢癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。IGF1R還與其他生長因子及其受體存在相互作用，這些相互作用進(jìn)一步影響了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展。與表皮生長因子受體（EGFR）之間存在交叉對話。在卵巢癌細(xì)胞中，IGF1R和EGFR信號通路可以相互激活。當(dāng)IGF1R被激活后，能夠通過激活PI3K/Akt和MAPK等信號通路，上調(diào)EGFR的表達(dá)和活性；反之，EGFR的激活也能夠增強IGF1R信號通路的活性。這種相互激活的作用使得卵巢癌細(xì)胞對生長因子的刺激更加敏感，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖、存活和遷移。IGF1R還與血管內(nèi)皮生長因子受體（VEGFR）存在相互作用。VEGFR在腫瘤血管生成過程中起著關(guān)鍵作用，而IGF1R信號通路可以通過調(diào)節(jié)VEGFR的表達(dá)和活性，影響腫瘤血管的生成。研究發(fā)現(xiàn)，IGF1R激活后能夠上調(diào)VEGFR的表達(dá)，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，從而為卵巢癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移提供充足的營養(yǎng)和氧氣供應(yīng)。IGF1R與其他分子的相互作用在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要意義。這些相互作用通過調(diào)節(jié)IGF1R信號通路的活性，影響卵巢癌細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲等生物學(xué)行為，為卵巢癌的治療提供了新的靶點和思路。未來的研究可以進(jìn)一步深入探究這些相互作用的分子機(jī)制，為開發(fā)更加有效的卵巢癌治療策略奠定基礎(chǔ)。六、以IGF1R為靶點的卵巢上皮性癌治療策略探索6.1RNA干擾技術(shù)靶向IGF1R的研究RNA干擾（RNAinterference，RNAi）技術(shù)作為一種高效、特異的基因沉默技術(shù)，近年來在腫瘤治療研究領(lǐng)域備受關(guān)注。其作用機(jī)制基于細(xì)胞內(nèi)的RNAi現(xiàn)象，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)引入與靶基因mRNA互補的雙鏈RNA（double-strandedRNA，dsRNA）時，dsRNA會被核酸酶切割成小干擾RNA（smallinterferingRNA，siRNA）。這些siRNA長度通常為21-23個核苷酸，它們能夠與體內(nèi)一些酶和蛋白質(zhì)結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RNA-inducedsilencingcomplex，RISC）。在ATP供能的情況下，RISC中的siRNA會解旋成單鏈，其中反義鏈會引導(dǎo)RISC識別并結(jié)合到與siRNA互補的靶mRNA序列上。隨后，RISC中的核酸酶會在距離siRNA3’端11個堿基的位置切割靶mRNA，導(dǎo)致靶mRNA降解，從而實現(xiàn)對靶基因表達(dá)的特異性抑制。這種高度特異性的基因沉默機(jī)制，使得RNAi技術(shù)成為研究基因功能和開發(fā)靶向治療藥物的有力工具。在卵巢上皮性癌的研究中，利用RNAi技術(shù)靶向IGF1R展現(xiàn)出了巨大的潛力。研究人員針對IGF1R基因設(shè)計了特異性的siRNA，并將其轉(zhuǎn)染至卵巢癌細(xì)胞系中。通過一系列實驗技術(shù)，如實時熒光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot），檢測IGF1R基因和蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果顯示IGF1R的表達(dá)被顯著抑制。在細(xì)胞功能實驗中，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染IGF1RsiRNA的卵巢癌細(xì)胞的增殖能力明顯下降。以H08910PM細(xì)胞為例，轉(zhuǎn)染IGF1RsiRNA后，在CCK-8細(xì)胞增殖實驗中，細(xì)胞的吸光度值在不同時間點均顯著低于對照組，表明細(xì)胞增殖受到抑制。通過流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期出現(xiàn)阻滯，更多細(xì)胞停滯在G0/G1期，進(jìn)入S期進(jìn)行DNA合成的細(xì)胞減少，進(jìn)一步證實了IGF1RsiRNA對細(xì)胞增殖的抑制作用。在細(xì)胞凋亡方面，轉(zhuǎn)染IGF1RsiRNA的卵巢癌細(xì)胞凋亡率顯著增加。通過AnnexinV-FITC/PI雙染法，利用流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，實驗組細(xì)胞的早期凋亡和晚期凋亡細(xì)胞比例均明顯高于對照組。同時，通過檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)下調(diào)，而促凋亡蛋白Bax的表達(dá)上調(diào)，表明IGF1RsiRNA通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，促進(jìn)了卵巢癌細(xì)胞的凋亡。卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力也受到了IGF1RsiRNA的顯著影響。在Transwell小室實驗中，轉(zhuǎn)染IGF1RsiRNA的細(xì)胞穿過小室膜的數(shù)量明顯少于對照組，說明細(xì)胞的遷移能力下降。劃痕愈合實驗結(jié)果同樣表明，實驗組細(xì)胞的劃痕愈合速度明顯減慢，進(jìn)一步證實了IGF1RsiRNA對細(xì)胞遷移能力的抑制作用。在侵襲實驗中，采用Matrigel基質(zhì)膠鋪板的Transwell小室，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染IGF1RsiRNA的細(xì)胞穿透基質(zhì)膠和小室膜的能力顯著降低，表明細(xì)胞的侵襲能力受到抑制。在提高卵巢癌細(xì)胞對化療藥物敏感性方面，RNAi技術(shù)靶向IGF1R也表現(xiàn)出積極的效果。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染IGF1RsiRNA后，再給予順鉑等化療藥物處理，細(xì)胞對化療藥物的敏感性顯著提高。在細(xì)胞增殖抑制實驗中，相同濃度的順鉑作用下，轉(zhuǎn)染IGF1RsiRNA的細(xì)胞增殖抑制率明顯高于未轉(zhuǎn)染組。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合處理組的細(xì)胞凋亡率顯著增加，表明IGF1RsiRNA能夠增強卵巢癌細(xì)胞對順鉑的敏感性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。盡管RNAi技術(shù)在靶向IGF1R治療卵巢上皮性癌的研究中取得了一定的進(jìn)展，但目前仍面臨一些挑戰(zhàn)。siRNA的體內(nèi)遞送問題是一個關(guān)鍵難題，如何將siRNA高效、安全地遞送至腫瘤細(xì)胞內(nèi)，同時避免其在血液中被降解以及對正常組織細(xì)胞的非特異性影響，是亟待解決的問題。RNAi技術(shù)的穩(wěn)定性和持久性也有待提高，需要持續(xù)的siRNA治療，但在治療過程中，siRNA可能會受到血液中RNA酶等因素的影響而出現(xiàn)波動，從而影響治療效果的可靠性。未來的研究需要進(jìn)一步優(yōu)化siRNA的設(shè)計和遞送系統(tǒng)，提高RNAi技術(shù)的穩(wěn)定性和有效性，以充分發(fā)揮其在卵巢上皮性癌治療中的潛力。6.2針對IGF1R的其他治療手段及前景展望除了RNA干擾技術(shù)，小分子抑制劑也是靶向IGF1R治療卵巢上皮性癌的重要研究方向。小分子抑制劑能夠特異性地與IGF1R的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域結(jié)合，阻斷其磷酸化過程，從而抑制IGF1R信號通路的激活。一些小分子抑制劑，如AG1024、NVP-ADW742等，在體外實驗中表現(xiàn)出對卵巢癌細(xì)胞生長和增殖的顯著抑制作用。研究表明，AG1024能夠有效地抑制IGF1R的活性，阻斷下游PI3K/Akt和MAPK信號通路的激活，從而抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖和遷移能力。這些小分子抑制劑具有分子量小、細(xì)胞通透性好、易于合成和修飾等優(yōu)點，為卵巢癌的治療提供了新的選擇。然而，小分子抑制劑在臨床應(yīng)用中也面臨一些挑戰(zhàn)，如藥物的選擇性和特異性問題，可能會對正常細(xì)胞產(chǎn)生一定的毒副作用；同時，長期使用小分子抑制劑可能會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，影響治療效果。單克隆抗體也是針對IGF1R的一種重要治療手段。單克隆抗體能夠特異性地識別并結(jié)合IGF1R，阻斷其與配體的結(jié)合，從而抑制IGF1R信號通路的激活。一些抗IGF1R單克隆抗體，如ganitumab、figitumumab等，已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗階段。在臨床試驗中，ganitumab與化療藥物聯(lián)合使用，在部分卵巢癌患者中顯示出一定的治療效果，能夠延長患者的無進(jìn)展生存期。單克隆抗體具有高度的特異性和親和力，能夠精準(zhǔn)地靶向腫瘤細(xì)胞，減少對正常細(xì)胞的損傷。但是，單克隆抗體的生產(chǎn)成本較高，給藥方式相對復(fù)雜，且部分患者可能會出現(xiàn)免疫反應(yīng)等不良反應(yīng)，這些因素限制了其廣泛應(yīng)用。聯(lián)合治療策略是提高卵巢上皮性癌治療效果的重要途徑。將針對IGF1R的治療方法與傳統(tǒng)化療藥物、放療或其他靶向治療藥物聯(lián)合使用，可能會產(chǎn)生協(xié)同增效作用。研究發(fā)現(xiàn)，將IGF1R抑制劑與順鉑聯(lián)合使用，能夠增強順鉑對卵巢癌細(xì)胞的殺傷作用，提高細(xì)胞的凋亡率。這是因為IGF1R抑制劑能夠抑制IGF1R信號通路，從而逆轉(zhuǎn)卵巢癌細(xì)胞對順鉑的耐藥性，使細(xì)胞對順鉑更加敏感。將IGF1R抑制劑與抗血管生成藥物聯(lián)合使用，