CCSXXXXXXXXDB51XXXX-XX-XX發(fā)布IDB51/TXXXX—XXXX 2規(guī)范性引用文件 3術語和定義 4防疫要求 5生產(chǎn)環(huán)境質(zhì)量要求 6飼育場所及設施設備 7生產(chǎn)管理 8生產(chǎn)技術要點 9僵蠶的收集、干燥、儲存 10質(zhì)量檢測 5 DB51/TXXXX—XXXX本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由四川省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提提出、歸口并解釋。本文件起草單位：四川省農(nóng)業(yè)科學院蠶業(yè)研究所（四川省農(nóng)業(yè)科學院特種經(jīng)濟動植物研究所）、西南大學、四川國藥天江藥業(yè)有限公司、四川省南充市桃園生物化學研究開發(fā)有限公司、南充盛瑞農(nóng)業(yè)有限公司、四川審元藥業(yè)有限公司。本文件主要起草人：青學剛、李文學、王琳璐、周圍、劉剛、張友洪、肖文福、陳寶瑞、周躍、陳小平、周安蓮、安雎、劉斌彬、尹紅、張文。本文件為首次發(fā)布。DB51/TXXXX—XXXX1中藥材僵蠶人工生產(chǎn)技術規(guī)程本文件規(guī)定了動物源中藥材僵蠶養(yǎng)殖與生產(chǎn)技術規(guī)范，包括防疫規(guī)定，飼育場所及設施設備，生產(chǎn)管理，生產(chǎn)技術要點，僵蠶的收集、干燥、儲存和質(zhì)量檢測等要求。本文件適用于四川省內(nèi)中藥材僵蠶飼育和生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標準GB5084農(nóng)田灌溉水質(zhì)標準GB15618土壤環(huán)境質(zhì)量農(nóng)用地土壤污染風險管控標準（試行）DB51/T849桑蠶小蠶共育技術規(guī)程DB51/T1186大蠶蠶臺飼育技術規(guī)程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1球孢白僵菌Beauveriabassiana（Bals.）Vuillant種子囊菌門的蟲生真菌、也是家蠶的一種病原真菌，分類上屬于真菌界（Kingdomfungi）、雙核肉座菌亞綱（Hypocreomycetidae）、肉座菌目（Hypocreales）蟲草菌科（Cordycipitaceae）、白僵菌屬（Beauveria）。3.2僵蠶BombyxBatryticatus為蠶蛾科昆蟲家蠶(BombyxmoriL.)5齡的幼蟲感染白僵菌而致死的干燥體。3.3含孢量conidiacontent每克白僵菌孢子粉中所含的球孢白僵菌分生孢子的個數(shù)。3.4乳化劑emulsifier用于輔助球孢白僵菌分生孢子粉分散于水中的試劑，常用吐溫80。DB51/TXXXX—XXXX23.5僵死率mortalityrate家蠶在吐絲結繭前通過球孢白僵菌感染引發(fā)白僵病死亡的數(shù)量占接種家蠶總量的比值。3.6發(fā)僵室rigidityroom用于家蠶感染球孢白僵菌死后另行放置的場所，等待白僵菌菌絲突破家蠶體壁并形成分生孢子覆蓋蠶體。4防疫要求4.1僵蠶生產(chǎn)基地建設僵蠶生產(chǎn)基地應遠離種繭育、絲繭育養(yǎng)蠶區(qū)域5km以上，且避免共用桑園；4.2應配備專業(yè)從事僵蠶生產(chǎn)的工作人員，不與普通養(yǎng)蠶工作人員交叉。未接種白僵菌蠶與接種白僵菌蠶交叉飼育期間，養(yǎng)蠶區(qū)域和工作人員應嚴格分開4.3條示例僵蠶生產(chǎn)使用后的蠶具應及時浸泡消毒，禁止用于種繭育、絲繭育家蠶飼育。4.4其它防疫措施參照當?shù)胤酪咭?guī)定進行。5生產(chǎn)環(huán)境質(zhì)量要求空氣質(zhì)量空氣質(zhì)量應符合GB3095中的二級標準要求。土壤質(zhì)量土壤質(zhì)量應符合GB15618中的二級標準要求。灌溉水質(zhì)量灌溉水質(zhì)量應符合GB5084中的二級標準要求。6飼育場所及設施設備6.1飼育場所選擇6.1.1選址要求選擇光照和水源充足、沒有工業(yè)等污染的區(qū)域，桑園建設集中連片，且遠離種繭育、絲繭育桑園5km以上，具備完善的道路系統(tǒng)和排灌系統(tǒng)，統(tǒng)一規(guī)劃生產(chǎn)基地，具有一定規(guī)模，統(tǒng)一肥料、農(nóng)藥和技術管理的條件。生產(chǎn)基地至少完成兩個生產(chǎn)周期僵蠶生產(chǎn)，并有兩個收獲期僵蠶質(zhì)量檢測數(shù)據(jù)且符合質(zhì)量標準。6.1.2小蠶共育室小蠶全部要求共育，每共育50張小蠶，需配備30m2帶天花板的小蠶共育室，其中：層高2.8m的飼育室16m2，貯桑室5m2，操作間9m2，要求南北朝向、地面水平、墻壁光滑、有對流窗，飼育室具有環(huán)境調(diào)節(jié)功能，且配備消毒池2m3，有蠶沙池2m3，蠶沙池離蠶房30m以上。6.1.3大蠶室DB51/TXXXX—XXXX3每50張大蠶，需配備100m2以上大蠶室，配備蠶臺蠶架，可飼養(yǎng)大蠶面積達2000m2以上，蠶房通風換氣條件良好，交通便利，與小蠶共育室有一定距離，不影響周圍其他農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。6.1.4發(fā)僵室每50張僵蠶，要求配備100m2以上發(fā)僵室，可將采收僵蠶攤開平鋪，配置調(diào)節(jié)溫濕度設備，便于消毒，且遠離桑園和蠶房。6.1.5儲藏室每50張僵蠶需配備100m2以上儲藏室，儲藏室要求低溫、干燥，配置可調(diào)控溫濕度的設備。7生產(chǎn)管理7.1生產(chǎn)基地應具備現(xiàn)場指導人員、監(jiān)督管理人員，并建立生產(chǎn)檔案。7.2應生產(chǎn)檔案應包含以下內(nèi)容：蠶品種、菌種、生產(chǎn)人員、消毒、接種時間和接種濃度等生產(chǎn)過程關鍵操作步驟及操作人員。7.3生產(chǎn)檔案及相關文件應妥善保管，對于每個批次的養(yǎng)殖全過程信息至少保存3年。8生產(chǎn)技術要點8.1蠶品種選擇根據(jù)飼育季節(jié)，選擇僵蠶專用蠶品種或當?shù)爻Ｓ脗€體較大的家蠶品種。8.2菌種選擇選用菌種應以僵死率為標準，選擇家蠶接種后120h~144h僵死率達到95%以上的菌種，不得使用來源不明的白僵菌菌種。8.31齡~5齡蠶飼育1齡~3齡小蠶飼育參照DB51/T849執(zhí)行，4齡~5齡大蠶飼育參照DB51/T1186執(zhí)行。8.4僵蠶生產(chǎn)8.4.1接種時間5齡起蠶24h內(nèi)接種白僵菌。8.4.2接種環(huán)境準備保持接種環(huán)境溫度25℃~27℃,濕度不低于75%，并將該溫度、濕度維持到接種后30min。8.4.3菌液的配置和用量DB51/TXXXX—XXXX4按照球孢白僵菌孢子粉(含孢量≥1×1010個/g，含孢量測定見附錄A)2g~3g、0.1g吐溫80、2000mL水(無菌水或冷開水)的比例配置成菌液，菌液濃度為1×107個／mL~5×107個／mL，配置時，先使用100mL~200mL水將吐溫80混勻形成母液，將母液和孢子粉倒入水中，充分混勻，溫度保持在25℃~27℃,待用。按照每張標準蠶種（25000頭蠶）接種2000mL菌液接種。8.4.4接種采用體表噴霧接種的方法，將1000mL孢子粉液使用噴霧器（噴頭帶罩）將菌液均勻噴灑于家蠶5齡起蠶體表，噴霧器要求霧點細密，噴灑均勻，確保1L孢子粉液將每頭蠶體噴濕，噴后30min正常給桑飼養(yǎng)。8.4.5采收接種后正常飼育，120h~144h后蠶發(fā)病死亡，待有80%僵死蠶后開始采收。8.4.6接種后管理接種后正常飼育，120h~144h后蠶發(fā)病死亡，待有80%僵死蠶后開始采收。9僵蠶的收集、干燥、儲存9.1收集養(yǎng)護蠶體死亡硬化后及時收集，平攤為單層放置于干凈的烘盤中，放入發(fā)僵室，發(fā)僵室溫度保持在25℃~27℃,相對濕度不低于75%，觀察白僵菌突出體表時間，當白僵菌分生孢子布滿蠶體，變白后，準備干燥。9.2干燥將收集養(yǎng)護好的僵蠶放入烘箱烘干，烘干溫度50℃~60℃,烘干至水分含量到13%以下。9.3包裝儲存烘干好的僵蠶收集整理，包裝好后，標注好品名、產(chǎn)地、生產(chǎn)日期、生產(chǎn)批次和重量等信息，儲存在不高于20℃的干燥條件下，避免陽光直射，防蟲、防鼠，存放待售。10質(zhì)量檢測按《中華人民共和國藥典》第一部僵蠶項檢測并符合相關規(guī)定。DB51/TXXXX—XXXX5（資料性）含孢量的測定A.1試劑吐溫80。A.2儀器設備光學顯微鏡、精度為千分之一的天平、組織搗碎機、血球記數(shù)板(16×16)、微量移液器、玻璃器皿A.3操作過程用精度為千分之一的天平準確稱取球孢白僵菌孢子粉1g，裝入組織搗碎機的盛液杯中，同時加入0.1mL的吐溫80、200mL清水，以5000r／min的速度攪拌2min，加清水定容至500mL，再以5000r/min的速度攪拌1min，使之成為均勻的孢子懸浮液。將孢子濃度控制在每中格20～40個，如果不合適可以稀釋樣品調(diào)節(jié)成此濃度。取深度為0.1mm、血球計數(shù)板格為16×16個中格，蓋上配套專用蓋玻片，用吸管吸取配制好的懸浮液沿蓋玻片的邊緣滴入，使孢子液恰好充滿蓋玻片于載玻片之間，以孢子液不入槽為度，多余孢子液用濾紙吸去。放在顯微鏡載物臺上靜置1min～2min，待浮動的孢子靜止后，放大400倍檢視計數(shù)。A.4結果計算血球計數(shù)板記數(shù)格為16個中格，每個中格為16個小格，則計算雙線范圍內(nèi)任一斜對角線上的四個中格共64個小格的孢子總數(shù)。記數(shù)時每中格的四周如有壓線的孢子，計上線