備案號(hào)：36654-2013馬鈴薯粉痂病菌檢疫鑒定方法IdentificationofSpongosporasubterraneaLagerheim2013-03-20實(shí)施2013-03-20實(shí)施內(nèi)蒙古自治區(qū)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)附錄A、B為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由內(nèi)蒙古出入境檢驗(yàn)檢疫局提出并解釋。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：內(nèi)蒙古出入境檢驗(yàn)檢疫局，滿洲里出入境檢驗(yàn)檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：楊永生、劉瑋琦、董奇彪、張貴、劉振偉、郭鐵箏、趙治國、潘國卿、李剛、杭小溪。1本標(biāo)準(zhǔn)適用于馬鈴薯種薯、及夾帶于土壤中的馬鈴薯粉痂病菌的檢疫和鑒定。(Plasmodiophoromycota)根腫菌綱(Plasmodiophoromycetes)粉痂菌屬(Spongospora)。英文名potatopowderyscab,簡(jiǎn)稱馬鈴薯粉痂病。3.2游動(dòng)孢子zoospore入寄主內(nèi)致病。游動(dòng)孢子及其靜止后所形成的變形體，成為體視顯微鏡，生物顯微鏡、測(cè)微尺、天平(感量0.001g)、超凈工作臺(tái)、光照生物培養(yǎng)箱、高壓滅燒杯，三角瓶，量筒，試管，離心管，培養(yǎng)皿，載玻片，蓋玻片，接菌針，移液器，25.1試劑0.5%的甲基藍(lán)溶液、1%酸性品紅。0.3%的水瓊脂培養(yǎng)基馬鈴薯粉痂病菌主要為害塊莖及根部，有時(shí)莖也可染病。被侵 (形態(tài)特征參見附錄B)。將感病薯塊在水下沖洗干凈，室溫下自然晾干。在病斑的不同部位進(jìn)行徒手切片，將的甲基藍(lán)溶液中染色3min,取出后用滅菌水沖洗2~3次，生物顯微鏡下觀察。6.3土壤檢驗(yàn)(番茄幼苗誘餌法)通過毛刷或水洗(少量水)方法小心收集塊莖表面土壤，并注意收集包裝內(nèi)外散落的土壤。將土樣取1g土壤加入到1000mL0.3%的水瓊脂中配成土壤液。將培育50d的健康番茄幼苗移栽到裝有滅菌蛭石的育苗缽中，每株番茄幼苗加10mL土壤液，每個(gè)處理20株，室溫下培育，7d澆1次營養(yǎng)液，30d左右檢查番茄根系。根毛感染多發(fā)生在番茄根的尖端至2~4cm位置上，將觀察的番茄根在1%酸性品紅染色液中浸漬數(shù)分鐘，水洗后在生物顯微鏡(100倍)下鏡檢。(形態(tài)特征參見附錄B)。生物顯微鏡觀察取自馬鈴薯塊莖上的病斑切片，可以觀察到大量休眠孢子囊(孢子團(tuán)),由許多近球形的黃色至黃綠色的休眠孢子囊集結(jié)而成，外觀如海綿狀球體，直徑15~85μm,具中腔空感染的番茄根部鏡檢可觀察到馬鈴薯粉痂病菌的變形體、休眠孢子囊。39樣品及菌種保存經(jīng)鑒定確定為馬鈴薯粉痂病的樣品，將病原菌切片制成永久玻片，病薯或病土密封在塑料袋中，做好標(biāo)記和基礎(chǔ)信息記錄，4℃保存。4(資料性附錄)馬鈴薯粉痂病菌資料世界分布馬鈴薯粉痂病在世界大部分馬鈴薯產(chǎn)區(qū)發(fā)生。歐洲、美洲發(fā)生廣泛。亞洲的中國、日本等國的部分地區(qū)發(fā)生嚴(yán)重。國內(nèi)分布內(nèi)蒙古、廣東、貴州、江西、浙江、云南、甘肅。A.2寄主侵染馬鈴薯(Solanumtuberosum),以及茄科(Solanaceae)植物的部分種類。A.3生物學(xué)特性馬鈴薯粉痂病菌以休眠孢子囊球在種薯內(nèi)或隨病殘物遺落在土壤中越冬，病薯和病土成為翌年本病的初侵染源。病害的遠(yuǎn)距離傳播靠種薯的調(diào)運(yùn)；田間近距離傳播則靠病土、病肥、灌溉水等。休眠孢子囊在土中可存活4~5年，當(dāng)條件適宜時(shí)，萌發(fā)產(chǎn)生游動(dòng)孢子，游動(dòng)孢子靜止后成為變形體，從根毛、皮孔或傷口侵入寄主；變形體在寄主細(xì)胞內(nèi)發(fā)育，分裂為多核的原生質(zhì)團(tuán)；到生長后期，原生質(zhì)團(tuán)乂分化為單核的休眠孢子囊，并集結(jié)為海綿狀的休眠孢子囊球，充滿寄主細(xì)胞內(nèi)。病組織崩解后，休眠孢子囊球又落入土中越冬或越夏。土壤濕度90%左右，土溫18~20℃,土壤pH4.7~5.4,適于病菌發(fā)育，因而發(fā)病也重。一般雨量多、夏季較涼爽的年份易發(fā)病。本病發(fā)生的輕重主要取決于初侵染及初侵染病原菌的數(shù)量，田間再侵染即使發(fā)生也不重要。5(資料性附錄)馬鈴薯粉痂病及病原菌形態(tài)特征圖B1馬鈴薯塊莖受害癥狀(引自MelodiePutnam)圖B3(a)馬鈴薯根系受害癥狀(引自U.Merz)6圖B3(b)馬鈴薯根系受害癥狀(引自U.Merz)圖B4馬鈴薯粉痂病菌休眠孢子囊(引自SandraJensen)圖B5番茄根系馬鈴薯粉痂病菌休眠孢子囊(引自U.Merz)72.惠娜娜，李繼平，王立等.土壤中馬鈴薯粉痂病菌的簡(jiǎn)易檢測(cè)方法[J].中國蔬菜，2012,(10):80-82.3.田中智.高寒地帶馬鈴薯粉痂病的生態(tài)與防治[J].植物防疫(日本),1982,38(11):20-25.4.楊艷麗，王利亞，羅文富，等.馬鈴薯粉痂病綜合防治技術(shù)初探[J].植物保護(hù)，2007,33(3):181-121.5.惠娜娜，李繼平，李建軍，等.甘肅省馬鈴薯窖藏期粉痂病的初步調(diào)查[J].中國蔬菜，2009,(21):24-25.6.FlettSP.AtechniquefordetectionofSpongosporasubterraneaninMycologicalSociety,1983,81:4247.MerzU.Infectivity,inoculumdensityandgerminationofsolution-culturetestsystem.EuropeanPlantProtectionOrganisationBulletin,1989,19:585-592.8.WaleSJ,BurgessPJ,BurnettF.Bioassayfoinpredictingpowderyscabinthefield.Abstractsofthe6thInterPathology.Montreal.1993.9.MERZU,MARINEZv,SCHWARZELR.Thepotentialfortherapidscreening(