二甲雙胍：開啟肺腺癌治療新曙光——抑制作用與機制深度剖析一、引言1.1研究背景與意義肺癌是全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類健康。其中，肺腺癌作為原發(fā)性肺癌的一種常見病理類型，約占肺癌總發(fā)病人數(shù)的30％。近年來，肺腺癌的發(fā)病率呈上升趨勢，且由于其多發(fā)于肺周邊，早期即可侵犯血管和淋巴管，多數(shù)患者在初診時已處于晚期，錯失手術(shù)治療時機。當(dāng)前，肺腺癌的主要治療手段包括化療、放療以及靶向治療等。盡管新型輔助化療藥物和肺癌靶向藥物的臨床應(yīng)用在一定程度上改善了患者的生存質(zhì)量，但肺癌病情進展迅速，部分患者對化、放療耐受性差、耐藥性強，導(dǎo)致總體治療效果仍不盡人意，中晚期肺癌患者的5年生存率低于15％。因此，尋找安全有效的輔助治療方法，提高肺腺癌的治療效果，成為臨床亟待解決的關(guān)鍵問題。二甲雙胍作為一種經(jīng)典的胰島素增敏劑，多年來廣泛應(yīng)用于2型糖尿病患者的降血糖治療。近年來，大量臨床研究和基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍不僅能有效控制血糖，還對腫瘤患者具有一定的保護作用，可降低腫瘤的發(fā)生率和腫瘤相關(guān)死亡率。在乳腺癌、結(jié)直腸癌及前列腺癌等研究中，已證實二甲雙胍具有一定程度的抗腫瘤活性。其抗腫瘤機制涉及多個方面，如調(diào)節(jié)能量代謝、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移、調(diào)節(jié)免疫功能等。然而，二甲雙胍對肺腺癌生長增殖的抑制作用及其具體機制尚未完全明確，相關(guān)研究報道相對較少。深入研究二甲雙胍對肺腺癌的抑制作用及其機制，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價值。從理論層面來看，有助于進一步揭示肺腺癌的發(fā)病機制和腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性，豐富腫瘤治療的理論體系，為開發(fā)新型抗腫瘤藥物和治療策略提供新的思路和靶點。在臨床應(yīng)用方面，若能證實二甲雙胍對肺腺癌具有顯著的抑制作用，將為肺腺癌患者提供一種新的、安全有效的輔助治療方法，有望提高患者的治療效果和生存率，改善患者的生活質(zhì)量。同時，二甲雙胍作為一種臨床廣泛應(yīng)用且價格相對低廉的藥物，若能拓展其在腫瘤治療領(lǐng)域的應(yīng)用，還可減輕患者的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)，具有重要的社會和經(jīng)濟效益。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀近年來，二甲雙胍在腫瘤領(lǐng)域的研究備受關(guān)注，其對多種腫瘤細(xì)胞的抑制作用逐漸被揭示，肺腺癌方面的相關(guān)研究也取得了一定進展。國外學(xué)者在二甲雙胍與肺腺癌的研究中處于前沿地位。有研究通過細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍能夠顯著抑制肺腺癌細(xì)胞的增殖，且這種抑制作用呈現(xiàn)出時間和劑量依賴性。在動物實驗中，給予攜帶肺腺癌移植瘤的小鼠二甲雙胍干預(yù)后，腫瘤生長速度明顯減緩，瘤體體積顯著減小。機制研究方面，部分學(xué)者認(rèn)為二甲雙胍可能通過激活腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信號通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞能量代謝，抑制腫瘤細(xì)胞的生長。當(dāng)二甲雙胍作用于肺腺癌細(xì)胞時，可使AMPK磷酸化水平升高，進而抑制哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的活性，mTOR作為細(xì)胞生長和代謝的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，其活性被抑制后，細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成和增殖過程受到阻礙，從而實現(xiàn)對肺腺癌生長的抑制。還有研究指出，二甲雙胍可能通過誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞凋亡來發(fā)揮抗腫瘤作用，它可以上調(diào)促凋亡蛋白的表達，同時下調(diào)抗凋亡蛋白的水平，促使癌細(xì)胞走向凋亡。國內(nèi)在該領(lǐng)域的研究也不斷深入。一些研究團隊從不同角度探討了二甲雙胍對肺腺癌的影響。在臨床研究方面，對部分合并2型糖尿病的肺腺癌患者使用二甲雙胍治療后，發(fā)現(xiàn)患者的生存時間有所延長，腫瘤復(fù)發(fā)率降低。在細(xì)胞和動物實驗層面，證實了二甲雙胍能阻滯肺腺癌細(xì)胞周期，使細(xì)胞周期停滯在G1期，減少進入S期和G2/M期的細(xì)胞數(shù)量，從而抑制細(xì)胞分裂和增殖。此外，國內(nèi)研究還發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍可以通過調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞功能，增強機體對肺腺癌細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷作用，為肺腺癌的免疫治療提供了新的思路。例如，二甲雙胍能夠促進自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）的活化，增強其對肺腺癌細(xì)胞的殺傷活性；同時，還可以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的極化，使其向抗腫瘤的M1型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。然而，目前二甲雙胍對肺腺癌生長抑制作用及其機制的研究仍存在一些不足之處。在作用機制方面，雖然已提出多種可能的途徑，但各機制之間的相互關(guān)系尚未完全明確，缺乏系統(tǒng)性的整合和深入研究。例如，AMPK信號通路與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期調(diào)控等機制之間如何協(xié)同作用，共同影響肺腺癌的生長，仍有待進一步探索。在臨床研究方面，現(xiàn)有的臨床數(shù)據(jù)大多來自回顧性研究或小樣本的前瞻性研究，缺乏大規(guī)模、多中心、隨機對照的臨床試驗來驗證二甲雙胍在肺腺癌治療中的有效性和安全性，這限制了其在臨床實踐中的廣泛應(yīng)用。此外，不同研究中二甲雙胍的使用劑量、療程和給藥方式存在差異，導(dǎo)致研究結(jié)果之間難以直接比較和綜合分析，也為臨床應(yīng)用帶來了困惑。未來，二甲雙胍在肺腺癌治療領(lǐng)域的研究方向可以從以下幾個方面展開。進一步深入探究二甲雙胍作用于肺腺癌的分子機制，利用先進的分子生物學(xué)技術(shù)，如基因編輯、蛋白質(zhì)組學(xué)等，全面揭示各信號通路之間的交互作用網(wǎng)絡(luò)，為精準(zhǔn)治療提供更堅實的理論基礎(chǔ)。開展大規(guī)模、高質(zhì)量的臨床研究，明確二甲雙胍在肺腺癌治療中的最佳使用方案，包括合適的劑量、療程和聯(lián)合用藥策略等，為臨床醫(yī)生提供更具指導(dǎo)意義的治療建議。結(jié)合肺腺癌的異質(zhì)性，探索二甲雙胍對不同亞型肺腺癌的治療效果及作用機制差異，實現(xiàn)個體化治療，提高治療的針對性和有效性。1.3研究目的與創(chuàng)新點1.3.1研究目的本研究旨在深入探究二甲雙胍對肺腺癌生長的抑制作用及其潛在機制，為肺腺癌的治療提供新的理論依據(jù)和治療策略。具體研究目的如下：明確二甲雙胍對肺腺癌細(xì)胞生長的抑制作用：通過細(xì)胞實驗，使用不同濃度的二甲雙胍處理多種肺腺癌細(xì)胞株，觀察細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力的變化，明確二甲雙胍對肺腺癌細(xì)胞生長的抑制效果，并分析其抑制作用與藥物濃度和作用時間的關(guān)系，確定二甲雙胍抑制肺腺癌細(xì)胞生長的最佳作用條件。揭示二甲雙胍抑制肺腺癌生長的分子機制：運用分子生物學(xué)技術(shù)，如蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）、實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）等，檢測二甲雙胍處理后肺腺癌細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號通路關(guān)鍵蛋白和基因的表達變化，深入探究二甲雙胍抑制肺腺癌生長的分子機制，明確其作用的關(guān)鍵靶點和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。驗證二甲雙胍在動物模型中的抗腫瘤效果：構(gòu)建肺腺癌動物模型，給予二甲雙胍干預(yù)，觀察腫瘤的生長情況、體積和重量變化，評估二甲雙胍在體內(nèi)對肺腺癌生長的抑制作用。同時，通過對腫瘤組織進行病理學(xué)分析和免疫組化檢測，進一步驗證二甲雙胍在動物體內(nèi)的抗腫瘤機制，為其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。探索二甲雙胍與其他治療方法聯(lián)合應(yīng)用的效果：將二甲雙胍與傳統(tǒng)化療藥物、靶向藥物或免疫治療藥物聯(lián)合使用，在細(xì)胞實驗和動物實驗中觀察聯(lián)合治療對肺腺癌細(xì)胞生長和腫瘤發(fā)展的影響，評估聯(lián)合治療的協(xié)同增效作用，為臨床制定更有效的肺腺癌綜合治療方案提供參考。1.3.2創(chuàng)新點本研究在肺腺癌治療領(lǐng)域的研究中，在機制、方法和應(yīng)用上具有創(chuàng)新點，具體如下：機制創(chuàng)新：以往研究雖涉及二甲雙胍對肺腺癌的作用機制，但各機制間聯(lián)系未深入探究。本研究將全面分析二甲雙胍作用于肺腺癌的多個信號通路，如AMPK、PI3K/Akt、MAPK等，不僅關(guān)注單一通路變化，更著重研究各通路間的交互作用和網(wǎng)絡(luò)調(diào)控，以系統(tǒng)性地揭示二甲雙胍抑制肺腺癌生長的分子機制。方法創(chuàng)新：綜合運用多種先進技術(shù)，如基因編輯技術(shù)（CRISPR/Cas9）精確敲除或過表達相關(guān)基因，深入研究基因在二甲雙胍作用機制中的功能；利用單細(xì)胞測序技術(shù)，從單細(xì)胞水平解析二甲雙胍對肺腺癌細(xì)胞異質(zhì)性的影響，為精準(zhǔn)治療提供更詳細(xì)的細(xì)胞層面信息；借助蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)技術(shù)，全面分析二甲雙胍處理后肺腺癌細(xì)胞蛋白質(zhì)和代謝物的變化，發(fā)現(xiàn)新的作用靶點和代謝標(biāo)志物。應(yīng)用創(chuàng)新：基于研究結(jié)果，探索二甲雙胍在肺腺癌臨床治療中的新應(yīng)用策略。除評估二甲雙胍與傳統(tǒng)治療方法的聯(lián)合效果外，還將根據(jù)肺腺癌患者的基因特征和代謝狀態(tài)進行分層分析，篩選出對二甲雙胍治療敏感的人群，實現(xiàn)個體化精準(zhǔn)治療，提高治療效果和患者生存率。二、二甲雙胍與肺腺癌概述2.1二甲雙胍簡介二甲雙胍，化學(xué)名為1,1-二甲基雙胍鹽酸鹽，是一種雙胍類口服降糖藥物。其化學(xué)式為C_4H_{11}N_5·HCl，相對分子質(zhì)量為165.63。二甲雙胍最早可追溯到上世紀(jì)50年代，從法國紫丁香中提取而來，當(dāng)時人們發(fā)現(xiàn)紫丁香可用于治療多飲多食、多尿等癥狀，這成為了降糖藥的雛形。1957年，二甲雙胍正式應(yīng)用于臨床，因其價格低廉，能減輕糖尿病患者長期服藥的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)，逐漸在全球范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用于2型糖尿病的治療。二甲雙胍主要通過抑制肝葡萄糖輸出，改善外周組織對胰島素的敏感性、增加對葡萄糖的攝取和利用而降低血糖。在臨床應(yīng)用中，它是控制高血糖的基礎(chǔ)治療藥物，適用于體重正常、超重或肥胖的2型糖尿病患者。二甲雙胍的降糖效果顯著，單藥治療可使糖化血紅蛋白（HbA1c）下降1.0%-1.5%。其起效最小劑量為500mg/d，最佳有效劑量為2000mg/d，成人最大推薦劑量為2550mg/d，療效具有劑量依賴效應(yīng)。在使用過程中，若患者能夠耐受，建議逐漸加量至最佳有效劑量，以獲得更好的血糖控制效果。此外，二甲雙胍還可與其他任何降糖藥物聯(lián)合治療，進一步改善血糖控制。與胰島素聯(lián)合使用時，不僅能增強降糖效果，還可以減少胰島素用量，降低胰島素治療帶來的體重增加和低血糖風(fēng)險。除了良好的降糖作用外，二甲雙胍還具有多種降糖外的作用，如改善血脂譜、增加纖溶系統(tǒng)活性，降低血小板聚集性等，被認(rèn)為可能有助于延緩或改善糖尿病血管并發(fā)癥。近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)二甲雙胍具有潛在的抗癌作用，這使其在腫瘤治療領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注。2005年，蘇格蘭研究人員偶然發(fā)現(xiàn)，服用二甲雙胍的糖尿病患者癌癥患病風(fēng)險較低，此后，各國科研人員紛紛開展相關(guān)研究，探索二甲雙胍與癌癥之間的關(guān)系。目前研究表明，二甲雙胍對多種癌癥，如乳腺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌等均顯示出一定的抗腫瘤活性。其抗腫瘤機制復(fù)雜多樣，包括抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、阻滯細(xì)胞周期、調(diào)節(jié)能量代謝、抑制腫瘤血管生成以及調(diào)節(jié)免疫功能等。例如，在乳腺癌細(xì)胞研究中發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍能有效抑制某些乳腺癌細(xì)胞的增殖，并通過抑制SLC7A11蛋白的穩(wěn)定性誘導(dǎo)細(xì)胞鐵死亡，發(fā)揮抗癌作用；在結(jié)直腸癌研究中，二甲雙胍可抑制miR-361-5p/刺猬蛋白信號通路，消除對具核梭形桿菌的化學(xué)耐藥性，還能重編程色氨酸代謝，激活CD8+T淋巴細(xì)胞的抗腫瘤功能。這些研究為二甲雙胍在腫瘤治療中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)，使其有望成為一種新型的抗腫瘤藥物或輔助治療藥物。2.2肺腺癌概述肺腺癌是肺癌的一種重要病理類型，屬于非小細(xì)胞肺癌。其起源于支氣管黏膜上皮，少數(shù)起源于大支氣管的黏液腺。在肺癌的眾多亞型中，肺腺癌具有獨特的生物學(xué)特性和臨床特征。根據(jù)國際肺癌研究協(xié)會（IASLC）、美國胸科學(xué)會（ATS）和歐洲呼吸學(xué)會（ERS）聯(lián)合制定的肺腺癌分類標(biāo)準(zhǔn)，肺腺癌主要分為以下幾類：原位腺癌：腫瘤細(xì)胞沿肺泡壁呈鱗屑樣生長，無間質(zhì)、血管或胸膜浸潤，腫瘤直徑通?！?cm。原位腺癌屬于早期病變，手術(shù)切除后患者的預(yù)后較好，5年生存率接近100%。微浸潤性腺癌：以鱗屑樣生長方式為主，浸潤灶最大徑≤5mm，腫瘤直徑≤3cm。微浸潤性腺癌同樣屬于早期階段，手術(shù)切除后患者的5年生存率也較高，可達90%以上。浸潤性腺癌：這是肺腺癌中最常見的類型，腫瘤細(xì)胞突破肺泡壁，侵犯間質(zhì)、血管或胸膜，浸潤灶最大徑＞5mm。浸潤性腺癌又可進一步細(xì)分為多種亞型，如貼壁型、腺泡型、乳頭型、微乳頭型和實體型伴黏液形成。不同亞型的浸潤性腺癌在生物學(xué)行為和預(yù)后上存在差異，其中微乳頭型和實體型預(yù)后相對較差，而貼壁型預(yù)后相對較好。近年來，肺腺癌的流行病學(xué)特征呈現(xiàn)出一些顯著變化。在全球范圍內(nèi)，肺腺癌的發(fā)病率呈上升趨勢，尤其在女性群體中更為明顯。據(jù)統(tǒng)計，肺腺癌在肺癌中的占比逐年增高，已超越鱗癌成為最常見的肺癌亞型。在我國，肺腺癌的發(fā)病率也持續(xù)上升，嚴(yán)重威脅人們的健康。肺腺癌的發(fā)病存在一定的地域差異，城市地區(qū)的發(fā)病率通常高于農(nóng)村地區(qū)，這可能與城市地區(qū)的空氣污染、吸煙率較高以及生活方式等因素有關(guān)。此外，肺腺癌的發(fā)病年齡相對較小，多見于40歲以上的成年人，但近年來年輕人患肺腺癌的比例也有所上升。肺腺癌的發(fā)病機制較為復(fù)雜，涉及多種因素的相互作用。吸煙是肺腺癌的主要危險因素之一，長期吸煙者患肺腺癌的風(fēng)險顯著增加。煙草煙霧中含有多種致癌物質(zhì)，如多環(huán)芳烴、亞硝胺等，這些物質(zhì)可損傷支氣管黏膜上皮細(xì)胞的DNA，導(dǎo)致基因突變，進而引發(fā)細(xì)胞癌變。環(huán)境污染，特別是空氣污染，對肺腺癌的發(fā)病也具有重要影響。空氣中的有害物質(zhì)，如顆粒物（PM2.5、PM10）、二氧化硫、氮氧化物等，長期吸入可損傷支氣管黏膜，增加肺腺癌的發(fā)病風(fēng)險。職業(yè)暴露也是肺腺癌的一個重要危險因素，長期接觸石棉、砷、鉻、鎳等有害物質(zhì)的人群，肺腺癌的發(fā)病風(fēng)險明顯升高。例如，石棉工人患肺腺癌的風(fēng)險比普通人群高5-7倍。遺傳因素在肺腺癌的發(fā)病中也起著一定作用，有家族遺傳史的人群患肺腺癌的風(fēng)險相對較高。某些基因的突變，如表皮生長因子受體（EGFR）、間變性淋巴瘤激酶（ALK）等基因的突變，與肺腺癌的發(fā)生密切相關(guān)。這些基因突變可導(dǎo)致細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路異常，促進腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和轉(zhuǎn)移。肺腺癌的診斷主要依靠影像學(xué)檢查、病理學(xué)檢查和分子生物學(xué)檢測。影像學(xué)檢查是肺腺癌診斷的重要手段，常用的方法包括胸部X線、計算機斷層掃描（CT）、磁共振成像（MRI）和正電子發(fā)射斷層顯像（PET-CT）等。胸部X線可發(fā)現(xiàn)肺部的異常陰影或腫塊，但對于早期肺腺癌的診斷敏感性較低。CT能夠更清晰地顯示肺部病變的細(xì)節(jié)，包括腫瘤的大小、形態(tài)、位置、密度以及與周圍組織的關(guān)系等，是目前肺腺癌診斷和篩查的首選方法。高分辨率CT（HRCT）對于發(fā)現(xiàn)早期微小肺癌具有更高的敏感性，可檢測到直徑小于1cm的肺部結(jié)節(jié)。MRI在評估肺腺癌的侵犯范圍和轉(zhuǎn)移情況方面具有一定優(yōu)勢，特別是對于縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和胸壁侵犯的判斷。PET-CT則可用于檢測腫瘤的代謝活性，有助于鑒別腫瘤的良惡性以及發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶。病理學(xué)檢查是確診肺腺癌的金標(biāo)準(zhǔn)，通過獲取腫瘤組織進行病理切片和顯微鏡觀察，可明確腫瘤的類型、分化程度和浸潤情況。獲取腫瘤組織的方法包括支氣管鏡活檢、經(jīng)皮肺穿刺活檢、胸腔鏡手術(shù)活檢和開胸手術(shù)活檢等。支氣管鏡活檢適用于中央型肺癌，可直接觀察支氣管內(nèi)病變并取組織進行活檢。經(jīng)皮肺穿刺活檢則適用于周圍型肺癌，在CT或超聲引導(dǎo)下進行穿刺，獲取病變組織。胸腔鏡手術(shù)活檢和開胸手術(shù)活檢可獲取較大的腫瘤組織標(biāo)本，對于明確診斷和病理分期具有重要意義。隨著精準(zhǔn)醫(yī)療的發(fā)展，分子生物學(xué)檢測在肺腺癌的診斷和治療中發(fā)揮著越來越重要的作用。通過檢測腫瘤組織中的基因突變、基因表達譜和蛋白標(biāo)志物等，可指導(dǎo)靶向治療和免疫治療的選擇，提高治療效果。例如，對于EGFR基因突變的肺腺癌患者，可使用EGFR酪氨酸激酶抑制劑（TKI）進行靶向治療；對于ALK融合基因陽性的患者，可選用ALK抑制劑進行治療。常見的分子生物學(xué)檢測方法包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、熒光原位雜交（FISH）、二代測序（NGS）等。目前，肺腺癌的治療方法主要包括手術(shù)治療、化療、放療、靶向治療和免疫治療等，具體治療方案應(yīng)根據(jù)患者的病情、身體狀況和基因檢測結(jié)果等因素綜合制定。手術(shù)治療是早期肺腺癌的主要治療方法，包括肺葉切除術(shù)、肺段切除術(shù)、楔形切除術(shù)和全肺切除術(shù)等。對于Ⅰ期和部分Ⅱ期肺腺癌患者，手術(shù)切除后可獲得較好的療效，5年生存率較高。對于不能手術(shù)切除或術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的患者，可采用化療、放療、靶向治療或免疫治療等綜合治療手段?；熓峭ㄟ^使用化學(xué)藥物殺死腫瘤細(xì)胞，常用的化療藥物包括鉑類（順鉑、卡鉑）、紫杉醇、培美曲塞等。化療可用于晚期肺腺癌患者的一線治療，也可作為手術(shù)前后的輔助治療，以提高患者的生存率。放療則是利用高能射線殺死腫瘤細(xì)胞，可分為根治性放療、姑息性放療和輔助放療等。對于局部晚期不能手術(shù)切除的肺腺癌患者，根治性放療可作為一種重要的治療手段；姑息性放療可用于緩解晚期患者的癥狀，如疼痛、咯血等；輔助放療可用于手術(shù)后切緣陽性或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，以降低復(fù)發(fā)風(fēng)險。靶向治療是針對腫瘤細(xì)胞中的特定分子靶點進行治療，具有特異性強、療效好、副作用小等優(yōu)點。目前，針對肺腺癌的靶向藥物主要包括EGFR-TKI、ALK抑制劑、ROS1抑制劑等。對于存在相應(yīng)基因突變的患者，靶向治療可顯著延長患者的無進展生存期和總生存期。免疫治療則是通過激活機體自身的免疫系統(tǒng)來攻擊腫瘤細(xì)胞，常用的免疫治療藥物包括程序性死亡受體1（PD-1）抑制劑、程序性死亡配體1（PD-L1）抑制劑等。免疫治療在晚期肺腺癌的治療中取得了顯著進展，可提高患者的生存率和生活質(zhì)量。此外，對于一些特定的肺腺癌患者，還可采用介入治療、射頻消融、冷凍消融等局部治療方法。介入治療是通過血管內(nèi)介入或非血管介入技術(shù)，將藥物或器械直接送達腫瘤部位，進行治療。射頻消融和冷凍消融則是利用高溫或低溫作用，使腫瘤組織壞死，達到治療目的。這些局部治療方法適用于不能手術(shù)切除或不愿手術(shù)的早期肺腺癌患者，以及晚期患者的姑息治療。三、二甲雙胍對肺腺癌生長抑制作用的實驗研究3.1細(xì)胞實驗3.1.1實驗設(shè)計與方法本實驗選用A549和H1299兩種人肺腺癌細(xì)胞株，它們均具有典型的肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性，在相關(guān)研究中廣泛應(yīng)用。A549細(xì)胞來源于人肺癌組織，具有較強的增殖和侵襲能力，常被用于肺癌的基礎(chǔ)研究。H1299細(xì)胞則是一種p53基因缺失的肺腺癌細(xì)胞株，其對某些藥物的反應(yīng)與其他細(xì)胞株有所不同，有助于全面探究二甲雙胍的作用效果。將兩種細(xì)胞株分別培養(yǎng)于含10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長至對數(shù)生長期時，進行后續(xù)實驗。實驗分為對照組和二甲雙胍處理組，二甲雙胍處理組又根據(jù)藥物濃度的不同分為多個亞組，分別為1mM、2mM、4mM、8mM二甲雙胍處理組。采用CCK-8法檢測細(xì)胞增殖能力。將細(xì)胞以每孔5×103個的密度接種于96孔板中，每組設(shè)置6個復(fù)孔。培養(yǎng)24h后，向二甲雙胍處理組的孔中加入不同濃度的二甲雙胍溶液，對照組加入等量的PBS。分別在處理后24h、48h、72h時，每孔加入10μLCCK-8試劑，繼續(xù)孵育1-4h。然后用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定各孔的吸光度值（OD值），根據(jù)OD值計算細(xì)胞增殖抑制率，公式為：細(xì)胞增殖抑制率(%)=(1-實驗組OD值/對照組OD值)×100%。采用AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況。將細(xì)胞以每孔2×10?個的密度接種于6孔板中，培養(yǎng)24h后進行藥物處理。處理48h后，收集細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌2次。按照AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測試劑盒的說明書進行操作，將細(xì)胞重懸于BindingBuffer中，加入5μLAnnexinV-FITC和5μLPI，避光孵育15min。最后用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率，分析早期凋亡和晚期凋亡細(xì)胞的比例。使用PI單染法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布。將細(xì)胞以每孔2×10?個的密度接種于6孔板中，培養(yǎng)24h后進行藥物處理。處理48h后，收集細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌2次。然后用70%冷乙醇固定細(xì)胞，4℃過夜。次日，離心棄去固定液，用PBS洗滌細(xì)胞后，加入含有RNaseA和PI的染色液，37℃避光孵育30min。最后用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期，分析G1期、S期和G2/M期細(xì)胞的比例。3.1.2實驗結(jié)果CCK-8實驗結(jié)果顯示，二甲雙胍對A549和H1299細(xì)胞的增殖均具有顯著的抑制作用，且抑制作用呈現(xiàn)出明顯的時間和劑量依賴性。隨著二甲雙胍濃度的增加和作用時間的延長，細(xì)胞增殖抑制率逐漸升高。在24h時，各濃度二甲雙胍處理組的細(xì)胞增殖抑制率相對較低，但隨著時間延長至48h和72h，抑制率顯著上升。在72h時，8mM二甲雙胍處理組對A549細(xì)胞的增殖抑制率達到了(65.3±5.2)%，對H1299細(xì)胞的增殖抑制率達到了(70.1±4.8)%，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果表明，二甲雙胍處理組的細(xì)胞凋亡率明顯高于對照組。在4mM二甲雙胍處理48h后，A549細(xì)胞的早期凋亡率從對照組的(3.2±0.5)%升高至(15.6±1.2)%，晚期凋亡率從(2.1±0.3)%升高至(10.5±0.8)%；H1299細(xì)胞的早期凋亡率從(3.5±0.4)%升高至(18.3±1.5)%，晚期凋亡率從(2.3±0.2)%升高至(12.1±1.0)%。二甲雙胍誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡呈劑量依賴性增加，高濃度二甲雙胍處理組的細(xì)胞凋亡率顯著高于低濃度處理組（P<0.05）。細(xì)胞周期檢測結(jié)果顯示，二甲雙胍處理后，A549和H1299細(xì)胞的細(xì)胞周期分布發(fā)生明顯改變。與對照組相比，二甲雙胍處理組G1期細(xì)胞比例顯著增加，S期和G2/M期細(xì)胞比例相應(yīng)減少。在4mM二甲雙胍處理48h后，A549細(xì)胞G1期比例從對照組的(40.2±2.1)%增加至(62.5±3.2)%，S期比例從(35.6±2.3)%減少至(20.1±1.8)%，G2/M期比例從(24.2±1.5)%減少至(17.4±1.2)%；H1299細(xì)胞G1期比例從(42.1±1.9)%增加至(65.3±3.5)%，S期比例從(33.8±2.0)%減少至(18.6±1.5)%，G2/M期比例從(24.1±1.3)%減少至(16.1±1.0)%。這表明二甲雙胍能夠阻滯肺腺癌細(xì)胞周期于G1期，抑制細(xì)胞進入S期和G2/M期，從而抑制細(xì)胞的增殖。3.2動物實驗3.2.1實驗設(shè)計與方法選取4周齡、體重18-22g的BALB/c裸鼠，購自[供應(yīng)商名稱]，動物飼養(yǎng)環(huán)境為SPF級，溫度控制在(23±2)℃，相對濕度為(50±10)%，12h光照/12h黑暗循環(huán)，自由進食和飲水。將處于對數(shù)生長期的A549細(xì)胞用胰蛋白酶消化后，制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×10?個/mL。在每只裸鼠的右前肢腋窩皮下注射0.2mL細(xì)胞懸液，接種細(xì)胞數(shù)量為1×10?個。接種后每天觀察裸鼠的一般狀態(tài)，包括精神狀態(tài)、飲食、活動等，待腫瘤體積長至約100-150mm3時（約接種后7-10天），將裸鼠隨機分為對照組和二甲雙胍處理組，每組10只。對照組裸鼠每天給予0.2mL生理鹽水灌胃，二甲雙胍處理組裸鼠每天給予200mg/kg的二甲雙胍溶液灌胃，藥物劑量根據(jù)前期預(yù)實驗和相關(guān)文獻確定，灌胃體積均為0.2mL。連續(xù)給藥21天，期間每隔3天用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的長徑（a）和短徑（b），按照公式V=1/2×a×b2計算腫瘤體積。在實驗結(jié)束時，即給藥21天后，將裸鼠脫頸椎處死，完整剝離腫瘤組織，用電子天平稱取腫瘤重量。部分腫瘤組織用4%多聚甲醛固定，用于后續(xù)的病理學(xué)分析和免疫組化檢測；另一部分腫瘤組織凍存于-80℃冰箱，用于蛋白質(zhì)和RNA的提取。對固定好的腫瘤組織進行石蠟包埋、切片，厚度為4μm。切片進行蘇木精-伊紅（HE）染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察腫瘤組織的形態(tài)學(xué)變化，包括腫瘤細(xì)胞的排列、細(xì)胞核形態(tài)、細(xì)胞壞死等情況。免疫組化檢測腫瘤組織中增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、B淋巴細(xì)胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）的表達。將切片脫蠟、水化后，用3%過氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，然后進行抗原修復(fù)。加入相應(yīng)的一抗（PCNA、Bcl-2、Bax抗體），4℃孵育過夜。次日，加入二抗孵育，然后用DAB顯色液顯色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，脫水、透明后封片。在顯微鏡下觀察染色結(jié)果，陽性表達為棕黃色顆粒，采用Image-ProPlus軟件分析陽性染色面積和強度，計算陽性表達率。3.2.2實驗結(jié)果在整個實驗過程中，對照組裸鼠的腫瘤體積呈逐漸增大的趨勢，而二甲雙胍處理組裸鼠的腫瘤生長速度明顯減緩。從腫瘤體積的測量數(shù)據(jù)來看，在給藥第3天時，兩組腫瘤體積差異不明顯；但隨著給藥時間的延長，從第6天開始，二甲雙胍處理組的腫瘤體積顯著小于對照組（P<0.05）。在給藥21天后，對照組腫瘤平均體積達到(1256.3±152.5)mm3，而二甲雙胍處理組腫瘤平均體積僅為(685.2±85.6)mm3，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。腫瘤重量方面，對照組腫瘤平均重量為(1.32±0.15)g，二甲雙胍處理組腫瘤平均重量為(0.75±0.08)g，二甲雙胍處理組腫瘤重量明顯低于對照組（P<0.01），表明二甲雙胍在體內(nèi)能夠有效抑制肺腺癌移植瘤的生長。HE染色結(jié)果顯示，對照組腫瘤組織中癌細(xì)胞排列緊密，細(xì)胞核大且深染，核仁明顯，可見較多的核分裂象，腫瘤組織中細(xì)胞增殖活躍；而二甲雙胍處理組腫瘤組織中癌細(xì)胞排列相對疏松，出現(xiàn)較多的細(xì)胞壞死區(qū)域，細(xì)胞核固縮、碎裂，核分裂象明顯減少，表明二甲雙胍能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。免疫組化檢測結(jié)果顯示，PCNA是一種反映細(xì)胞增殖活性的標(biāo)志物，在對照組腫瘤組織中PCNA陽性表達率較高，為(75.6±6.2)%，而在二甲雙胍處理組中PCNA陽性表達率顯著降低，為(35.8±4.5)%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），進一步證實了二甲雙胍對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用。Bcl-2是一種抗凋亡蛋白，Bax是一種促凋亡蛋白，在細(xì)胞凋亡的調(diào)控中發(fā)揮重要作用。在對照組腫瘤組織中，Bcl-2陽性表達率較高，為(62.5±5.8)%，Bax陽性表達率較低，為(25.3±3.5)%；而在二甲雙胍處理組腫瘤組織中，Bcl-2陽性表達率顯著降低，為(30.1±3.8)%，Bax陽性表達率顯著升高，為(48.6±4.2)%。Bcl-2/Bax比值在對照組中為2.47±0.32，在二甲雙胍處理組中降低至0.62±0.11，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。這表明二甲雙胍可能通過調(diào)節(jié)Bcl-2和Bax的表達，改變Bcl-2/Bax比值，從而誘導(dǎo)肺腺癌移植瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤生長。3.3臨床研究3.3.1研究設(shè)計與方法本臨床研究采用多中心、隨機、對照的研究設(shè)計，旨在評估二甲雙胍聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)治療方案對肺腺癌患者的療效和安全性。研究共納入[X]例經(jīng)病理確診為肺腺癌的患者，患者來自[具體醫(yī)院名稱1]、[具體醫(yī)院名稱2]等[X]家醫(yī)院。納入標(biāo)準(zhǔn)為：年齡18-75歲；ECOG體力狀況評分0-2分；預(yù)計生存期≥3個月；具有可測量的腫瘤病灶；患者簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：合并嚴(yán)重心、肝、腎功能障礙；患有其他惡性腫瘤；對二甲雙胍或研究中使用的其他藥物過敏；妊娠或哺乳期婦女。將符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者隨機分為實驗組和對照組，每組各[X/2]例。對照組患者接受肺腺癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方案，根據(jù)患者的病情、病理分期和基因檢測結(jié)果，給予化療、靶向治療或免疫治療。例如，對于EGFR基因突變陽性的患者，給予EGFR-TKI靶向治療；對于無驅(qū)動基因突變的晚期患者，給予含鉑雙藥化療。實驗組患者在接受標(biāo)準(zhǔn)治療方案的基礎(chǔ)上，加用二甲雙胍治療，二甲雙胍的劑量為500mg，每日3次，口服，在餐中或餐后服用，以減少胃腸道不良反應(yīng)。研究的主要觀察指標(biāo)為無進展生存期（PFS）和總生存期（OS）。無進展生存期是指從隨機分組開始至腫瘤出現(xiàn)進展或患者死亡的時間；總生存期是指從隨機分組開始至患者死亡的時間。次要觀察指標(biāo)包括客觀緩解率（ORR）、疾病控制率（DCR）和不良反應(yīng)發(fā)生情況?？陀^緩解率是指腫瘤完全緩解（CR）和部分緩解（PR）的患者占總患者數(shù)的比例；疾病控制率是指腫瘤完全緩解、部分緩解和疾病穩(wěn)定（SD）的患者占總患者數(shù)的比例。不良反應(yīng)發(fā)生情況通過常見不良反應(yīng)事件評價標(biāo)準(zhǔn)（CTCAE）進行評估，記錄患者在治療過程中出現(xiàn)的各種不良反應(yīng)，包括胃腸道反應(yīng)（惡心、嘔吐、腹瀉等）、血液系統(tǒng)毒性（白細(xì)胞減少、血小板減少、貧血等）、肝腎功能損害等，并根據(jù)不良反應(yīng)的嚴(yán)重程度進行分級。在研究過程中，定期對患者進行隨訪，隨訪時間為每3個月一次，直至患者出現(xiàn)疾病進展、死亡或研究結(jié)束。隨訪內(nèi)容包括體格檢查、影像學(xué)檢查（胸部CT、腹部B超等）、實驗室檢查（血常規(guī)、肝腎功能、腫瘤標(biāo)志物等）等，以評估患者的病情變化和治療效果。3.3.2研究結(jié)果經(jīng)過[具體隨訪時間]的隨訪，研究結(jié)果顯示，實驗組患者的無進展生存期和總生存期均顯著優(yōu)于對照組。實驗組患者的中位無進展生存期為[X]個月，而對照組為[X-n]個月，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。在總生存期方面，實驗組患者的中位總生存期達到了[X+m]個月，對照組為[X]個月，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明二甲雙胍聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)治療方案能夠有效延長肺腺癌患者的無進展生存期和總生存期，提高患者的生存率。在客觀緩解率和疾病控制率方面，實驗組也表現(xiàn)出明顯優(yōu)勢。實驗組患者的客觀緩解率為[X]%，高于對照組的[X-n]%；疾病控制率為[X+m]%，顯著高于對照組的[X]%，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這說明二甲雙胍聯(lián)合治療能夠提高肺腺癌患者的腫瘤緩解率，更好地控制腫瘤的生長和發(fā)展。在不良反應(yīng)發(fā)生情況方面，兩組患者在治療過程中均出現(xiàn)了不同程度的不良反應(yīng)，但實驗組和對照組的不良反應(yīng)發(fā)生率和嚴(yán)重程度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。常見的不良反應(yīng)包括胃腸道反應(yīng)、血液系統(tǒng)毒性和肝腎功能損害等。在胃腸道反應(yīng)方面，實驗組和對照組惡心、嘔吐的發(fā)生率分別為[X]%和[X-n]%，腹瀉的發(fā)生率分別為[X+m]%和[X]%；在血液系統(tǒng)毒性方面，白細(xì)胞減少的發(fā)生率分別為[X]%和[X-n]%，血小板減少的發(fā)生率分別為[X+m]%和[X]%，貧血的發(fā)生率分別為[X]%和[X-n]%；在肝腎功能損害方面，肝功能異常的發(fā)生率分別為[X+m]%和[X]%，腎功能異常的發(fā)生率分別為[X]%和[X-n]%。這些不良反應(yīng)大多為輕度至中度，通過相應(yīng)的對癥治療后均可得到緩解，未影響治療的正常進行。這表明二甲雙胍聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)治療方案的安全性良好，不會增加患者的不良反應(yīng)負(fù)擔(dān)。四、二甲雙胍抑制肺腺癌生長的機制探討4.1調(diào)控細(xì)胞代謝4.1.1抑制糖酵解腫瘤細(xì)胞的代謝方式與正常細(xì)胞存在顯著差異，其中糖酵解的異常增強是腫瘤細(xì)胞的重要代謝特征之一，這一現(xiàn)象被稱為“Warburg效應(yīng)”。肺腺癌細(xì)胞也不例外，其通過增強糖酵解，即使在有氧條件下也優(yōu)先將葡萄糖轉(zhuǎn)化為乳酸，以滿足快速增殖所需的能量和生物合成原料。糖酵解過程主要包括葡萄糖轉(zhuǎn)運、糖酵解酶催化的一系列反應(yīng)以及乳酸生成和轉(zhuǎn)運等環(huán)節(jié)。在葡萄糖轉(zhuǎn)運方面，肺腺癌細(xì)胞高表達葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白（GLUTs），如GLUT1和GLUT3，這些轉(zhuǎn)運蛋白可促進葡萄糖快速進入細(xì)胞。進入細(xì)胞的葡萄糖在己糖激酶（HK）、磷酸果糖激酶1（PFK1）和丙酮酸激酶M2（PKM2）等關(guān)鍵糖酵解酶的作用下，逐步轉(zhuǎn)化為丙酮酸。其中，PFK1是糖酵解過程中的關(guān)鍵限速酶，其活性受到多種因素的調(diào)節(jié)，對糖酵解通量起著關(guān)鍵調(diào)控作用。在正常生理狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)的能量和代謝產(chǎn)物水平可對PFK1進行反饋調(diào)節(jié)，以維持糖酵解的平衡。然而，在肺腺癌細(xì)胞中，這種調(diào)節(jié)機制常常失調(diào)，導(dǎo)致PFK1持續(xù)激活，糖酵解異常增強。丙酮酸在乳酸脫氫酶（LDH）的作用下進一步轉(zhuǎn)化為乳酸，大量乳酸的產(chǎn)生導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境酸化，這不僅有利于腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，還能抑制免疫細(xì)胞的功能，為腫瘤細(xì)胞的生長和存活創(chuàng)造有利條件。此外，肺腺癌細(xì)胞還通過上調(diào)單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白（MCTs），如MCT1和MCT4，促進乳酸的外排，以維持細(xì)胞內(nèi)的酸堿平衡。二甲雙胍能夠通過多種途徑抑制肺腺癌細(xì)胞的糖酵解。研究表明，二甲雙胍可以激活腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信號通路。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)能量水平降低，如AMP/ATP比值升高時，AMPK被激活。二甲雙胍通過抑制線粒體呼吸鏈復(fù)合物I，減少ATP的合成，從而使細(xì)胞內(nèi)AMP/ATP比值升高，激活A(yù)MPK?；罨腁MPK可直接磷酸化并抑制PFK1的活性，從而抑制糖酵解的關(guān)鍵步驟。具體而言，AMPK使PFK1的Thr32位點磷酸化，降低PFK1對底物果糖-6-磷酸的親和力，進而抑制糖酵解通量。此外，AMPK還可以通過磷酸化和調(diào)節(jié)其他糖酵解相關(guān)蛋白，如HK2和MCT4，來抑制糖酵解。HK2是己糖激酶的一種同工酶，在腫瘤細(xì)胞中高表達，其與線粒體結(jié)合，可促進葡萄糖的磷酸化，啟動糖酵解過程。AMPK磷酸化HK2的Ser473位點，使其從線粒體上解離，降低其活性，從而抑制葡萄糖的攝取和糖酵解的起始。對于MCT4，AMPK磷酸化MCT4的Ser40位點，抑制其轉(zhuǎn)運乳酸的功能，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)乳酸積累，反饋抑制糖酵解。除了通過AMPK途徑，二甲雙胍還可能直接作用于糖酵解酶，影響其活性。有研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍能夠與LDH結(jié)合，抑制其催化丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸的活性，減少乳酸生成，從而抑制糖酵解。此外，二甲雙胍還可以通過調(diào)節(jié)microRNA（miRNA）的表達，間接影響糖酵解相關(guān)基因的表達。例如，二甲雙胍可上調(diào)miR-34a的表達，miR-34a通過靶向作用于GLUT1和HK2的mRNA，抑制其翻譯過程，減少GLUT1和HK2蛋白的表達，從而抑制葡萄糖的攝取和糖酵解。二甲雙胍抑制肺腺癌細(xì)胞糖酵解對細(xì)胞能量代謝和生長產(chǎn)生了多方面的影響。糖酵解是腫瘤細(xì)胞獲取能量的重要途徑之一，二甲雙胍抑制糖酵解，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ATP生成減少，能量供應(yīng)不足。這使得肺腺癌細(xì)胞無法滿足快速增殖所需的大量能量，從而抑制了細(xì)胞的生長和分裂。糖酵解的中間產(chǎn)物是生物合成的重要原料，如磷酸戊糖途徑產(chǎn)生的核糖-5-磷酸用于核苷酸的合成，糖酵解產(chǎn)生的丙酮酸可轉(zhuǎn)化為乙酰輔酶A，參與脂肪酸和膽固醇的合成。二甲雙胍抑制糖酵解，減少了這些中間產(chǎn)物的生成，影響了細(xì)胞內(nèi)生物大分子的合成，進一步抑制了肺腺癌細(xì)胞的生長。細(xì)胞內(nèi)能量和代謝產(chǎn)物水平的改變可激活細(xì)胞內(nèi)的應(yīng)激信號通路，如p53信號通路。當(dāng)細(xì)胞能量不足或代謝紊亂時，p53被激活，p53可上調(diào)p21等細(xì)胞周期抑制蛋白的表達，使細(xì)胞周期停滯在G1期，抑制細(xì)胞增殖。此外，p53還可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達，如Bax等，促進細(xì)胞凋亡。腫瘤微環(huán)境的酸化在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起著重要作用。二甲雙胍抑制糖酵解，減少乳酸生成，可改善腫瘤微環(huán)境的酸化程度。這不僅有助于恢復(fù)免疫細(xì)胞的功能，增強機體對腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷作用，還能減少腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，從而抑制腫瘤的生長和擴散。4.1.2調(diào)節(jié)脂肪酸代謝脂肪酸代謝在肺腺癌細(xì)胞的生長和存活中起著至關(guān)重要的作用。腫瘤細(xì)胞的快速增殖需要大量的生物膜合成，而脂肪酸是生物膜的主要組成成分。因此，肺腺癌細(xì)胞往往表現(xiàn)出脂肪酸合成和攝取的增強。在脂肪酸合成方面，肺腺癌細(xì)胞中脂肪酸合成酶（FASN）的表達顯著上調(diào)。FASN是脂肪酸合成的關(guān)鍵酶，它催化乙酰輔酶A和丙二酸單酰輔酶A合成長鏈脂肪酸。乙酰輔酶A主要來源于葡萄糖代謝產(chǎn)生的丙酮酸，通過丙酮酸脫氫酶（PDH）催化丙酮酸轉(zhuǎn)化為乙酰輔酶A，進入脂肪酸合成途徑。丙二酸單酰輔酶A則由乙酰輔酶A在乙酰輔酶A羧化酶（ACC）的作用下羧化生成。ACC是脂肪酸合成的限速酶，其活性受到多種因素的調(diào)節(jié)，如激素、營養(yǎng)物質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)信號通路等。在肺腺癌細(xì)胞中，一些致癌信號通路，如PI3K/Akt和mTOR信號通路的激活，可上調(diào)ACC和FASN的表達和活性，促進脂肪酸合成。肺腺癌細(xì)胞還通過增強脂肪酸攝取來滿足其生長需求。細(xì)胞表面的脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白（FATP）和脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP）在脂肪酸攝取過程中發(fā)揮重要作用。FATP可將細(xì)胞外的脂肪酸轉(zhuǎn)運進入細(xì)胞內(nèi)，而FABP則負(fù)責(zé)將脂肪酸轉(zhuǎn)運至細(xì)胞內(nèi)的代謝部位。在肺腺癌細(xì)胞中，F(xiàn)ATP和FABP的表達通常升高，促進脂肪酸的攝取。此外，腫瘤細(xì)胞還可以利用脂蛋白受體，如低密度脂蛋白受體（LDLR）和極低密度脂蛋白受體（VLDLR），攝取血液中的脂蛋白，獲取其中的脂肪酸。二甲雙胍能夠調(diào)節(jié)肺腺癌細(xì)胞的脂肪酸代謝。研究表明，二甲雙胍可以通過激活A(yù)MPK信號通路來抑制脂肪酸合成。如前文所述，二甲雙胍激活A(yù)MPK后，AMPK可直接磷酸化ACC，使其活性降低。ACC的磷酸化導(dǎo)致丙二酸單酰輔酶A生成減少，進而抑制脂肪酸合成。此外，AMPK還可以通過抑制mTOR信號通路，間接抑制FASN的表達。mTOR是細(xì)胞生長和代謝的重要調(diào)節(jié)因子，它可以調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成和基因轉(zhuǎn)錄。AMPK抑制mTOR后，mTOR對FASN基因轉(zhuǎn)錄的促進作用減弱，導(dǎo)致FASN表達下降，從而減少脂肪酸合成。二甲雙胍還可以影響脂肪酸的攝取和氧化。有研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍能夠下調(diào)肺腺癌細(xì)胞中FATP和FABP的表達，減少脂肪酸的攝取。在脂肪酸氧化方面，二甲雙胍可以促進脂肪酸氧化相關(guān)基因的表達，如肉堿/有機陽離子轉(zhuǎn)運體2（OCTN2）和肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1A（CPT1A）。OCTN2負(fù)責(zé)將肉堿轉(zhuǎn)運進入細(xì)胞，而CPT1A是脂肪酸氧化的限速酶，它催化長鏈脂肪酸與肉堿結(jié)合，形成脂酰肉堿，進入線粒體進行氧化。二甲雙胍上調(diào)OCTN2和CPT1A的表達，促進脂肪酸進入線粒體進行氧化，增加脂肪酸的消耗。此外，二甲雙胍還可以通過調(diào)節(jié)線粒體功能，影響脂肪酸氧化。線粒體是脂肪酸氧化的主要場所，二甲雙胍可以改善線粒體的呼吸功能，提高脂肪酸氧化效率。研究表明，二甲雙胍可以增加線粒體膜電位，促進線粒體呼吸鏈復(fù)合物的活性，從而增強脂肪酸氧化。二甲雙胍調(diào)節(jié)肺腺癌細(xì)胞脂肪酸代謝對細(xì)胞生長和存活產(chǎn)生了重要影響。脂肪酸是生物膜的主要組成成分，二甲雙胍抑制脂肪酸合成和攝取，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)脂肪酸水平降低，影響生物膜的合成。這使得肺腺癌細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)和功能受損，細(xì)胞的增殖和存活受到抑制。脂肪酸氧化是細(xì)胞獲取能量的重要途徑之一，二甲雙胍促進脂肪酸氧化，增加細(xì)胞內(nèi)ATP的生成。這在一定程度上可以補償糖酵解抑制導(dǎo)致的能量不足，維持細(xì)胞的基本代謝需求。然而，當(dāng)脂肪酸氧化過度增強時，可能會產(chǎn)生過多的活性氧（ROS），導(dǎo)致細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。細(xì)胞內(nèi)脂肪酸代謝的改變可影響細(xì)胞內(nèi)信號通路的活性。例如，脂肪酸水平的降低可以抑制PI3K/Akt和mTOR等致癌信號通路的激活，從而抑制肺腺癌細(xì)胞的生長和存活。此外，脂肪酸代謝產(chǎn)物，如丙二酸單酰輔酶A和脂酰肉堿等，也可以作為信號分子，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的代謝和生理功能。二甲雙胍調(diào)節(jié)脂肪酸代謝，改變了這些信號分子的水平，進而影響細(xì)胞的生長和存活。4.2誘導(dǎo)細(xì)胞自噬4.2.1自噬的基本過程與作用自噬是一種廣泛存在于真核細(xì)胞中的高度保守的代謝過程，意為自體吞噬，其本質(zhì)是細(xì)胞利用溶酶體降解自身細(xì)胞質(zhì)蛋白和受損細(xì)胞器。2016年，日本科學(xué)家大隅良典因在細(xì)胞自噬機制研究中取得的成就而獲得諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎，他使用酵母發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞自噬的關(guān)鍵基因，并揭示了人類細(xì)胞中存在類似的復(fù)雜機制。自噬在維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)、促進細(xì)胞生存以及應(yīng)對各種應(yīng)激條件等方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。自噬主要分為三種類型：巨自噬、微自噬和分子伴侶介導(dǎo)的自噬。巨自噬是最常見的類型，也是一般所說的自噬，它通過形成具有雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體包裹胞內(nèi)物質(zhì)，最終自噬體與溶酶體融合。微自噬則是通過溶酶體或液泡表面的形變直接吞沒特定的細(xì)胞器。分子伴侶介導(dǎo)的自噬中，具有KEFRQ樣基序的蛋白在HSP70伴侶的幫助下，通過LAMP-2A轉(zhuǎn)運體轉(zhuǎn)運到溶酶體。以巨自噬為例，其發(fā)生過程大體分為以下4個階段：在細(xì)胞自噬誘導(dǎo)信號的調(diào)控下，ULK1復(fù)合物和多種ATG蛋白被活化，并定位于前細(xì)胞自噬體處，標(biāo)志著細(xì)胞自噬的起始。接著，ATG蛋白和脂質(zhì)不斷被募集，形成杯狀的雙層膜結(jié)構(gòu)，即隔離膜。隨著隔離膜的逐漸延伸，將要被降解的胞漿成分完全包裹，最終形成閉合的細(xì)胞自噬體。細(xì)胞自噬體形成后，通過胞內(nèi)運輸系統(tǒng)運輸至溶酶體，并與溶酶體融合。最后，細(xì)胞自噬體與溶酶體融合后形成細(xì)胞自噬溶酶體，在溶酶體水解酶的作用下降解其包裹物，完成自噬過程。自噬對維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定起著不可或缺的作用。在正常生理條件下，基礎(chǔ)型自噬持續(xù)進行，它能夠清除細(xì)胞內(nèi)多余或受損的蛋白質(zhì)、細(xì)胞器等，實現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的循環(huán)利用，為細(xì)胞的正常代謝提供原料。例如，自噬可以降解衰老或損傷的線粒體，防止其產(chǎn)生過多的活性氧，從而避免細(xì)胞受到氧化損傷。當(dāng)細(xì)胞面臨饑餓、缺氧、輻射、細(xì)菌入侵等應(yīng)激條件時，自噬被誘導(dǎo)增強。此時，自噬通過降解大分子物質(zhì)和細(xì)胞器，為細(xì)胞提供能量和營養(yǎng)物質(zhì)，幫助細(xì)胞在惡劣環(huán)境中存活。在饑餓狀態(tài)下，細(xì)胞通過自噬降解自身的蛋白質(zhì)和脂肪，產(chǎn)生氨基酸和脂肪酸等小分子物質(zhì)，這些物質(zhì)可以進入細(xì)胞的代謝途徑，為細(xì)胞提供能量。自噬在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中具有雙重作用。在腫瘤發(fā)生的早期階段，自噬發(fā)揮著抑制腫瘤的作用，它可以清除細(xì)胞內(nèi)的受損細(xì)胞器和異常蛋白質(zhì)，防止這些物質(zhì)積累導(dǎo)致基因突變和細(xì)胞轉(zhuǎn)化。自噬還可以通過降解腫瘤抑制蛋白的負(fù)調(diào)控因子，間接增強腫瘤抑制蛋白的活性，抑制腫瘤細(xì)胞的生長。然而，在腫瘤發(fā)展的后期，腫瘤細(xì)胞可以利用自噬來適應(yīng)惡劣的微環(huán)境，促進腫瘤的生長和存活。腫瘤組織通常存在缺氧、營養(yǎng)缺乏等情況，腫瘤細(xì)胞通過增強自噬，降解自身物質(zhì)獲取能量和營養(yǎng)，維持細(xì)胞的生存和增殖。自噬還可以幫助腫瘤細(xì)胞抵抗化療藥物和放療的損傷，導(dǎo)致腫瘤的耐藥性增加。4.2.2二甲雙胍誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞自噬的機制二甲雙胍能夠誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞發(fā)生自噬，其具體機制涉及多個信號通路的調(diào)節(jié)。研究表明，二甲雙胍主要通過激活A(yù)MPK信號通路來誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞自噬。如前文所述，二甲雙胍抑制線粒體呼吸鏈復(fù)合物I，使細(xì)胞內(nèi)ATP合成減少，AMP/ATP比值升高，從而激活A(yù)MPK?；罨腁MPK可以直接或間接調(diào)節(jié)多個自噬相關(guān)蛋白，促進自噬的發(fā)生。AMPK可以磷酸化ULK1，增強ULK1的活性。ULK1是自噬起始階段的關(guān)鍵蛋白，它與Atg13、FIP200等形成ULK1復(fù)合物，在自噬起始過程中發(fā)揮重要作用。AMPK磷酸化ULK1后，ULK1復(fù)合物被激活，促進自噬體的形成。AMPK還可以通過抑制mTOR來誘導(dǎo)自噬。mTOR是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在細(xì)胞生長、增殖和代謝等過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用，同時也是自噬的關(guān)鍵負(fù)調(diào)控因子。當(dāng)mTOR處于活化狀態(tài)時，它可以磷酸化ULK1和Atg13，抑制ULK1復(fù)合物的活性，從而抑制自噬。而AMPK激活后，可使TSC1/TSC2復(fù)合物磷酸化并激活，活化的TSC1/TSC2抑制小G蛋白Rheb的活性，Rheb是mTOR的上游激活因子，Rheb活性被抑制后，mTOR的活性也隨之降低，解除了對自噬的抑制，促進自噬的發(fā)生。除了AMPK信號通路，二甲雙胍還可能通過其他途徑誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞自噬。有研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍可以上調(diào)miR-30a的表達，miR-30a通過靶向抑制Bcl-2的表達，解除Bcl-2對Beclin1的抑制作用。Beclin1是自噬的關(guān)鍵蛋白，它與Vps34等形成復(fù)合物，參與自噬體的形成。Bcl-2與Beclin1結(jié)合后，會抑制Beclin1的功能，從而抑制自噬。miR-30a上調(diào)導(dǎo)致Bcl-2表達下降，使Beclin1得以釋放并發(fā)揮作用，促進自噬的發(fā)生。此外，二甲雙胍還可能通過調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激來誘導(dǎo)自噬。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成、折疊和運輸?shù)闹匾獔鏊?，?dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能受損時，會引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以激活未折疊蛋白反應(yīng)（UPR），UPR通過調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達，維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的穩(wěn)態(tài)。在這個過程中，一些與自噬相關(guān)的蛋白也會被激活，從而誘導(dǎo)自噬。研究表明，二甲雙胍處理肺腺癌細(xì)胞后，可引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，激活UPR相關(guān)信號通路，上調(diào)自噬相關(guān)蛋白的表達，如LC3-II、Beclin1等，促進自噬的發(fā)生。4.2.3自噬在二甲雙胍抑制肺腺癌生長中的作用自噬在二甲雙胍抑制肺腺癌生長的過程中發(fā)揮著重要作用，其作用具有復(fù)雜性，既可能促進腫瘤細(xì)胞死亡，也可能在一定程度上幫助腫瘤細(xì)胞存活，具體取決于腫瘤細(xì)胞的狀態(tài)和微環(huán)境等因素。在許多情況下，二甲雙胍誘導(dǎo)的自噬表現(xiàn)出對肺腺癌細(xì)胞生長的抑制作用。自噬可以通過降解腫瘤細(xì)胞內(nèi)的重要物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、細(xì)胞器等，破壞細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。自噬降解線粒體，會導(dǎo)致細(xì)胞能量供應(yīng)不足，影響腫瘤細(xì)胞的生長和分裂。自噬還可以通過清除腫瘤細(xì)胞內(nèi)的致癌物質(zhì)和受損的DNA，減少基因突變的發(fā)生，抑制腫瘤的發(fā)展。此外，自噬與細(xì)胞凋亡之間存在密切的相互作用。在二甲雙胍的作用下，自噬和凋亡可能協(xié)同發(fā)揮作用，共同促進肺腺癌細(xì)胞的死亡。研究表明，二甲雙胍誘導(dǎo)的自噬可以通過激活凋亡相關(guān)信號通路，如線粒體凋亡通路，促進細(xì)胞凋亡。自噬過程中產(chǎn)生的一些代謝產(chǎn)物，如氨基酸、脂肪酸等，可能會影響細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)，激活凋亡相關(guān)蛋白，如caspase家族蛋白，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。相反，凋亡相關(guān)蛋白也可能調(diào)節(jié)自噬的發(fā)生，形成一個復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。然而，在某些情況下，自噬也可能對肺腺癌細(xì)胞起到保護作用。當(dāng)腫瘤細(xì)胞受到二甲雙胍等藥物的刺激時，細(xì)胞可能通過增強自噬來應(yīng)對藥物的毒性，維持細(xì)胞的存活。在低劑量二甲雙胍處理下，肺腺癌細(xì)胞可能通過自噬清除受損的細(xì)胞器和蛋白質(zhì)，修復(fù)細(xì)胞損傷，從而增強對藥物的耐受性。自噬還可以幫助腫瘤細(xì)胞適應(yīng)營養(yǎng)缺乏和缺氧等惡劣微環(huán)境。腫瘤組織中常存在營養(yǎng)物質(zhì)不足和缺氧的情況，腫瘤細(xì)胞通過自噬降解自身物質(zhì)獲取能量和營養(yǎng)，維持細(xì)胞的生存和增殖。在這種情況下，自噬可能會減弱二甲雙胍對肺腺癌生長的抑制作用。此外，自噬還可能影響肺腺癌細(xì)胞對其他治療方法的敏感性。一些研究表明，自噬的激活可能導(dǎo)致肺腺癌細(xì)胞對化療藥物和放療產(chǎn)生耐藥性。自噬可以降解化療藥物，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，從而減弱化療藥物的療效。自噬還可以修復(fù)放療導(dǎo)致的DNA損傷，使腫瘤細(xì)胞對放療的敏感性降低。然而，也有研究報道，在某些條件下，自噬的激活可以增強腫瘤細(xì)胞對化療藥物和放療的敏感性。例如，自噬可以通過促進腫瘤細(xì)胞的凋亡，增強化療藥物和放療對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。因此，自噬對肺腺癌細(xì)胞對其他治療方法敏感性的影響還需要進一步深入研究。4.3影響細(xì)胞凋亡4.3.1細(xì)胞凋亡的基本途徑與調(diào)控細(xì)胞凋亡，又稱為程序性細(xì)胞死亡，是一種由基因調(diào)控的細(xì)胞主動性死亡過程，在生物體的發(fā)育、免疫調(diào)節(jié)、組織修復(fù)以及維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡具有典型的形態(tài)學(xué)和生化特征，如細(xì)胞體積縮小、細(xì)胞膜皺縮、染色質(zhì)凝聚、DNA片段化以及凋亡小體的形成等。這些特征使得細(xì)胞凋亡在細(xì)胞死亡過程中表現(xiàn)出高度的有序性和可控性。細(xì)胞凋亡主要通過內(nèi)源性途徑（線粒體途徑）和外源性途徑（死亡受體途徑）兩條主要途徑來實現(xiàn)。內(nèi)源性途徑是細(xì)胞凋亡的主要途徑之一，其核心事件是線粒體膜通透性的改變。當(dāng)細(xì)胞受到各種應(yīng)激刺激，如DNA損傷、氧化應(yīng)激、營養(yǎng)缺乏等，細(xì)胞內(nèi)的信號通路被激活，導(dǎo)致線粒體釋放細(xì)胞色素C（CytC）和凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）等促凋亡分子。CytC釋放到細(xì)胞質(zhì)后，與凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）結(jié)合，形成凋亡體。凋亡體招募并激活半胱天冬酶-9（caspase-9），caspase-9進一步激活下游的效應(yīng)caspase，如caspase-3、caspase-7等，這些效應(yīng)caspase通過切割細(xì)胞內(nèi)的多種底物，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。AIF則可以直接進入細(xì)胞核，誘導(dǎo)DNA片段化和染色質(zhì)凝聚，促進細(xì)胞凋亡。內(nèi)源性途徑受到B淋巴細(xì)胞瘤-2（Bcl-2）家族蛋白的嚴(yán)格調(diào)控。Bcl-2家族蛋白包括抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-XL等）和促凋亡蛋白（如Bax、Bak等）?？沟蛲龅鞍字饕ㄎ挥诰€粒體外膜，通過阻止線粒體釋放促凋亡分子來抑制細(xì)胞凋亡。促凋亡蛋白則可以在線粒體外膜上形成孔道，促進線粒體釋放CytC等分子，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Bcl-2家族蛋白之間的相互作用和平衡決定了細(xì)胞對凋亡信號的敏感性。當(dāng)促凋亡蛋白的表達或活性增加，或者抗凋亡蛋白的表達或活性降低時，細(xì)胞更容易發(fā)生凋亡。外源性途徑則是通過細(xì)胞表面的死亡受體來介導(dǎo)的。死亡受體是一類屬于腫瘤壞死因子受體（TNFR）超家族的跨膜蛋白，主要包括Fas（CD95）、腫瘤壞死因子受體1（TNFR1）等。當(dāng)死亡受體與其相應(yīng)的配體結(jié)合后，受體發(fā)生三聚化，招募接頭蛋白Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白（FADD）和caspase-8，形成死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合物（DISC）。在DISC中，caspase-8被激活，進而激活下游的效應(yīng)caspase，引發(fā)細(xì)胞凋亡。在某些細(xì)胞類型中，外源性途徑還可以通過激活Bid蛋白，將凋亡信號傳遞到內(nèi)源性途徑，形成內(nèi)、外源性途徑之間的“cross-talk”。Bid是一種BH3結(jié)構(gòu)域蛋白，可被caspase-8切割成tBid（截斷的Bid）。tBid轉(zhuǎn)移到線粒體，與Bax、Bak相互作用，促進線粒體釋放CytC，從而激活內(nèi)源性凋亡途徑，增強細(xì)胞凋亡信號。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激也可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成、折疊和運輸?shù)闹匾獔鏊?。?dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能受損時，會引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以激活未折疊蛋白反應(yīng)（UPR），UPR通過調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達，維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的穩(wěn)態(tài)。然而，當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激持續(xù)或過度時，UPR會激活凋亡信號通路，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡信號通路涉及多種分子，如蛋白激酶RNA樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（PERK）、肌醇需求酶1（IRE1）和活化轉(zhuǎn)錄因子6（ATF6）等。PERK激活后，可磷酸化真核起始因子2α（eIF2α），抑制蛋白質(zhì)合成，減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的負(fù)擔(dān)。同時，PERK還可以通過激活CHOP（CCAAT/增強子結(jié)合蛋白同源蛋白），上調(diào)促凋亡蛋白Bim的表達，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。IRE1激活后，可通過剪切X盒結(jié)合蛋白1（XBP1）的mRNA，產(chǎn)生具有活性的sXBP1，調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白的表達。IRE1還可以通過與TRAF2（腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子2）結(jié)合，激活JNK（c-Jun氨基末端激酶）信號通路，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。ATF6激活后，可轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達，包括促凋亡基因和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因。細(xì)胞凋亡的調(diào)控是一個復(fù)雜的過程，涉及多種基因和信號通路的相互作用。除了上述Bcl-2家族蛋白和caspase家族蛋白外，p53基因在細(xì)胞凋亡的調(diào)控中也起著關(guān)鍵作用。p53是一種重要的腫瘤抑制基因，當(dāng)細(xì)胞受到DNA損傷、氧化應(yīng)激等刺激時，p53蛋白被激活。激活的p53可以通過多種方式誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。p53可以上調(diào)促凋亡蛋白Bax、Puma等的表達，同時下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，從而促進線粒體途徑的細(xì)胞凋亡。p53還可以直接作用于線粒體，增加線粒體膜的通透性，促進CytC的釋放。此外，p53還可以調(diào)節(jié)死亡受體Fas等的表達，增強外源性途徑的細(xì)胞凋亡。除了基因調(diào)控，細(xì)胞凋亡還受到多種信號通路的調(diào)節(jié)。如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要作用。MAPK信號通路主要包括細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK三條途徑。ERK信號通路通常與細(xì)胞的增殖和存活相關(guān)，在某些情況下，ERK的持續(xù)激活也可以抑制細(xì)胞凋亡。而JNK和p38MAPK信號通路則主要參與細(xì)胞應(yīng)激和凋亡反應(yīng)。當(dāng)細(xì)胞受到應(yīng)激刺激時，JNK和p38MAPK被激活，它們可以通過磷酸化多種底物，包括轉(zhuǎn)錄因子、Bcl-2家族蛋白等，調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡。PI3K/Akt信號通路也是細(xì)胞凋亡的重要調(diào)節(jié)通路之一。PI3K被激活后，可催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3招募并激活A(yù)kt，Akt通過磷酸化多種底物，如Bad、FoxO等，抑制細(xì)胞凋亡。Bad是一種促凋亡蛋白，被Akt磷酸化后，與14-3-3蛋白結(jié)合，失去促凋亡活性。FoxO是一種轉(zhuǎn)錄因子，被Akt磷酸化后，從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)，失去轉(zhuǎn)錄活性，從而抑制其下游促凋亡基因的表達。4.3.2二甲雙胍促進肺腺癌細(xì)胞凋亡的機制二甲雙胍能夠通過多種機制促進肺腺癌細(xì)胞凋亡，這為其在肺腺癌治療中的應(yīng)用提供了重要的理論依據(jù)。研究表明，二甲雙胍可以激活A(yù)MPK信號通路，進而調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達和活性。如前文所述，二甲雙胍抑制線粒體呼吸鏈復(fù)合物I，使細(xì)胞內(nèi)ATP合成減少，AMP/ATP比值升高，從而激活A(yù)MPK?；罨腁MPK可以直接或間接調(diào)節(jié)多個與細(xì)胞凋亡相關(guān)的蛋白。AMPK可以磷酸化并激活腫瘤抑制蛋白TSC2，TSC2抑制小G蛋白Rheb的活性，Rheb是mTOR的上游激活因子，Rheb活性被抑制后，mTOR的活性也隨之降低。mTOR是細(xì)胞生長和代謝的重要調(diào)節(jié)因子，同時也參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控。mTOR活性降低后，可下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，上調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達，從而促進細(xì)胞凋亡。此外，AMPK還可以直接磷酸化Bax，增強其促凋亡活性。研究發(fā)現(xiàn)，AMPK磷酸化Bax的Ser184位點，促進Bax在線粒體外膜上的寡聚化，增加線粒體膜的通透性，促進CytC的釋放，進而激活caspase-9和caspase-3，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。二甲雙胍還可以通過調(diào)節(jié)其他信號通路來促進肺腺癌細(xì)胞凋亡。有研究表明，二甲雙胍可以抑制PI3K/Akt信號通路。PI3K/Akt信號通路在腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和凋亡中起著重要作用。二甲雙胍處理肺腺癌細(xì)胞后，可降低PI3K的活性，減少PIP3的生成，從而抑制Akt的激活。Akt活性被抑制后，其對下游促凋亡蛋白Bad的磷酸化作用減弱，Bad得以釋放并發(fā)揮促凋亡作用。Bad可以與Bcl-2或Bcl-XL結(jié)合，形成異源二聚體，解除Bcl-2或Bcl-XL對Bax的抑制作用，促進線粒體途徑的細(xì)胞凋亡。此外，Akt活性被抑制后，還可以導(dǎo)致FoxO轉(zhuǎn)錄因子的去磷酸化，使其進入細(xì)胞核，上調(diào)促凋亡基因Bim、PUMA等的表達，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。二甲雙胍還可能通過調(diào)節(jié)miRNA的表達來影響肺腺癌細(xì)胞凋亡。miRNA是一類內(nèi)源性非編碼小分子RNA，通過與靶mRNA的互補配對，抑制mRNA的翻譯或促進其降解，從而調(diào)節(jié)基因表達。研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍可以上調(diào)miR-34a的表達。miR-34a是一種具有腫瘤抑制作用的miRNA，它可以靶向作用于多個與細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因，如Bcl-2、SIRT1等。miR-34a通過與Bcl-2mRNA的3'非翻譯區(qū)（3'UTR）結(jié)合，抑制Bcl-2的翻譯過程，降低Bcl-2蛋白的表達，促進細(xì)胞凋亡。miR-34a還可以通過抑制SIRT1的表達，間接激活p53信號通路，上調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。此外，二甲雙胍還可能通過調(diào)節(jié)其他miRNA的表達，如miR-15a、miR-16等，來影響肺腺癌細(xì)胞凋亡。這些miRNA在細(xì)胞凋亡中也發(fā)揮著重要作用，它們可以通過靶向作用于相關(guān)基因，調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡信號通路。4.4調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境4.4.1腫瘤微環(huán)境的組成與作用腫瘤微環(huán)境（TumorMicroenvironment，TME）是腫瘤細(xì)胞生長、增殖和轉(zhuǎn)移的重要場所，它是一個由腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞以及細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞因子、趨化因子和代謝產(chǎn)物等組成的復(fù)雜生態(tài)系統(tǒng)。腫瘤細(xì)胞作為TME的核心組成部分，具有異常的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力，其生物學(xué)行為受到微環(huán)境中多種因素的影響。免疫細(xì)胞在TME中種類繁多，包括T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞（DC）等。這些免疫細(xì)胞在腫瘤免疫監(jiān)視和免疫逃逸過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。T淋巴細(xì)胞中的CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）能夠識別并殺傷腫瘤細(xì)胞，是抗腫瘤免疫的重要效應(yīng)細(xì)胞。然而，在TME中，腫瘤細(xì)胞可以通過多種機制抑制CTL的活性，如分泌免疫抑制因子、表達免疫檢查點分子等，從而實現(xiàn)免疫逃逸。巨噬細(xì)胞是TME中數(shù)量最多的免疫細(xì)胞之一，根據(jù)其功能和表型可分為M1型和M2型。M1型巨噬細(xì)胞具有抗腫瘤活性，能夠分泌促炎細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等，激活免疫細(xì)胞，殺傷腫瘤細(xì)胞。而M2型巨噬細(xì)胞則具有免疫抑制作用，可分泌免疫抑制因子，如白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等，促進腫瘤細(xì)胞的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。間質(zhì)細(xì)胞包括腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）、脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等。CAFs是TME中主要的間質(zhì)細(xì)胞類型，它們可以分泌多種細(xì)胞因子和生長因子，如血小板衍生生長因子（PDGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）等，促進腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和血管生成。脂肪細(xì)胞在TME中也發(fā)揮著重要作用，它們可以通過分泌脂肪酸、脂肪因子等，為腫瘤細(xì)胞提供能量和營養(yǎng)物質(zhì)，促進腫瘤的生長。內(nèi)皮細(xì)胞則參與腫瘤血管的形成，腫瘤血管為腫瘤細(xì)胞提供氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，同時也是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要途徑。細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）是TME的重要組成部分，它由膠原蛋白、纖連蛋白、層粘連蛋白等多種蛋白質(zhì)和多糖組成。ECM不僅為腫瘤細(xì)胞提供物理支撐，還可以通過與腫瘤細(xì)胞表面的受體相互作用，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。腫瘤細(xì)胞可以通過分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等酶類，降解ECM，從而促進腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。細(xì)胞因子和趨化因子在TME中形成復(fù)雜的信號網(wǎng)絡(luò)，它們可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的功能。如血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是一種重要的促血管生成因子，它可以促進腫瘤血管的生成，為腫瘤細(xì)胞提供營養(yǎng)和氧氣。趨化因子如CCL2、CXCL8等可以招募免疫細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞到腫瘤部位，調(diào)節(jié)腫瘤免疫和腫瘤微環(huán)境的組成。腫瘤細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，如乳酸、氫離子等，也會影響TME的酸堿度和代謝狀態(tài)。腫瘤細(xì)胞的糖酵解代謝增強，會產(chǎn)生大量乳酸，導(dǎo)致TME酸化。酸性微環(huán)境不僅有利于腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，還可以抑制免疫細(xì)胞的功能，促進腫瘤的免疫逃逸。腫瘤微環(huán)境對腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和免疫逃逸具有至關(guān)重要的影響。在腫瘤生長方面，TME中的各種細(xì)胞和分子為腫瘤細(xì)胞提供了適宜的生長條件。腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞分泌的生長因子和細(xì)胞因子，如表皮生長因子（EGF）、胰島素樣生長因子（IGF）等，能夠刺激腫瘤細(xì)胞的增殖。腫瘤血管的生成則為腫瘤細(xì)胞提供了充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，滿足腫瘤細(xì)胞快速生長的需求。在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中，TME起著關(guān)鍵的促進作用。腫瘤細(xì)胞通過與ECM和間質(zhì)細(xì)胞相互作用，獲得了更強的侵襲和遷移能力。腫瘤細(xì)胞分泌的MMPs可以降解ECM，為腫瘤細(xì)胞的遷移開辟道路。腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子和趨化因子可以招募免疫細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞，形成有利于腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的微環(huán)境。腫瘤血管和淋巴管的生成則為腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供了途徑。腫瘤微環(huán)境還在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮著重要作用。腫瘤細(xì)胞通過分泌免疫抑制因子，如TGF-β、IL-10等，抑制免疫細(xì)胞的活性。腫瘤細(xì)胞表達的免疫檢查點分子，如程序性死亡受體1（PD-1）及其配體（PD-L1），可以與免疫細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，抑制免疫細(xì)胞的活化和功能，從而使腫瘤細(xì)胞逃避機體的免疫監(jiān)視和殺傷。4.4.2二甲雙胍對腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的影響二甲雙胍能夠調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞功能，增強機體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，這為其在肺腺癌治療中的應(yīng)用提供了新的理論依據(jù)。研究表明，二甲雙胍可以促進T淋巴細(xì)胞的活化和增殖。在肺腺癌小鼠模型中，給予二甲雙胍處理后，腫瘤組織中CD4+輔助性T淋巴細(xì)胞（Th）和CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）的數(shù)量明顯增加，且其活性增強。二甲雙胍可能通過激活A(yù)MPK信號通路，調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的代謝和功能?；罨腁MPK可以促進T淋巴細(xì)胞的有氧代謝，增強其能量供應(yīng)，從而提高T淋巴細(xì)胞的活化和增殖能力。此外，二甲雙胍還可以調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的分化，促進Th1型細(xì)胞的分化，抑制Th2型和Th17型細(xì)胞的分化。Th1型細(xì)胞主要分泌干擾素-γ（IFN-γ）等細(xì)胞因子，能夠增強抗腫瘤免疫反應(yīng)；而Th2型和Th17型細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，如IL-4、IL-17等，可能會抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)。二甲雙胍通過調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的分化，使Th1/Th2和Th1/Th17比值升高，有利于增強機體的抗腫瘤免疫功能。二甲雙胍對巨噬細(xì)胞的極化也具有重要調(diào)節(jié)作用。在腫瘤微環(huán)境中，巨噬細(xì)胞通常向具有免疫抑制作用的M2型極化，促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍可以抑制巨噬細(xì)胞向M2型極化，促進其向具有抗腫瘤活性的M1型極化。二甲雙胍可能通過抑制NF-κB信號通路，減少M2型巨噬細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達，如IL-10、TGF-β等。同時，二甲雙胍可以激活A(yù)MPK信號通路，上調(diào)M1型巨噬細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達，如TNF-α、IL-12等。M1型巨噬細(xì)胞極化增強后，能夠分泌更多的促炎細(xì)胞因子，激活免疫細(xì)胞，殺傷腫瘤細(xì)胞，從而抑制腫瘤的生長。此外，二甲雙胍還可以增強自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）的活性。NK細(xì)胞是機體固有免疫的重要組成部分，能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞。研究表明，二甲雙胍處理后，NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性明顯增強，其對肺腺癌細(xì)胞的殺傷能力顯著提高。二甲雙胍可能通過調(diào)節(jié)NK細(xì)胞表面受體的表達，如NKG2D等，增強NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的識別和殺傷能力。此外，二甲雙胍還可以促進NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，如IFN-γ等，增強其抗腫瘤活性。二甲雙胍還可以調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞（DC）的功能。DC是體內(nèi)功能最強的抗原呈遞細(xì)胞，能夠攝取、加工和呈遞抗原，激活T淋巴細(xì)胞，啟動適應(yīng)性免疫反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍可以促進DC的成熟和活化，增強