Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)影響的研究一、引言1.1研究背景與意義糖尿病視網(wǎng)膜病變（DiabeticRetinopathy，DR）作為糖尿病最為常見且嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一，已成為全球范圍內(nèi)導(dǎo)致視力損害和失明的重要原因。隨著全球糖尿病發(fā)病率的不斷攀升，DR的患病率也呈顯著上升趨勢。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全球糖尿病患者數(shù)量已超4億，而DR在糖尿病患者中的發(fā)病率高達(dá)22.27%。在中國，糖尿病人群中DR患病率為23%，糖尿病病程超過10年的患者，視網(wǎng)膜病變發(fā)生率更是高達(dá)90%，因DR導(dǎo)致患者失明的比例為16.4%。這些數(shù)據(jù)充分表明，DR已對全球公共衛(wèi)生構(gòu)成嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，給患者及其家庭帶來沉重負(fù)擔(dān)，同時(shí)也給社會醫(yī)療資源造成巨大壓力。腎素-血管緊張素系統(tǒng)（Renin-AngiotensinSystem，RAS）在DR的發(fā)病機(jī)制中扮演著關(guān)鍵角色。視網(wǎng)膜中存在獨(dú)立的RAS系統(tǒng)，在DR發(fā)生發(fā)展過程中，視網(wǎng)膜局部血管緊張素Ⅱ（AngiotensinⅡ，ATⅡ）及血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（AngiotensinConvertingEnzyme，ACE）活性顯著增高。ATⅡ與其受體結(jié)合后，可引發(fā)一系列病理生理反應(yīng)，如促進(jìn)炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙，進(jìn)而破壞血-視網(wǎng)膜屏障，促進(jìn)視網(wǎng)膜新生血管形成，最終導(dǎo)致DR的發(fā)生與發(fā)展。因此，抑制RAS系統(tǒng)成為防治DR的重要策略之一。血管緊張素（1-7）（Angiotensin(1-7)，Ang(1-7)）作為RAS系統(tǒng)的重要活性肽，具有與ATⅡ相反的生物學(xué)效應(yīng)。它可通過Mas受體發(fā)揮舒張血管、抗炎、抗氧化應(yīng)激以及抗纖維化等作用，從而對視網(wǎng)膜血管起到保護(hù)作用。培哚普利作為一種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（AngiotensinConvertingEnzymeInhibitors，ACEI），能夠抑制ACE的活性，減少ATⅡ的生成，從而阻斷RAS系統(tǒng)的激活，發(fā)揮降壓以及靶器官保護(hù)作用。既往研究表明，ACEI類藥物在防治DR方面具有一定效果，可降低視網(wǎng)膜病變進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)，促進(jìn)視網(wǎng)膜病變的恢復(fù)。然而，關(guān)于Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TransformingGrowthFactor-β1，TGF-β1）表達(dá)的影響及其作用機(jī)制，仍有待進(jìn)一步深入研究。TGF-β1是一種多功能細(xì)胞因子，在DR的發(fā)病過程中起著關(guān)鍵作用。高糖環(huán)境可誘導(dǎo)視網(wǎng)膜組織中TGF-β1表達(dá)上調(diào)，TGF-β1過度表達(dá)可促進(jìn)視網(wǎng)膜細(xì)胞外基質(zhì)合成增加，導(dǎo)致視網(wǎng)膜纖維化，同時(shí)還可促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子（VascularEndothelialGrowthFactor，VEGF）表達(dá)，誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管形成，加重DR的病情。因此，深入研究Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的影響，對于揭示DR的發(fā)病機(jī)制以及尋找有效的治療靶點(diǎn)具有重要的理論和實(shí)踐意義。本研究旨在通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀察Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的影響，探討其對DR的保護(hù)作用及潛在機(jī)制，為DR的防治提供新的理論依據(jù)和治療策略。研究成果有望為臨床治療DR提供新思路，改善患者視力預(yù)后，減輕社會醫(yī)療負(fù)擔(dān)，具有重要的科學(xué)價(jià)值和臨床應(yīng)用前景。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在糖尿病視網(wǎng)膜病變的研究領(lǐng)域，國內(nèi)外學(xué)者已取得了豐碩成果。國外方面，對DR發(fā)病機(jī)制的研究較為深入，諸多研究表明，高血糖引發(fā)的一系列代謝紊亂，如多元醇通路激活、蛋白激酶C（PKC）途徑激活、晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）積累等，在DR的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。同時(shí)，炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激以及細(xì)胞凋亡等病理過程也被證實(shí)與DR密切相關(guān)。在治療方面，激光光凝治療作為DR的傳統(tǒng)治療方法，已被廣泛應(yīng)用多年，能夠有效減少視網(wǎng)膜新生血管形成，降低視力喪失風(fēng)險(xiǎn)?？筕EGF藥物的出現(xiàn)則為DR的治療帶來了新的突破，大量臨床研究表明，抗VEGF藥物玻璃體腔內(nèi)注射可顯著減輕黃斑水腫，提高患者視力。國內(nèi)研究在DR領(lǐng)域同樣成果斐然。通過對大量糖尿病患者的臨床觀察和研究，進(jìn)一步明確了DR的危險(xiǎn)因素，除血糖、血壓、血脂等傳統(tǒng)因素外，遺傳因素、生活方式等也被證實(shí)與DR的發(fā)病密切相關(guān)。在發(fā)病機(jī)制研究方面，國內(nèi)學(xué)者從多個(gè)角度進(jìn)行探索，發(fā)現(xiàn)一些新的信號通路和分子靶點(diǎn)，為DR的治療提供了新的潛在方向。在治療手段上，國內(nèi)積極引進(jìn)和應(yīng)用國際先進(jìn)技術(shù)，同時(shí)開展相關(guān)臨床研究，驗(yàn)證了激光光凝、抗VEGF藥物等治療方法在國內(nèi)患者中的有效性和安全性。TGF-β1作為DR發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵細(xì)胞因子，受到了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。國外研究發(fā)現(xiàn)，高糖環(huán)境可通過多種信號通路誘導(dǎo)視網(wǎng)膜細(xì)胞中TGF-β1表達(dá)上調(diào)，如PKC通路、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路等。TGF-β1過度表達(dá)可激活下游信號分子，如Smad蛋白家族，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)合成，導(dǎo)致視網(wǎng)膜纖維化。此外，TGF-β1還可通過旁分泌和自分泌方式作用于視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)VEGF表達(dá)，誘導(dǎo)新生血管形成。國內(nèi)研究也證實(shí)了TGF-β1在DR中的重要作用，并進(jìn)一步探討了其在不同階段DR中的表達(dá)變化規(guī)律。研究發(fā)現(xiàn)，隨著DR病情進(jìn)展，視網(wǎng)膜中TGF-β1表達(dá)逐漸升高，與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。關(guān)于Ang(1-7)對糖尿病視網(wǎng)膜的保護(hù)作用，國外已有部分研究報(bào)道。研究表明，Ang(1-7)可通過Mas受體激活下游信號通路，如磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路、一氧化氮合酶（NOS）/一氧化氮（NO）通路等，發(fā)揮抗炎、抗氧化應(yīng)激以及抗纖維化作用，從而減輕糖尿病視網(wǎng)膜損傷。國內(nèi)研究也發(fā)現(xiàn)，外源性給予Ang(1-7)可改善糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管功能，減少視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和炎癥相關(guān)因子表達(dá)有關(guān)。培哚普利作為一種ACEI類藥物，在心血管疾病領(lǐng)域的應(yīng)用已十分廣泛，其對糖尿病視網(wǎng)膜病變的保護(hù)作用也逐漸受到關(guān)注。國外研究顯示，培哚普利可通過抑制ACE活性，減少ATⅡ生成，從而阻斷RAS系統(tǒng)激活，降低視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，改善血-視網(wǎng)膜屏障功能。國內(nèi)相關(guān)研究也證實(shí)了培哚普利對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)JAK2/STAT3信號通路、抑制VEGF表達(dá)有關(guān)。盡管國內(nèi)外在DR、TGF-β1以及Ang(1-7)、培哚普利相關(guān)研究方面已取得一定進(jìn)展，但仍存在一些不足。目前對于Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的影響及作用機(jī)制研究尚不深入，尤其是兩者聯(lián)合應(yīng)用的研究相對較少，其協(xié)同作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步明確。此外，現(xiàn)有研究多集中在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)層面，臨床研究相對匱乏，缺乏大規(guī)模、多中心的臨床試驗(yàn)來驗(yàn)證其有效性和安全性。因此，深入研究Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的影響，具有重要的理論和實(shí)踐意義，有望為DR的防治提供新的策略和方法。1.3研究目標(biāo)與內(nèi)容本研究的主要目標(biāo)是深入揭示Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的影響及其潛在作用機(jī)制，為糖尿病視網(wǎng)膜病變的防治提供堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)和切實(shí)可行的治療策略。具體研究內(nèi)容如下：建立糖尿病大鼠模型：選用健康的雄性8周齡Wistar大鼠，采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ，65mg/kg）的經(jīng)典方法建立糖尿病大鼠模型。造模成功后，通過檢測大鼠血糖水平（空腹血糖≥16.7mmol/L）、多飲多食多尿及體重下降等典型癥狀，確認(rèn)糖尿病模型建立成功。這一模型的建立是后續(xù)研究的基礎(chǔ)，能夠模擬人類糖尿病的病理生理過程，為研究糖尿病視網(wǎng)膜病變提供可靠的動(dòng)物模型。分組與干預(yù)：將成功建模的糖尿病大鼠及正常對照組大鼠隨機(jī)分為5組，每組數(shù)量依據(jù)實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)要求合理確定。a組為Ang(1-7)組，以400ng?kg?1?min?1的劑量通過微量泵持續(xù)皮下輸注Ang(1-7)；b組為培哚普利組，按2mg?kg?1?d?1的劑量給予培哚普利灌胃；c組為Ang(1-7)+培哚普利組，同時(shí)給予Ang(1-7)（400ng?kg?1?min?1皮下輸注）和培哚普利（2mg?kg?1?d?1灌胃）；d組為糖尿病對照組，給予等量生理鹽水皮下輸注和灌胃；e組為正常對照組，同樣給予等量生理鹽水處理。干預(yù)時(shí)間設(shè)定為8周，旨在觀察不同處理因素在較長時(shí)間內(nèi)對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變的影響。在干預(yù)期間，密切監(jiān)測大鼠的體重、血糖、飲食及活動(dòng)等一般情況，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的健康狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。檢測視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)：干預(yù)結(jié)束后，迅速摘取大鼠眼球，分離視網(wǎng)膜組織。運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)，通過特異性抗體標(biāo)記視網(wǎng)膜組織中的TGF-β1蛋白，在顯微鏡下觀察其表達(dá)部位和強(qiáng)度，以半定量的方式分析不同組間TGF-β1蛋白表達(dá)的差異。同時(shí)采用蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）技術(shù)，對視網(wǎng)膜組織中的TGF-β1蛋白進(jìn)行定量檢測，進(jìn)一步準(zhǔn)確評估各組TGF-β1蛋白的表達(dá)水平。此外，利用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR）技術(shù)，檢測視網(wǎng)膜組織中TGF-β1mRNA的表達(dá)量，從基因轉(zhuǎn)錄水平探究不同處理對TGF-β1表達(dá)的影響。這些檢測方法相互補(bǔ)充，能夠全面、準(zhǔn)確地揭示Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的調(diào)控作用。分析Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜的保護(hù)作用機(jī)制：在檢測TGF-β1表達(dá)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜的保護(hù)作用機(jī)制。通過檢測視網(wǎng)膜組織中與炎癥反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞因子（如腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-6等）、氧化應(yīng)激指標(biāo)（如超氧化物歧化酶、丙二醛等）以及與纖維化相關(guān)的蛋白（如膠原蛋白Ⅰ、Ⅲ等）的表達(dá)變化，分析Ang(1-7)及培哚普利是否通過抑制炎癥反應(yīng)、減輕氧化應(yīng)激以及抑制纖維化等途徑，降低糖尿病視網(wǎng)膜中TGF-β1的表達(dá)，從而發(fā)揮對糖尿病視網(wǎng)膜的保護(hù)作用。此外，還將研究Ang(1-7)及培哚普利對相關(guān)信號通路（如PI3K/Akt、MAPK等信號通路）的影響，深入探究其在分子層面的作用機(jī)制，為闡明其保護(hù)作用的內(nèi)在機(jī)制提供全面的理論依據(jù)。1.4研究方法與技術(shù)路線本研究采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法，具體研究方法如下：動(dòng)物模型建立：選用健康的雄性8周齡Wistar大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，禁食不禁水12h，一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ，65mg/kg）溶液，溶液需現(xiàn)用現(xiàn)配，以0.1mol/L枸櫞酸緩沖液（pH4.5）配制。注射后72h測量大鼠尾靜脈血糖，若空腹血糖≥16.7mmol/L，且出現(xiàn)多飲、多食、多尿及體重下降等典型糖尿病癥狀，則判定糖尿病模型建立成功。將造模成功的糖尿病大鼠隨機(jī)分為4組，同時(shí)設(shè)立正常對照組，每組10只大鼠。分組與給藥：a組為Ang(1-7)組，通過微量泵以400ng?kg?1?min?1的劑量持續(xù)皮下輸注Ang(1-7)，微量泵型號為[具體型號]，輸注時(shí)間為8周；b組為培哚普利組，按2mg?kg?1?d?1的劑量給予培哚普利灌胃，灌胃操作需輕柔，避免損傷大鼠食管，給藥時(shí)間為8周；c組為Ang(1-7)+培哚普利組，同時(shí)給予Ang(1-7)（400ng?kg?1?min?1皮下輸注）和培哚普利（2mg?kg?1?d?1灌胃），干預(yù)時(shí)間同樣為8周；d組為糖尿病對照組，給予等量生理鹽水皮下輸注和灌胃；e組為正常對照組，給予等量生理鹽水處理。在干預(yù)期間，每周測量一次大鼠體重、血糖，并觀察其飲食、活動(dòng)等一般情況，詳細(xì)記錄數(shù)據(jù)，以便分析藥物干預(yù)對大鼠整體健康狀況的影響。標(biāo)本采集：干預(yù)8周后，大鼠經(jīng)10%水合氯醛（3ml/kg）腹腔注射麻醉，迅速摘取眼球，置于預(yù)冷的生理鹽水中沖洗，去除表面血跡和雜質(zhì)。然后在解剖顯微鏡下小心分離視網(wǎng)膜組織，將部分視網(wǎng)膜組織放入4%多聚甲醛溶液中固定，用于免疫組織化學(xué)檢測；另一部分視網(wǎng)膜組織迅速放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于Westernblot和RT-qPCR檢測。檢測指標(biāo)與方法：運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測視網(wǎng)膜TGF-β1蛋白表達(dá)。將固定好的視網(wǎng)膜組織進(jìn)行脫水、透明、浸蠟、包埋等處理，制成石蠟切片。切片脫蠟至水后，采用檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，3%過氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，正常山羊血清封閉非特異性抗原。滴加兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗體（1:100稀釋），4℃孵育過夜。次日，滴加生物素標(biāo)記的山羊抗兔二抗，37℃孵育30min，然后滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，37℃孵育30min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，鹽酸酒精分化，氨水返藍(lán)，脫水、透明后封片。在顯微鏡下觀察，TGF-β1陽性表達(dá)產(chǎn)物為棕黃色顆粒，采用Image-ProPlus圖像分析軟件對陽性染色區(qū)域進(jìn)行分析，計(jì)算平均光密度值，以半定量評估TGF-β1蛋白表達(dá)水平。蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）檢測：從-80℃冰箱取出視網(wǎng)膜組織，加入適量RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑），冰上勻漿裂解30min，然后12000r/min、4℃離心15min，取上清液即為總蛋白。采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，將蛋白樣品與5×上樣緩沖液按4:1比例混合，煮沸變性5min。取適量蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳，電泳結(jié)束后將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。5%脫脂奶粉封閉1h，分別加入兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗體（1:1000稀釋）和內(nèi)參抗體β-actin（1:5000稀釋），4℃孵育過夜。次日，TBST洗膜3次，每次10min，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔二抗（1:5000稀釋），37℃孵育1h，TBST洗膜3次，每次10min。采用化學(xué)發(fā)光底物顯色，凝膠成像系統(tǒng)拍照，ImageJ軟件分析條帶灰度值，以TGF-β1蛋白條帶灰度值與β-actin蛋白條帶灰度值的比值表示TGF-β1蛋白相對表達(dá)量。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR）檢測：使用TRIzol試劑提取視網(wǎng)膜組織總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，采用SYBRGreen熒光染料法進(jìn)行qPCR擴(kuò)增。引物序列根據(jù)GenBank中大鼠TGF-β1和內(nèi)參基因GAPDH的mRNA序列設(shè)計(jì)，由[引物合成公司名稱]合成。TGF-β1上游引物：5'-[具體序列]-3'，下游引物：5'-[具體序列]-3'；GAPDH上游引物：5'-[具體序列]-3'，下游引物：5'-[具體序列]-3'。反應(yīng)體系為20μl，包括SYBRGreenMix10μl，上下游引物各0.5μl，cDNA模板1μl，ddH?O8μl。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30s，95℃變性5s，60℃退火30s，共40個(gè)循環(huán)。采用2?ΔΔCt法計(jì)算TGF-β1mRNA相對表達(dá)量。本研究的技術(shù)路線如圖1所示：首先進(jìn)行動(dòng)物模型建立，篩選出合格的糖尿病大鼠和正常對照組大鼠；然后進(jìn)行分組與給藥干預(yù)，持續(xù)8周；干預(yù)結(jié)束后采集視網(wǎng)膜組織標(biāo)本，分別進(jìn)行免疫組織化學(xué)、Westernblot和RT-qPCR檢測，以全面分析Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的影響；最后對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，得出研究結(jié)論，為糖尿病視網(wǎng)膜病變的防治提供理論依據(jù)和治療策略。[此處插入技術(shù)路線圖]二、糖尿病視網(wǎng)膜病變與相關(guān)機(jī)制概述2.1糖尿病視網(wǎng)膜病變簡介糖尿病視網(wǎng)膜病變是糖尿病引發(fā)的一種嚴(yán)重微血管并發(fā)癥，主要是由于高血糖狀態(tài)下視網(wǎng)膜微血管發(fā)生病變所致。其發(fā)病過程較為復(fù)雜，通常可分為非增殖期和增殖期兩個(gè)主要階段。在非增殖期，早期病變較為隱匿，患者往往無明顯自覺癥狀，或僅表現(xiàn)出輕微視力波動(dòng)。隨著病情進(jìn)展，視網(wǎng)膜微血管會出現(xiàn)一系列病理改變，如微動(dòng)脈瘤形成，這是糖尿病視網(wǎng)膜病變最早出現(xiàn)的特征性改變，表現(xiàn)為視網(wǎng)膜上的小紅點(diǎn)，是由于視網(wǎng)膜毛細(xì)血管壁的局限性膨出所致；視網(wǎng)膜出血，可為點(diǎn)狀、片狀或火焰狀，是由于微血管破裂引起；硬性滲出，呈黃白色，邊界清晰，是血管內(nèi)的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)滲出到視網(wǎng)膜組織中形成的。此階段若能及時(shí)發(fā)現(xiàn)并有效控制血糖、血壓等危險(xiǎn)因素，病變有可能得到延緩或逆轉(zhuǎn)。當(dāng)病情進(jìn)一步發(fā)展進(jìn)入增殖期，視網(wǎng)膜病變則更為嚴(yán)重。此時(shí)，視網(wǎng)膜會出現(xiàn)新生血管，這些新生血管結(jié)構(gòu)脆弱，極易破裂出血，導(dǎo)致玻璃體積血，患者可突然出現(xiàn)視力急劇下降、眼前黑影遮擋等癥狀。隨著病程延長，新生血管會逐漸形成纖維增殖膜，這些增殖膜的收縮可牽拉視網(wǎng)膜，導(dǎo)致牽拉性視網(wǎng)膜脫離，最終可導(dǎo)致患者失明。糖尿病視網(wǎng)膜病變對患者視力的影響是漸進(jìn)性且不可逆的。在病變早期，視力下降可能較為緩慢，對患者日常生活影響較小，容易被忽視。然而，一旦病變發(fā)展到增殖期，視力下降速度加快，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，如無法正常閱讀、駕駛、識別面部表情等，給患者的日常生活和工作帶來極大不便。據(jù)統(tǒng)計(jì)，糖尿病病程超過10年的患者，視網(wǎng)膜病變發(fā)生率高達(dá)90%，因糖尿病視網(wǎng)膜病變導(dǎo)致患者失明的比例為16.4%。失明不僅使患者失去獨(dú)立生活能力，還會給患者帶來沉重的心理負(fù)擔(dān)，增加家庭和社會的照顧成本。因此，早期診斷和干預(yù)糖尿病視網(wǎng)膜病變對于保護(hù)患者視力、提高生活質(zhì)量具有至關(guān)重要的意義。2.2TGF-β1在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的作用TGF-β1作為一種多功能細(xì)胞因子，在糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機(jī)制中扮演著至關(guān)重要的角色。正常生理狀態(tài)下，TGF-β1在視網(wǎng)膜組織中維持著相對穩(wěn)定的低水平表達(dá)，參與視網(wǎng)膜細(xì)胞的生長、分化、凋亡以及細(xì)胞外基質(zhì)的代謝等生理過程，對維持視網(wǎng)膜的正常結(jié)構(gòu)和功能起著重要的調(diào)節(jié)作用。然而，在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生發(fā)展過程中，高血糖、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等多種病理因素可誘導(dǎo)視網(wǎng)膜組織中TGF-β1表達(dá)異常升高。高血糖環(huán)境可通過激活多元醇通路，使細(xì)胞內(nèi)山梨醇和果糖堆積，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)滲透壓升高，細(xì)胞膜損傷，進(jìn)而激活TGF-β1基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。同時(shí)，高血糖還可促進(jìn)晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）的生成，AGEs與細(xì)胞表面的受體結(jié)合后，可激活細(xì)胞內(nèi)的信號通路，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路、蛋白激酶C（PKC）通路等，促進(jìn)TGF-β1的表達(dá)。此外，氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)也是導(dǎo)致TGF-β1表達(dá)上調(diào)的重要因素。在糖尿病狀態(tài)下，視網(wǎng)膜組織中活性氧（ROS）產(chǎn)生過多，抗氧化酶活性降低，氧化應(yīng)激水平升高，ROS可直接損傷細(xì)胞DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，激活細(xì)胞內(nèi)的應(yīng)激信號通路，誘導(dǎo)TGF-β1表達(dá)。炎癥反應(yīng)過程中，炎癥細(xì)胞釋放的多種細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）等，也可刺激視網(wǎng)膜細(xì)胞分泌TGF-β1。TGF-β1表達(dá)上調(diào)后，可通過多種途徑參與糖尿病視網(wǎng)膜病變的病理過程。在視網(wǎng)膜纖維化方面，TGF-β1可促進(jìn)視網(wǎng)膜細(xì)胞外基質(zhì)成分，如膠原蛋白Ⅰ、Ⅲ、纖維連接蛋白等的合成增加，同時(shí)抑制基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的活性，減少細(xì)胞外基質(zhì)的降解，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)在視網(wǎng)膜組織中過度沉積，從而引起視網(wǎng)膜纖維化。在視網(wǎng)膜新生血管形成方面，TGF-β1可通過旁分泌和自分泌方式作用于視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達(dá)和分泌。VEGF是一種強(qiáng)效的血管生成因子，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，從而誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管形成。此外，TGF-β1還可調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性，使血管內(nèi)的蛋白質(zhì)和液體滲出到組織間隙，導(dǎo)致視網(wǎng)膜水腫，進(jìn)一步加重視網(wǎng)膜病變。TGF-β1還可影響視網(wǎng)膜細(xì)胞的功能和存活。研究表明，TGF-β1可抑制視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的生長和存活，促進(jìn)其凋亡，導(dǎo)致視網(wǎng)膜神經(jīng)傳導(dǎo)功能受損。同時(shí)，TGF-β1還可影響視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的功能，使其屏障功能受損，分泌功能異常，從而影響視網(wǎng)膜的正常代謝和營養(yǎng)供應(yīng)。綜上所述，TGF-β1在糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用，其表達(dá)異常升高可導(dǎo)致視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)和功能的損害，深入研究TGF-β1的作用機(jī)制，對于尋找糖尿病視網(wǎng)膜病變的有效治療靶點(diǎn)具有重要意義。2.3腎素-血管緊張素系統(tǒng)與糖尿病視網(wǎng)膜病變腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）是人體內(nèi)重要的體液調(diào)節(jié)系統(tǒng)，在維持血壓穩(wěn)定、水電解質(zhì)平衡以及心血管和腎臟功能等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。傳統(tǒng)的RAS經(jīng)典途徑為：腎素作用于肝臟合成并釋放的血管緊張素原，使其轉(zhuǎn)化為血管緊張素Ⅰ（AngiotensinⅠ，ATⅠ）。在血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）的作用下，ATⅠ進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為血管緊張素Ⅱ（ATⅡ）。ATⅡ作為RAS的主要效應(yīng)分子，可與血管緊張素1型受體（AT1R）和血管緊張素2型受體（AT2R）結(jié)合，發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)。其中，與AT1R結(jié)合后，可導(dǎo)致血管收縮、醛固酮分泌增加、交感神經(jīng)活性增強(qiáng)，從而升高血壓；同時(shí)還可促進(jìn)細(xì)胞增殖、肥大，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，參與組織器官的損傷和重塑過程。近年來研究發(fā)現(xiàn)，在視網(wǎng)膜組織中存在獨(dú)立的RAS系統(tǒng)。視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞以及視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞等均可表達(dá)RAS的相關(guān)成分，包括腎素、血管緊張素原、ACE、ATⅡ以及AT1R和AT2R等。在糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）的發(fā)生發(fā)展過程中，視網(wǎng)膜局部RAS系統(tǒng)失衡起著重要作用。糖尿病狀態(tài)下，高血糖、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等因素可激活視網(wǎng)膜局部RAS，導(dǎo)致ATⅡ生成增加，ACE活性升高。ATⅡ通過多種途徑參與DR的病理過程。在血管方面，ATⅡ可直接作用于視網(wǎng)膜血管平滑肌細(xì)胞，使其收縮，導(dǎo)致血管阻力增加，血流減少。同時(shí)，ATⅡ還可損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，破壞血-視網(wǎng)膜屏障，使血管通透性增加，導(dǎo)致血漿蛋白和液體滲出到視網(wǎng)膜組織中，引起視網(wǎng)膜水腫和硬性滲出。此外，ATⅡ可促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）表達(dá)，誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管形成。在神經(jīng)方面，ATⅡ可影響視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的功能和存活，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致視網(wǎng)膜神經(jīng)傳導(dǎo)功能受損。同時(shí)，ATⅡ還可激活小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞，引發(fā)炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步損傷視網(wǎng)膜神經(jīng)組織。血管緊張素（1-7）（Ang(1-7)）作為RAS系統(tǒng)的重要活性肽，具有與ATⅡ相反的生物學(xué)效應(yīng)。Ang(1-7)主要通過與Mas受體結(jié)合發(fā)揮作用，可激活下游信號通路，如磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路、一氧化氮合酶（NOS）/一氧化氮（NO）通路等。這些信號通路的激活可促進(jìn)血管舒張，增加視網(wǎng)膜血流灌注；抑制炎癥反應(yīng)，減少炎癥細(xì)胞浸潤和炎癥因子釋放；減輕氧化應(yīng)激，降低活性氧（ROS）水平，從而對視網(wǎng)膜血管和神經(jīng)起到保護(hù)作用。培哚普利作為一種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI），能夠抑制ACE的活性，減少ATⅡ的生成。通過阻斷RAS系統(tǒng)的激活，培哚普利可降低視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，改善血-視網(wǎng)膜屏障功能。同時(shí)，培哚普利還可抑制VEGF的表達(dá)和分泌，減少視網(wǎng)膜新生血管形成。此外，培哚普利還可能通過調(diào)節(jié)其他信號通路，如JAK2/STAT3信號通路等，發(fā)揮對糖尿病視網(wǎng)膜的保護(hù)作用。綜上所述，RAS系統(tǒng)失衡在DR發(fā)病中起重要作用，Ang(1-7)和培哚普利可通過調(diào)節(jié)RAS系統(tǒng)，發(fā)揮對糖尿病視網(wǎng)膜的保護(hù)作用，但其具體作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究。三、Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究3.1實(shí)驗(yàn)材料與方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選用健康的雄性8周齡Wistar大鼠50只，體重200-220g，購自[動(dòng)物供應(yīng)商名稱]。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于溫度（22±2）℃、相對濕度（50±10）%的SPF級動(dòng)物房，晝夜節(jié)律為12h光照/12h黑暗，自由進(jìn)食和飲水。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。主要試劑：鏈脲佐菌素（STZ）購自[試劑公司1]，需低溫避光保存，使用時(shí)用0.1mol/L枸櫞酸緩沖液（pH4.5）現(xiàn)配現(xiàn)用；血管緊張素（1-7）（Ang(1-7)）購自[試劑公司2]，純度≥98%，保存于-20℃冰箱；培哚普利購自[試劑公司3]，以蒸餾水配制成相應(yīng)濃度的溶液；兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗體購自[抗體公司1]，工作濃度為1:100；生物素標(biāo)記的山羊抗兔二抗購自[抗體公司2]，工作濃度為1:200；辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液購自[試劑公司4]；DAB顯色試劑盒購自[試劑公司5]；RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑）購自[試劑公司6]；BCA蛋白定量試劑盒購自[試劑公司7]；PVDF膜購自[試劑公司8]；兔抗大鼠β-actin多克隆抗體購自[抗體公司3]，工作濃度為1:5000；辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔二抗（用于Westernblot）購自[抗體公司4]，工作濃度為1:5000；TRIzol試劑購自[試劑公司9]；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自[試劑公司10]；SYBRGreen熒光染料購自[試劑公司11]；引物由[引物合成公司]合成。主要儀器：血糖儀（[品牌及型號1]），用于檢測大鼠血糖；電子天平（[品牌及型號2]），精度為0.1g，用于稱量大鼠體重和試劑；微量泵（[品牌及型號3]），用于持續(xù)皮下輸注Ang(1-7)；離心機(jī)（[品牌及型號4]），最大轉(zhuǎn)速可達(dá)12000r/min，用于離心分離蛋白和RNA；酶標(biāo)儀（[品牌及型號5]），用于檢測蛋白濃度；PCR儀（[品牌及型號6]），用于逆轉(zhuǎn)錄和qPCR反應(yīng)；凝膠成像系統(tǒng)（[品牌及型號7]），用于Westernblot條帶成像和分析；熒光定量PCR儀（[品牌及型號8]），用于檢測mRNA表達(dá)量；顯微鏡（[品牌及型號9]），用于免疫組織化學(xué)結(jié)果觀察和拍照；圖像分析軟件（Image-ProPlus、ImageJ），用于分析免疫組織化學(xué)和Westernblot結(jié)果。糖尿病大鼠模型建立：大鼠禁食不禁水12h后，一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ，65mg/kg）溶液。注射后72h測量大鼠尾靜脈血糖，若空腹血糖≥16.7mmol/L，且出現(xiàn)多飲、多食、多尿及體重下降等典型糖尿病癥狀，則判定糖尿病模型建立成功。將造模成功的糖尿病大鼠隨機(jī)分為4組，同時(shí)設(shè)立正常對照組，每組10只大鼠。動(dòng)物分組及給藥：Ang(1-7)組：通過微量泵以400ng?kg?1?min?1的劑量持續(xù)皮下輸注Ang(1-7)，微量泵型號為[具體型號]，輸注時(shí)間為8周。培哚普利組：按2mg?kg?1?d?1的劑量給予培哚普利灌胃，灌胃操作需輕柔，避免損傷大鼠食管，給藥時(shí)間為8周。Ang(1-7)+培哚普利組：同時(shí)給予Ang(1-7)（400ng?kg?1?min?1皮下輸注）和培哚普利（2mg?kg?1?d?1灌胃），干預(yù)時(shí)間同樣為8周。糖尿病對照組：給予等量生理鹽水皮下輸注和灌胃。正常對照組：給予等量生理鹽水處理。在干預(yù)期間，每周測量一次大鼠體重、血糖，并觀察其飲食、活動(dòng)等一般情況，詳細(xì)記錄數(shù)據(jù)，以便分析藥物干預(yù)對大鼠整體健康狀況的影響。視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)檢測方法：免疫組織化學(xué)：干預(yù)8周后，大鼠經(jīng)10%水合氯醛（3ml/kg）腹腔注射麻醉，迅速摘取眼球，置于預(yù)冷的生理鹽水中沖洗，去除表面血跡和雜質(zhì)。然后在解剖顯微鏡下小心分離視網(wǎng)膜組織，將視網(wǎng)膜組織放入4%多聚甲醛溶液中固定24h。固定后的視網(wǎng)膜組織進(jìn)行脫水、透明、浸蠟、包埋等處理，制成石蠟切片，切片厚度為4μm。切片脫蠟至水后，采用檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）進(jìn)行抗原修復(fù)，修復(fù)條件為95℃加熱15min。3%過氧化氫溶液室溫孵育10min，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性。正常山羊血清封閉30min，以減少非特異性背景染色。滴加兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗體（1:100稀釋），4℃孵育過夜。次日，滴加生物素標(biāo)記的山羊抗兔二抗（1:200稀釋），37℃孵育30min。然后滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，37℃孵育30min。DAB顯色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，鹽酸酒精分化，氨水返藍(lán)，梯度酒精脫水，二甲苯透明后封片。在顯微鏡下觀察，TGF-β1陽性表達(dá)產(chǎn)物為棕黃色顆粒，采用Image-ProPlus圖像分析軟件對陽性染色區(qū)域進(jìn)行分析，計(jì)算平均光密度值，以半定量評估TGF-β1蛋白表達(dá)水平。蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）：從-80℃冰箱取出視網(wǎng)膜組織，加入適量RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑），冰上勻漿裂解30min，然后12000r/min、4℃離心15min，取上清液即為總蛋白。采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，將蛋白樣品與5×上樣緩沖液按4:1比例混合，煮沸變性5min。取適量蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳，電泳條件為80V恒壓30min，120V恒壓至溴酚藍(lán)指示劑遷移至凝膠底部。電泳結(jié)束后將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，轉(zhuǎn)移條件為300mA恒流90min。5%脫脂奶粉封閉1h，分別加入兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗體（1:1000稀釋）和內(nèi)參抗體β-actin（1:5000稀釋），4℃孵育過夜。次日，TBST洗膜3次，每次10min，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔二抗（1:5000稀釋），37℃孵育1h，TBST洗膜3次，每次10min。采用化學(xué)發(fā)光底物顯色，凝膠成像系統(tǒng)拍照，ImageJ軟件分析條帶灰度值，以TGF-β1蛋白條帶灰度值與β-actin蛋白條帶灰度值的比值表示TGF-β1蛋白相對表達(dá)量。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR）：使用TRIzol試劑提取視網(wǎng)膜組織總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，采用SYBRGreen熒光染料法進(jìn)行qPCR擴(kuò)增。引物序列根據(jù)GenBank中大鼠TGF-β1和內(nèi)參基因GAPDH的mRNA序列設(shè)計(jì)，由[引物合成公司名稱]合成。TGF-β1上游引物：5'-[具體序列]-3'，下游引物：5'-[具體序列]-3'；GAPDH上游引物：5'-[具體序列]-3'，下游引物：5'-[具體序列]-3'。反應(yīng)體系為20μl，包括SYBRGreenMix10μl，上下游引物各0.5μl，cDNA模板1μl，ddH?O8μl。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30s，95℃變性5s，60℃退火30s，共40個(gè)循環(huán)。采用2?ΔΔCt法計(jì)算TGF-β1mRNA相對表達(dá)量。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法：采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果糖尿病大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化：正常對照組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)完整，各層細(xì)胞排列整齊、緊密，邊界清晰。神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，大小均一，細(xì)胞核染色質(zhì)分布均勻；內(nèi)核層細(xì)胞層次分明，細(xì)胞形態(tài)正常。糖尿病對照組大鼠視網(wǎng)膜出現(xiàn)明顯病變，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)核層細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞間隙增大，部分細(xì)胞出現(xiàn)腫脹、變形，細(xì)胞核固縮、深染。部分神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量減少，可見空泡樣改變。視網(wǎng)膜血管擴(kuò)張、迂曲，血管壁增厚，部分血管周圍有滲出物。Ang(1-7)組大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)較糖尿病對照組有明顯改善，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)核層細(xì)胞排列相對整齊，細(xì)胞間隙減小，細(xì)胞腫脹、變形及細(xì)胞核固縮等現(xiàn)象減輕。視網(wǎng)膜血管擴(kuò)張、迂曲程度有所緩解，血管壁增厚及滲出情況也有所減輕。培哚普利組大鼠視網(wǎng)膜病變同樣得到一定程度改善，細(xì)胞排列紊亂情況有所好轉(zhuǎn)，細(xì)胞形態(tài)基本恢復(fù)正常。血管病變程度減輕，血管周圍滲出減少。Ang(1-7)+培哚普利組大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)改善最為明顯，各層細(xì)胞排列接近正常對照組，細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常。視網(wǎng)膜血管形態(tài)接近正常，血管壁厚度基本恢復(fù)正常，無明顯滲出物。各組大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化如圖2所示。[此處插入各組大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)圖片]各組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)檢測結(jié)果：免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示，正常對照組大鼠視網(wǎng)膜中TGF-β1表達(dá)呈弱陽性，陽性產(chǎn)物主要位于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層及視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞，染色較淺，平均光密度值較低。糖尿病對照組大鼠視網(wǎng)膜中TGF-β1表達(dá)明顯增強(qiáng)，陽性產(chǎn)物分布廣泛，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層、外核層及視網(wǎng)膜血管周圍均有大量棕黃色陽性顆粒沉積，平均光密度值顯著升高。Ang(1-7)組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)較糖尿病對照組明顯減弱，陽性產(chǎn)物減少，平均光密度值降低。培哚普利組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)也有所降低，陽性染色強(qiáng)度減弱，平均光密度值低于糖尿病對照組。Ang(1-7)+培哚普利組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)最弱，陽性產(chǎn)物極少，平均光密度值顯著低于其他糖尿病組，與正常對照組接近。各組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1免疫組織化學(xué)染色結(jié)果及平均光密度值統(tǒng)計(jì)如圖3所示。[此處插入各組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1免疫組織化學(xué)染色圖片及光密度值統(tǒng)計(jì)圖]Westernblot檢測結(jié)果表明，糖尿病對照組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1蛋白相對表達(dá)量顯著高于正常對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。Ang(1-7)組、培哚普利組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1蛋白相對表達(dá)量均低于糖尿病對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。Ang(1-7)+培哚普利組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1蛋白相對表達(dá)量最低，與Ang(1-7)組、培哚普利組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。各組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1蛋白相對表達(dá)量如圖4所示。[此處插入各組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1蛋白表達(dá)的Westernblot條帶圖及統(tǒng)計(jì)分析圖]RT-qPCR檢測結(jié)果顯示，糖尿病對照組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1mRNA相對表達(dá)量明顯高于正常對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。Ang(1-7)組、培哚普利組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1mRNA相對表達(dá)量均低于糖尿病對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。Ang(1-7)+培哚普利組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1mRNA相對表達(dá)量顯著低于其他糖尿病組，與正常對照組無明顯差異。各組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1mRNA相對表達(dá)量如圖5所示。[此處插入各組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1mRNA表達(dá)的RT-qPCR檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)圖]四、結(jié)果分析與討論4.1Ang(1-7)對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的影響機(jī)制本研究結(jié)果顯示，Ang(1-7)組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)較糖尿病對照組明顯減弱，這表明Ang(1-7)能夠有效抑制糖尿病視網(wǎng)膜中TGF-β1的表達(dá)，對糖尿病視網(wǎng)膜病變具有保護(hù)作用。其作用機(jī)制可能如下：Ang(1-7)主要通過與Mas受體特異性結(jié)合，激活下游一系列信號通路，發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。在糖尿病視網(wǎng)膜病變中，高血糖狀態(tài)下，腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）被異常激活，血管緊張素Ⅱ（ATⅡ）生成增多。ATⅡ可通過與血管緊張素1型受體（AT1R）結(jié)合，激活多條信號通路，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路、蛋白激酶C（PKC）通路等。這些信號通路的激活可促進(jìn)炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激，導(dǎo)致視網(wǎng)膜細(xì)胞損傷，同時(shí)誘導(dǎo)TGF-β1表達(dá)上調(diào)。而Ang(1-7)作為ATⅡ的內(nèi)源性拮抗劑，與Mas受體結(jié)合后，可抑制ATⅡ與AT1R的結(jié)合，從而阻斷ATⅡ介導(dǎo)的上述信號通路的激活。研究表明，Ang(1-7)/Mas受體軸可通過抑制MAPK通路的激活，減少炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的釋放，減輕炎癥反應(yīng)對視網(wǎng)膜細(xì)胞的損傷。炎癥反應(yīng)的減輕可減少炎癥因子對TGF-β1表達(dá)的誘導(dǎo)作用，從而降低TGF-β1的表達(dá)水平。Ang(1-7)還可通過激活磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號通路，發(fā)揮對糖尿病視網(wǎng)膜的保護(hù)作用。PI3K/Akt信號通路在細(xì)胞存活、增殖、代謝等過程中發(fā)揮重要作用。在糖尿病視網(wǎng)膜病變中，該信號通路的活性受到抑制，導(dǎo)致視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡增加。Ang(1-7)與Mas受體結(jié)合后，可激活PI3K，使其催化磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸（PIP3）。PIP3可招募Akt到細(xì)胞膜上，并使其磷酸化激活。激活的Akt可通過抑制糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）的活性，減少視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡。同時(shí)，激活的Akt還可抑制核因子-κB（NF-κB）的活化，減少炎癥因子的釋放，從而減輕炎癥反應(yīng)對視網(wǎng)膜的損傷。炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡的減輕，有助于降低TGF-β1的表達(dá)，保護(hù)視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)和功能。氧化應(yīng)激在糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。高血糖狀態(tài)下，視網(wǎng)膜組織中活性氧（ROS）產(chǎn)生過多，抗氧化酶活性降低，導(dǎo)致氧化應(yīng)激水平升高。ROS可直接損傷細(xì)胞DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，激活細(xì)胞內(nèi)的應(yīng)激信號通路，誘導(dǎo)TGF-β1表達(dá)。Ang(1-7)可通過激活一氧化氮合酶（NOS）/一氧化氮（NO）信號通路，增加NO的生成。NO具有舒張血管、抑制血小板聚集、抗炎等作用。同時(shí)，NO還可作為一種抗氧化劑，清除細(xì)胞內(nèi)的ROS，減輕氧化應(yīng)激對視網(wǎng)膜細(xì)胞的損傷。研究發(fā)現(xiàn)，Ang(1-7)處理后，糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中NOS活性升高，NO含量增加，ROS水平降低，TGF-β1表達(dá)減少。這表明Ang(1-7)可能通過減輕氧化應(yīng)激，抑制TGF-β1表達(dá)，從而發(fā)揮對糖尿病視網(wǎng)膜的保護(hù)作用。綜上所述，Ang(1-7)可通過與Mas受體結(jié)合，抑制ATⅡ的作用，調(diào)節(jié)相關(guān)信號通路，抑制炎癥反應(yīng)、減輕氧化應(yīng)激、減少細(xì)胞凋亡，從而抑制糖尿病視網(wǎng)膜中TGF-β1的表達(dá)，對糖尿病視網(wǎng)膜病變起到保護(hù)作用。4.2培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的影響機(jī)制培哚普利作為一種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI），在糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）的防治中發(fā)揮著重要作用，其對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的影響機(jī)制主要如下：培哚普利通過抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）的活性，減少血管緊張素Ⅱ（ATⅡ）的生成。在糖尿病狀態(tài)下，腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）被激活，ACE活性升高，導(dǎo)致ATⅡ大量生成。ATⅡ可與血管緊張素1型受體（AT1R）結(jié)合，激活一系列信號通路，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路、蛋白激酶C（PKC）通路等。這些信號通路的激活可促進(jìn)炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激，導(dǎo)致視網(wǎng)膜細(xì)胞損傷，同時(shí)誘導(dǎo)TGF-β1表達(dá)上調(diào)。培哚普利抑制ACE活性后，阻斷了ATⅡ的生成，從而抑制了ATⅡ與AT1R的結(jié)合，減少了下游信號通路的激活。研究表明，培哚普利干預(yù)后，糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中MAPK通路和PKC通路的關(guān)鍵蛋白磷酸化水平降低，炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的釋放減少，炎癥反應(yīng)得到抑制。炎癥反應(yīng)的減輕可減少炎癥因子對TGF-β1表達(dá)的誘導(dǎo)作用，進(jìn)而降低TGF-β1的表達(dá)水平。培哚普利可調(diào)節(jié)細(xì)胞因子信號抑制因子3（SOCS3）/Janus激酶2（JAK2）/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）信號通路。在DR的致病過程中，高糖狀態(tài)可激活JAK2/STAT3信號通路，導(dǎo)致視網(wǎng)膜中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等因子的表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)視網(wǎng)膜細(xì)胞的凋亡。SOCS3是負(fù)反饋性調(diào)節(jié)細(xì)胞因子信號通路的一種重要蛋白，可抑制JAK2/STAT3信號通路的激活。研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病狀態(tài)下，視網(wǎng)膜組織中SOCS3表達(dá)上調(diào)，可能是機(jī)體的一種自我保護(hù)機(jī)制。培哚普利可進(jìn)一步誘導(dǎo)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中SOCS3表達(dá)上調(diào)，通過增強(qiáng)SOCS3對JAK2/STAT3信號通路的抑制作用，減少VEGF等因子的表達(dá)。VEGF是促進(jìn)視網(wǎng)膜新生血管形成的關(guān)鍵因子，其表達(dá)減少可減輕視網(wǎng)膜新生血管病變，同時(shí)也可間接降低TGF-β1的表達(dá)。因?yàn)門GF-β1與VEGF在視網(wǎng)膜病變過程中存在相互作用，TGF-β1可促進(jìn)VEGF表達(dá)，而VEGF也可誘導(dǎo)TGF-β1的產(chǎn)生。氧化應(yīng)激在DR的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。高糖環(huán)境下，視網(wǎng)膜組織中活性氧（ROS）產(chǎn)生過多，抗氧化酶活性降低，導(dǎo)致氧化應(yīng)激水平升高。ROS可直接損傷細(xì)胞DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，激活細(xì)胞內(nèi)的應(yīng)激信號通路，誘導(dǎo)TGF-β1表達(dá)。培哚普利具有一定的抗氧化作用，可通過多種途徑減輕氧化應(yīng)激。一方面，培哚普利可抑制NADPH氧化酶的活性，減少ROS的生成。NADPH氧化酶是產(chǎn)生ROS的關(guān)鍵酶，在糖尿病視網(wǎng)膜中活性增強(qiáng)。培哚普利抑制其活性后，可降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平，減輕氧化應(yīng)激對視網(wǎng)膜細(xì)胞的損傷。另一方面，培哚普利可上調(diào)抗氧化酶的表達(dá)，如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等。這些抗氧化酶可清除細(xì)胞內(nèi)的ROS，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力。研究表明，培哚普利干預(yù)后，糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中ROS水平降低，SOD和GSH-Px活性升高，TGF-β1表達(dá)減少。這表明培哚普利可能通過減輕氧化應(yīng)激，抑制TGF-β1表達(dá)，從而發(fā)揮對糖尿病視網(wǎng)膜的保護(hù)作用。綜上所述，培哚普利可通過抑制RAS系統(tǒng)、調(diào)節(jié)SOCS3/JAK2/STAT3信號通路、減輕氧化應(yīng)激等多種途徑，降低糖尿病視網(wǎng)膜中TGF-β1的表達(dá)，對糖尿病視網(wǎng)膜病變起到保護(hù)作用。4.3Ang(1-7)與培哚普利聯(lián)合作用對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的協(xié)同效應(yīng)研究結(jié)果表明，Ang(1-7)+培哚普利組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)顯著低于Ang(1-7)組和培哚普利組，提示兩者聯(lián)合應(yīng)用對抑制糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)具有協(xié)同效應(yīng)。這種協(xié)同效應(yīng)可能源于它們不同的作用機(jī)制。Ang(1-7)主要通過與Mas受體結(jié)合，激活下游PI3K/Akt、NOS/NO等信號通路，發(fā)揮抗炎、抗氧化應(yīng)激和抗纖維化作用。培哚普利則通過抑制ACE活性，減少ATⅡ生成，阻斷RAS系統(tǒng)激活，調(diào)節(jié)SOCS3/JAK2/STAT3信號通路，減輕氧化應(yīng)激。兩者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，Ang(1-7)可增強(qiáng)培哚普利對RAS系統(tǒng)的抑制作用，進(jìn)一步減少ATⅡ生成，從而降低炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激水平。同時(shí)，培哚普利可通過調(diào)節(jié)相關(guān)信號通路，增強(qiáng)Ang(1-7)與Mas受體的結(jié)合及下游信號通路的激活，促進(jìn)其抗炎、抗氧化應(yīng)激和抗纖維化作用的發(fā)揮。在炎癥反應(yīng)方面，Ang(1-7)可抑制MAPK通路激活，減少炎癥因子釋放，培哚普利也可抑制炎癥因子的產(chǎn)生。兩者聯(lián)合，可從多個(gè)環(huán)節(jié)抑制炎癥反應(yīng)，減少炎癥因子對TGF-β1表達(dá)的誘導(dǎo)，更有效地降低TGF-β1表達(dá)。在氧化應(yīng)激方面，Ang(1-7)通過激活NOS/NO通路增加NO生成，清除ROS，培哚普利則通過抑制NADPH氧化酶活性和上調(diào)抗氧化酶表達(dá)減輕氧化應(yīng)激。聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，可更全面地調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激相關(guān)機(jī)制，降低ROS水平，抑制TGF-β1表達(dá)。在纖維化方面，Ang(1-7)可抑制TGF-β1誘導(dǎo)的細(xì)胞外基質(zhì)合成，培哚普利通過調(diào)節(jié)相關(guān)信號通路減少VEGF表達(dá)，間接抑制TGF-β1作用。兩者協(xié)同作用，可更有效地抑制視網(wǎng)膜纖維化，降低TGF-β1表達(dá)。這種協(xié)同效應(yīng)在糖尿病視網(wǎng)膜病變的防治中具有重要意義。聯(lián)合應(yīng)用Ang(1-7)和培哚普利，可能比單獨(dú)使用其中一種藥物更有效地抑制TGF-β1表達(dá)，從而減輕糖尿病視網(wǎng)膜病變的嚴(yán)重程度，延緩病變進(jìn)展，保護(hù)視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)和功能。這為糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療提供了新的思路和策略，未來有望通過進(jìn)一步的研究和臨床試驗(yàn)，將這種聯(lián)合治療方法應(yīng)用于臨床，為糖尿病視網(wǎng)膜病變患者帶來更好的治療效果。4.4研究結(jié)果的臨床應(yīng)用前景與局限性本研究結(jié)果表明，Ang(1-7)及培哚普利能夠有效抑制糖尿病視網(wǎng)膜中TGF-β1的表達(dá)，對糖尿病視網(wǎng)膜病變具有保護(hù)作用，且兩者聯(lián)合應(yīng)用效果更為顯著，這為糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療提供了新的理論依據(jù)和潛在治療策略，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。從臨床治療角度來看，目前糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療方法主要包括激光光凝治療、抗VEGF藥物治療以及手術(shù)治療等。激光光凝治療是通過激光破壞視網(wǎng)膜的異常血管，減少新生血管形成和視網(wǎng)膜水腫，但它屬于破壞性治療，可能會對視網(wǎng)膜的正常功能造成一定損害?？筕EGF藥物治療可抑制血管新生，減輕黃斑水腫，在一定程度上改善患者視力，但需要反復(fù)玻璃體腔內(nèi)注射，存在眼內(nèi)感染、視網(wǎng)膜脫離等風(fēng)險(xiǎn)。手術(shù)治療主要用于治療嚴(yán)重的增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變，如玻璃體積血、視網(wǎng)膜脫離等，但手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)較高，且術(shù)后視力恢復(fù)效果有限。本研究中Ang(1-7)及培哚普利的作用機(jī)制不同于上述傳統(tǒng)治療方法，它們主要通過調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素系統(tǒng)，抑制炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激和纖維化，從而減少TGF-β1的表達(dá)，從根本上延緩糖尿病視網(wǎng)膜病變的進(jìn)展。這為糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療提供了新的選擇，有望與傳統(tǒng)治療方法聯(lián)合應(yīng)用，提高治療效果，減少并發(fā)癥的發(fā)生。在藥物研發(fā)方面，本研究為開發(fā)新型糖尿病視網(wǎng)膜病變治療藥物提供了重要線索?；贏ng(1-7)及培哚普利的作用機(jī)制，可以進(jìn)一步研究其結(jié)構(gòu)與活性關(guān)系，優(yōu)化藥物分子結(jié)構(gòu)，提高藥物的療效和安全性。同時(shí)，也可以探索開發(fā)以Ang(1-7)及培哚普利作用靶點(diǎn)為基礎(chǔ)的新型藥物，為糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療提供更多的藥物選擇。此外，本研究還為糖尿病視網(wǎng)膜病變的早期干預(yù)提供了理論支持。在糖尿病視網(wǎng)膜病變早期，病變相對較輕，及時(shí)給予Ang(1-7)及培哚普利等藥物治療，可能會有效延緩病變進(jìn)展，保護(hù)患者視力，降低失明風(fēng)險(xiǎn)。本研究也存在一定的局限性。本研究是基于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果，動(dòng)物模型與人類糖尿病視網(wǎng)膜病變在發(fā)病機(jī)制、病理生理過程等方面可能存在一定差異，因此研究結(jié)果外推至臨床時(shí)需要謹(jǐn)慎。盡管本研究初步探討了Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的影響機(jī)制，但相關(guān)機(jī)制尚未完全明確，仍需進(jìn)一步深入研究。在本研究中，僅檢測了TGF-β1這一關(guān)鍵因子的表達(dá)變化，對于其他與糖尿病視網(wǎng)膜病變相關(guān)的因子，如VEGF、PEDF等，未進(jìn)行深入研究，這些因子與TGF-β1之間的相互作用以及在Ang(1-7)及培哚普利治療過程中的變化情況有待進(jìn)一步探討。未來的研究可以從以下幾個(gè)方面展開。開展大規(guī)模、多中心的臨床試驗(yàn)，驗(yàn)證Ang(1-7)及培哚普利在人類糖尿病視網(wǎng)膜病變治療中的有效性和安全性，為其臨床應(yīng)用提供更可靠的證據(jù)。深入研究Ang(1-7)及培哚普利的作用機(jī)制，明確其在分子層面的作用靶點(diǎn)和信號通路，以及與其他相關(guān)因子之間的相互作用關(guān)系。進(jìn)一步探索Ang(1-7)及培哚普利與其他治療方法的聯(lián)合應(yīng)用效果，優(yōu)化治療方案，提高糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療水平。五、結(jié)論與展望5.1研究主要結(jié)論本研究通過建立糖尿病大鼠模型，深入探討了Ang(1-7)及培哚普利對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的影響，得出以下主要結(jié)論：對糖尿病視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)的影響：糖尿病對照組大鼠視網(wǎng)膜出現(xiàn)明顯病變，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)核層細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞間隙增大，部分細(xì)胞腫脹、變形，細(xì)胞核固縮、深染，視網(wǎng)膜血管擴(kuò)張、迂曲，血管壁增厚，周圍有滲出物。而給予Ang(1-7)及培哚普利干預(yù)后，大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)得到顯著改善。其中，Ang(1-7)+培哚普利組改善最為明顯，各層細(xì)胞排列接近正常對照組，細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常，視網(wǎng)膜血管形態(tài)接近正常，血管壁厚度基本恢復(fù)正常，無明顯滲出物。這表明Ang(1-7)及培哚普利能夠有效改善糖尿病視網(wǎng)膜的病理形態(tài)學(xué)變化，對糖尿病視網(wǎng)膜具有保護(hù)作用，且兩者聯(lián)合應(yīng)用效果更佳。對糖尿病視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)的影響：免疫組織化學(xué)、Westernblot和RT-qPCR檢測結(jié)果一致表明，糖尿病對照組大鼠視網(wǎng)膜中TGF-β1表達(dá)顯著高于正常對照組。而Ang(1-7)組、培哚普利組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)較糖尿病對照組明顯降低。其中，Ang(1-7)+培哚普利組大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1表達(dá)最低，顯著低于Ang(1-7)組和培哚普利組。這充分說明Ang(1-7)和培哚普利能夠有效抑制糖尿病大鼠視網(wǎng)膜TGF-β1的表達(dá)，且兩者聯(lián)合應(yīng)用對抑制TGF-β1表達(dá)具有協(xié)同效應(yīng)，能更顯著地降低TGF-β1的表達(dá)水平。作用機(jī)制：Ang(1-7)主要通過與Mas受體結(jié)合，抑制血管緊張素Ⅱ（ATⅡ）與血管緊張素1型受體（AT1R）的結(jié)合，阻斷ATⅡ介導(dǎo)的絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、蛋白激酶C（PKC）等信號通路的激活，從而抑制炎癥反應(yīng)。同時(shí)，Ang(1-7)還可激活磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號通路，減少視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡；激活一氧化氮合酶（NOS）/一氧化氮（NO）信號通路，減輕氧化應(yīng)激，進(jìn)而抑制糖尿病視網(wǎng)膜中TGF-β1的表達(dá)。培哚普利則通過抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）活性，減少ATⅡ生成，阻斷RAS系統(tǒng)激活，抑制炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激。此外，培哚普利還可調(diào)節(jié)細(xì)胞因子信號抑制因子3（SOCS3）/Janus激酶2（JAK2）/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）信號通路，減少血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等因子的表達(dá)，間接降低TGF-β1的表達(dá)。Ang(1-7)與培哚普利聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，可從多個(gè)環(huán)節(jié)協(xié)同發(fā)揮作用，增強(qiáng)對RAS系統(tǒng)的抑制，調(diào)節(jié)相關(guān)信號通路，更有效地抑制炎癥反應(yīng)、減輕氧化應(yīng)激和抑制纖維化，從而降低TGF-β1表達(dá)，發(fā)揮對糖尿病視網(wǎng)膜的保護(hù)作用。5.2研究的創(chuàng)新點(diǎn)本研究在糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）的研究領(lǐng)域展現(xiàn)出多方面的創(chuàng)新，為該領(lǐng)域的發(fā)展提供了新的思路和方向。聯(lián)合研究視角創(chuàng)新：在研究對象上具有創(chuàng)新性。以往關(guān)于DR的研究多集中于單一藥物或因子對視網(wǎng)膜病變的影響，而本研究首次將血管緊張素（1-7）（Ang(1-7)）