高效液相色譜工作分離原理及類型彭莉講師

儀器分析主要內(nèi)容一、高效液相色譜法概述二、高效液相色譜儀分離原理三、高效液相色譜主要類型高效液相色譜儀工作分離原理及類型氣相色譜是一種良好的分離分析技術(shù)。對于展全部有機(jī)物約20%的具有較低沸點(diǎn)切加熱不易分解的樣品，具有良好的分離效果。但是，對沸點(diǎn)高相對分子質(zhì)量大受熱易分解的有機(jī)化合物生物活性物質(zhì)以及多種天然物質(zhì)又如何分離分析呢？實(shí)踐證明，如果用液體流動相去替代氣體流動相，則可達(dá)到分離分析的目的。對應(yīng)的色譜分析方法就稱之為液相色譜法。20世紀(jì)60年代后期才將你比較成熟的氣相色譜的理論與技術(shù)應(yīng)用與經(jīng)典液相色譜經(jīng)典液相色譜才得到迅速的發(fā)展。1967年出現(xiàn)高速化高效化的高效液相色譜HPLC是70年代以后發(fā)展最快的一個分析化學(xué)分支，現(xiàn)已成為生化、醫(yī)學(xué)、藥物、化學(xué)化工、食品衛(wèi)生、環(huán)保檢測等領(lǐng)域最常用的分離分析手段。高效液相色譜是一種以高壓輸出的液體為流動相的色譜技術(shù)。它在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ)上采用了高壓流動相，高效固定相和高靈敏度檢測器。因而具有分析速度快效率高靈敏度高和操作自動化等特點(diǎn)。高效液相色譜概述高壓以液體作為流動相，液體流經(jīng)色譜柱時，受到阻力較大必須對流動相施加高壓。一般可達(dá)到150～300kg／cm2，甚至可達(dá)700kg／cm2以上。高效液相色譜特點(diǎn)高速分析時間較經(jīng)典液相色譜少得多（交換速度快），一個復(fù)雜樣品的分析僅需幾分鐘到幾十分鐘高效氣相色譜的分離效能很高，高效液相色譜的柱效則更高（化學(xué)鍵合相），一般約可達(dá)6000理論塔板／米高效液相色譜特點(diǎn)高靈敏度紫外檢測器的最小檢測量可達(dá)(10-9g)；熒光檢測器的靈敏度可達(dá)（10-11g）。所需試樣很少；微升數(shù)量級高選擇性高選擇性可分離不同類型化合物和異構(gòu)體，也可分析在性質(zhì)上極為相似的化合物(同位素、同分異構(gòu)體、空間異構(gòu)體、手性化合物）高效液相色譜特點(diǎn)

分析對象的區(qū)別GC：能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品；占有機(jī)物的20%HPLC：不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，對分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差的生化樣品及高分子和離子型樣品均可檢測；用途廣泛，占有機(jī)物的80%流動相的區(qū)別GC：樣品組分與流動相無親合作用力。種類較少HPLC：流動相與組分間有親合作用力，改變流動相極性和pH值、選用兩種及以上液體作為流動相能提高柱的選擇性、改善分離度。種類較多。操作條件差別GC：加溫操作HPLC：室溫；高壓（液體粘度大，峰展寬?。└咝б合嗌V與氣相色譜的不同1．貯液罐（濾棒，可濾去顆粒狀物質(zhì)）2．高壓泵（輸液泵）3．進(jìn)樣裝置4．色譜柱——分離5．檢測器——分析6．廢液出口或組分收集器7．記錄裝置高效液相色譜與氣相色譜的不同分離原理混合物中各組份在不互溶的兩相中溶解、吸附等化學(xué)性能存在差異；當(dāng)兩相相對運(yùn)動時,各組分在兩相中反復(fù)多次進(jìn)行平衡分配而達(dá)到相互分離。高效液相色譜儀分離原理分離原理:分離是一個物理過程。固定相(StationaryPhase)流動相(MobilePhase)進(jìn)樣(Injection)洗脫(Elution)相互作用(Interaction)高效液相色譜儀分離原理高效液相主要類型吸附色譜(AbsorptionChromatography)組分對固定相表面吸附力的不同而分離分配色譜(PartitionChromatography)組分在固定相和流動相中的溶解度不同而分離離子交換色譜(IonExchangeChromatography)組份離子交換親和力的差異而分離體積排除色譜(SizeExclusionChromatography)組分分子量大小不同,對固定相的滲透力不同而分離高效液相色譜儀類型液-液分配色譜法在液-液分配色譜中，流動相和固定相均為液體，作為固定相的液體，是涂在很細(xì)的惰性載體上，它能適用于各種類型試樣的分離和分析1、分離原理。液-液分配色譜的分離原理基本與液液萃取相同，都是根據(jù)物質(zhì)在兩種互不相容的液體中溶解度的不同，具有不同的分配系數(shù)。2、固定相。由惰性載體和涂在載體上的固定液組成。固定液的選擇原則是對極性試樣選擇極性固定液和非極性流動，相對于非極性，需要選擇非極性固定液和極性流動相3、流動相。液-液分配色譜中使用溶劑作為流動相溶劑。洗脫組分的能力與溶劑的極性有關(guān)，極性增大，溶劑的洗脫強(qiáng)度也會增大，因此可以通過組成混合溶劑來改善分離的選擇性。（正相分配色譜、反相分配色譜）4、應(yīng)用。液-液色譜技能分離極性化合物，又能分離非極性化合物，如烷烴、芳烴、稠環(huán)化合物甾族化合物等高效液相色譜儀類型液-固吸附色譜液-固吸附色譜是指流動相為液體固定相為固體的色譜方法，吸附劑通常是多孔性的固體顆粒物質(zhì)，它們的表面存在吸附中心。分離實(shí)質(zhì)是利用組分的吸附劑上的吸附能力的不同而獲得分離，因此稱為吸附色譜法。1、分離原理。當(dāng)流動相通過固定吸附劑時，在吸附劑表面發(fā)生的溶質(zhì)（組分）分子取代吸附劑上的溶劑分子（流動相）的吸附作用。2、固定相。液-固吸附色譜固定相都是一些吸附性活性強(qiáng)弱不等的吸附劑。吸附劑的要求：A、不與流動相和待測組分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，B、有高的吸附容量C、不溶于流動相等。高效液相色譜儀類型3、流動相。在吸附色譜中，流動相常被稱為洗脫劑，其選擇比固定相更重要。對于具有不同極性的式樣，選擇流動性的主要依據(jù)仍然是洗脫劑的極性。常選用二元混合溶劑作為流動相。4、應(yīng)用。常用于分離極性不同的化合物，但也能分離那些具有相同極性的基團(tuán)，但基團(tuán)數(shù)量不同的試樣。此外，液-固吸附色譜還適于分離異構(gòu)體。高效液相色譜儀類型鍵合相色譜采用化學(xué)鍵合固定相的液相色譜法。鍵合固定相是使固定液通過化學(xué)共價鍵結(jié)合在載體表面上。由于鍵合固定相非常穩(wěn)定，在使用中不易流失，因此鍵合相色譜，在高效液相色譜的整個應(yīng)用中占到了80%以上1、分離原理。正相鍵合相色譜使用的是極性鍵合固定相，溶質(zhì)在此類固定向上的分離原理屬于分配色譜。反相鍵合相色譜使用的是極性較小的鍵合固定相，其分離原理可用疏水溶劑作用理論來解釋。鍵合固定相的類型：a疏水基團(tuán)、b極性基團(tuán)c、離子交換基團(tuán)。

高效液相色譜儀類型2、流動相和固定相（1）正相鍵合相色譜使用的是強(qiáng)極性的鍵合固定相和非極性或弱極性的流動相。適用于分離極性化合物以及異構(gòu)體等（2）反相鍵合相色譜，采用極性較小的