2023年版中國藥典通則1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法作者：檢驗(yàn)?zāi)康暮瓦m用范圍目的確保非無菌產(chǎn)品符合微生物限度要求，保證產(chǎn)品質(zhì)量安全。適用范圍適用于非無菌藥用輔料、原料藥、制劑等產(chǎn)品的微生物限度檢查?？偵鷶?shù)檢查11.總生菌數(shù)指樣品中所有可培養(yǎng)的細(xì)菌和真菌的總數(shù)，反映產(chǎn)品微生物污染程度。22.培養(yǎng)基和條件采用合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，確保大部分微生物都能生長。33.平板計(jì)數(shù)法常用平板計(jì)數(shù)法，通過計(jì)數(shù)菌落數(shù)來估算樣品中微生物數(shù)量。參比菌種和培養(yǎng)基菌種選擇合適的參比菌種，驗(yàn)證培養(yǎng)基的效力，確保計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。培養(yǎng)基使用標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，保證微生物的生長和計(jì)數(shù)結(jié)果的可靠性。分類和鑒定1形態(tài)觀察通過顯微鏡觀察菌落的形態(tài)、顏色、大小等特征，初步判斷菌種類型。2生化試驗(yàn)進(jìn)行生化試驗(yàn)，進(jìn)一步確定菌種的分類和鑒定，例如糖發(fā)酵試驗(yàn)、酶活性試驗(yàn)等。3分子生物學(xué)鑒定使用分子生物學(xué)技術(shù)，例如16SrRNA基因測序，進(jìn)行更精確的菌種鑒定。菌落計(jì)數(shù)的原理和方法1原理每個菌落代表一個活的細(xì)菌或真菌。2計(jì)數(shù)方法使用平板計(jì)數(shù)法，通過計(jì)數(shù)菌落數(shù)來估算樣品中微生物數(shù)量。3計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)使用特定方法，例如30-300個菌落的計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)，確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠。樣品采集與預(yù)處理采集按照藥典要求，選擇合適的采集部位和方法，保證樣品的代表性。預(yù)處理對樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，例如稀釋、研磨、過濾等，以便于微生物計(jì)數(shù)。無菌操作技術(shù)1環(huán)境控制使用無菌操作室，保持潔凈的環(huán)境，減少外界微生物污染。2設(shè)備消毒對操作設(shè)備進(jìn)行消毒，例如火焰滅菌、紫外線照射等，確保設(shè)備無菌。3操作規(guī)范嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，例如戴口罩、手套，避免操作過程中污染。平板計(jì)數(shù)法1稀釋將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，以便于?jì)數(shù)。2接種使用無菌操作技術(shù)，將稀釋后的樣品接種到培養(yǎng)基中。3培養(yǎng)將接種后的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中，在適宜的溫度下進(jìn)行培養(yǎng)。4計(jì)數(shù)培養(yǎng)結(jié)束后，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，并根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品中微生物數(shù)量。測試液制備溶解將樣品溶解在合適的溶液中，例如生理鹽水或緩沖液，確保微生物能夠生長和計(jì)數(shù)。過濾對于固體樣品或懸浮液，使用無菌濾膜過濾，將微生物分離到濾膜上進(jìn)行計(jì)數(shù)。平板培養(yǎng)與觀察結(jié)果計(jì)算和表達(dá)計(jì)算根據(jù)菌落數(shù)和稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品中微生物數(shù)量，通常以每克或每毫升樣品中的菌落形成單位(CFU)表示。表達(dá)將計(jì)算結(jié)果以科學(xué)計(jì)數(shù)法或以每克或每毫升樣品中的菌落形成單位(CFU)表示。判定標(biāo)準(zhǔn)限度標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)藥典或相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求，確定不同類別產(chǎn)品的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)。判定根據(jù)檢測結(jié)果與限度標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，判斷產(chǎn)品是否符合微生物限度要求。質(zhì)量控制1培養(yǎng)基效力驗(yàn)證定期進(jìn)行培養(yǎng)基效力驗(yàn)證，確保培養(yǎng)基能夠有效地培養(yǎng)微生物。2無菌操作驗(yàn)證定期進(jìn)行無菌操作驗(yàn)證，確保無菌操作技術(shù)的有效性，防止操作過程中的污染。3結(jié)果驗(yàn)證對檢測結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，例如重復(fù)實(shí)驗(yàn)或使用其他方法進(jìn)行驗(yàn)證。檢驗(yàn)中易出現(xiàn)的問題及解決建議污染樣品污染、培養(yǎng)基污染、操作環(huán)境污染，可通過改進(jìn)操作技術(shù)和環(huán)境控制來解決。結(jié)果不準(zhǔn)確計(jì)數(shù)錯誤、培養(yǎng)條件不合適、稀釋倍數(shù)錯誤，可通過嚴(yán)格遵守操作規(guī)范和驗(yàn)證來解決。菌種鑒定錯誤生化試驗(yàn)或分子生物學(xué)鑒定方法選擇錯誤，可通過選擇合適的鑒定方法和驗(yàn)證來解決。微生物限度檢查數(shù)據(jù)分析1趨勢分析對檢測結(jié)果進(jìn)行趨勢分析，評估產(chǎn)品微生物污染的趨勢，例如是否存在上升或下降趨勢。2原因分析對異常結(jié)果進(jìn)行原因分析，找到導(dǎo)致異常的原因，例如生產(chǎn)工藝、環(huán)境、操作等因素。3改進(jìn)措施根據(jù)數(shù)據(jù)分析的結(jié)果，制定改進(jìn)措施，例如改進(jìn)生產(chǎn)工藝、加強(qiáng)環(huán)境控制、提高操作技能等。特殊樣品的微生物限度檢查1高風(fēng)險樣品對于高風(fēng)險樣品，例如注射劑、眼用制劑，需要更嚴(yán)格的微生物限度檢查。2特殊方法對于特殊樣品，例如含有抗生素的樣品，需要使用特殊的培養(yǎng)基和方法進(jìn)行微生物限度檢查。3專項(xiàng)要求對于特殊樣品，可能存在專項(xiàng)要求，例如需要進(jìn)行滅菌效力驗(yàn)證或其他特殊檢查。無菌操作的意義和要求1意義確保產(chǎn)品無菌，防止微生物污染，保證產(chǎn)品質(zhì)量安全。2要求嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，使用無菌操作室，定期進(jìn)行無菌操作驗(yàn)證。開展微生物限度檢查的關(guān)鍵步驟步驟樣品采集、預(yù)處理、測試液制備、平板計(jì)數(shù)、結(jié)果計(jì)算、判定等。團(tuán)隊(duì)合作需要多個部門的配合，例如生產(chǎn)部門、質(zhì)量控制部門、實(shí)驗(yàn)室部門等。微生物檢查的沙盤演練檢查結(jié)果的評估和報告評估對檢測結(jié)果進(jìn)行評估，判斷產(chǎn)品是否符合微生物限度要求，并分析原因，尋找改進(jìn)措施。報告撰寫完整的微生物限度檢查報告，包括樣品信息、檢測方法、結(jié)果、結(jié)論、分析等。合格和不合格產(chǎn)品的處理合格符合微生物限度要求的產(chǎn)品可以繼續(xù)生產(chǎn)和銷售，但需要繼續(xù)進(jìn)行質(zhì)量控制。不合格不符合微生物限度要求的產(chǎn)品需要進(jìn)行調(diào)查，分析原因，采取措施，并根據(jù)情況進(jìn)行處理，例如重新生產(chǎn)、銷毀等。持續(xù)改進(jìn)微生物限度檢查的建議1方法改進(jìn)不斷改進(jìn)檢測方法，提高檢測效率和準(zhǔn)確性，例如采用新的檢測技術(shù)或方法。2規(guī)范管理加強(qiáng)微生物限度檢查的管理，建立完善的管理制度和操作規(guī)范。3人員培訓(xùn)對檢驗(yàn)人員進(jìn)行定期培訓(xùn)，提高檢驗(yàn)技能和質(zhì)量意識。其他相關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)要求藥典要求遵守中國藥典的相關(guān)規(guī)定，確保產(chǎn)品符合微生物限度要求。GMP要求遵守GMP相關(guān)要求，例如無菌操作、環(huán)境控制、設(shè)備消毒等。本規(guī)定解讀和應(yīng)用的注意事項(xiàng)1理解深入理解本規(guī)定，準(zhǔn)確把握檢驗(yàn)?zāi)康暮头椒ǎＷC檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。2應(yīng)用正確應(yīng)用本規(guī)定，進(jìn)行微生物限度檢查，確保產(chǎn)品質(zhì)量安全。3問題及時解決檢驗(yàn)中出現(xiàn)的問題，例如污染、結(jié)果不準(zhǔn)確等，提高檢驗(yàn)