pcr實(shí)驗(yàn)室考試試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的主要步驟不包括以下哪項(xiàng)？A.變性B.退火C.延伸D.轉(zhuǎn)錄答案：D2.在PCR反應(yīng)中，DNA聚合酶的作用是？A.解開(kāi)雙鏈DNAB.結(jié)合引物到模板上C.合成新的DNA鏈D.降解RNA答案：C3.PCR實(shí)驗(yàn)室中，防止交叉污染最重要的區(qū)域是？A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.標(biāo)本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)答案：C4.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)的基本成分？A.模板DNAB.RNA聚合酶C.引物D.dNTPs答案：B5.PCR反應(yīng)中，退火溫度主要取決于？A.模板長(zhǎng)度B.引物的Tm值C.酶的活性D.dNTPs濃度答案：B6.在PCR實(shí)驗(yàn)室中，紫外線主要用于？A.加熱反應(yīng)體系B.消毒空氣和表面C.激發(fā)熒光標(biāo)記D.提高酶活性答案：B7.對(duì)于PCR產(chǎn)物的檢測(cè)，以下哪種方法最靈敏？A.瓊脂糖凝膠電泳B.熒光定量PCRC.聚丙烯酰胺凝膠電泳D.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)答案：B8.PCR反應(yīng)體系中，引物的濃度一般為？A.0.1-0.5μmol/LB.1-5μmol/LC.10-50μmol/LD.100-500μmol/L答案：A9.以下哪種情況可能導(dǎo)致PCR假陽(yáng)性結(jié)果？A.模板量過(guò)少B.引物設(shè)計(jì)不合理C.交叉污染D.酶活性過(guò)低答案：C10.PCR實(shí)驗(yàn)室的氣壓設(shè)置，相對(duì)室外應(yīng)該？A.全部為正壓B.全部為負(fù)壓C.試劑準(zhǔn)備區(qū)為正壓，擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)為負(fù)壓D.試劑準(zhǔn)備區(qū)為負(fù)壓，擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)為正壓答案：C二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)可應(yīng)用于以下哪些方面？A.疾病診斷B.基因克隆C.法醫(yī)鑒定D.物種進(jìn)化研究答案：ABCD2.PCR實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)包括以下哪些？A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.標(biāo)本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)答案：ABCD3.在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)，需要考慮以下哪些因素？A.長(zhǎng)度B.GC含量C.特異性D.避免二級(jí)結(jié)構(gòu)答案：ABCD4.以下哪些因素會(huì)影響PCR反應(yīng)的特異性？A.引物特異性B.退火溫度C.Mg2+濃度D.循環(huán)次數(shù)答案：ABCD5.PCR實(shí)驗(yàn)室的個(gè)人防護(hù)用品包括？A.實(shí)驗(yàn)服B.手套C.口罩D.護(hù)目鏡答案：ABCD6.以下哪些是熒光定量PCR的特點(diǎn)？A.定量準(zhǔn)確B.靈敏度高C.可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)D.需要熒光標(biāo)記答案：ABCD7.導(dǎo)致PCR假陰性結(jié)果的可能原因有？A.模板降解B.酶失活C.引物錯(cuò)配D.反應(yīng)體系中有抑制物答案：ABCD8.在PCR反應(yīng)中，dNTPs的作用包括？A.提供合成DNA的原料B.影響反應(yīng)的特異性C.調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH值D.作為酶的輔因子答案：A9.PCR實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的內(nèi)容包括？A.人員培訓(xùn)B.儀器設(shè)備維護(hù)C.試劑質(zhì)量檢測(cè)D.實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范答案：ABCD10.以下關(guān)于PCR產(chǎn)物分析的說(shuō)法正確的是？A.瓊脂糖凝膠電泳可根據(jù)條帶大小判斷產(chǎn)物B.熒光定量PCR可直接得到產(chǎn)物的量C.聚丙烯酰胺凝膠電泳分辨率更高D.產(chǎn)物分析要防止污染答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)可以無(wú)限循環(huán)，以獲得更多的產(chǎn)物。（×）2.在PCR實(shí)驗(yàn)室中，不同區(qū)域的儀器設(shè)備可以隨意搬動(dòng)。（×）3.只要引物能與模板結(jié)合，就可以進(jìn)行有效的PCR反應(yīng)。（×）4.PCR反應(yīng)中，升高退火溫度一定能提高特異性。（×）5.熒光定量PCR只能檢測(cè)DNA，不能檢測(cè)RNA。（×）6.PCR實(shí)驗(yàn)室的清潔消毒只需要在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行。（×）7.引物越長(zhǎng)，PCR反應(yīng)的特異性就越高。（×）8.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（×）9.PCR產(chǎn)物可以直接用于后續(xù)的克隆實(shí)驗(yàn)。（×）10.PCR實(shí)驗(yàn)室的空氣流向是從清潔區(qū)流向污染區(qū)。（√）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR實(shí)驗(yàn)室防止污染的措施。答案：PCR實(shí)驗(yàn)室防止污染措施包括嚴(yán)格的分區(qū)管理，各區(qū)間單向物品傳遞；實(shí)驗(yàn)人員嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，不同區(qū)域使用專用的儀器設(shè)備、耗材等；實(shí)驗(yàn)前后對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行徹底清潔消毒；定期對(duì)儀器設(shè)備進(jìn)行維護(hù)校準(zhǔn)等。2.說(shuō)明引物設(shè)計(jì)的基本原則。答案：引物設(shè)計(jì)原則包括合適的長(zhǎng)度（18-30bp），合適的GC含量（40%-60%），避免引物內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)，引物間避免互補(bǔ)形成二聚體，具有高度特異性等。3.簡(jiǎn)述熒光定量PCR的原理。答案：熒光定量PCR原理是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物量成正比，通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)進(jìn)程，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定量分析。4.請(qǐng)列出PCR反應(yīng)體系的主要成分及其作用。答案：主要成分有模板DNA（提供擴(kuò)增的目標(biāo)序列）、引物（與模板結(jié)合起始擴(kuò)增）、dNTPs（合成DNA的原料）、DNA聚合酶（催化DNA合成）、緩沖液（提供合適的反應(yīng)環(huán)境）。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在新型冠狀病毒檢測(cè)中的應(yīng)用及優(yōu)缺點(diǎn)。答案：應(yīng)用：可快速檢測(cè)新冠病毒核酸，對(duì)病例診斷、疫情防控等有重要意義。優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速。缺點(diǎn)是可能存在假陰性，對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境和人員操作要求高，且檢測(cè)過(guò)程較復(fù)雜，需要專門設(shè)備和技術(shù)人員。2.如何提高PCR反應(yīng)的特異性？答案：可從引物設(shè)計(jì)上提高特異性，如選擇合適長(zhǎng)度、特異性高的引物；優(yōu)化退火溫度；控制Mg2+濃度；減少循環(huán)次數(shù)；保證模板的純度等。3.闡述PCR實(shí)驗(yàn)室人員培訓(xùn)的重要性。答案：人員培訓(xùn)重要性在于確保實(shí)驗(yàn)人員熟悉實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程，能正