ICS6502030

B42..

備案號(hào)49128—2016

:

上海市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB31/T954—2015

犬瘟熱病毒和犬細(xì)小病毒熒光PCR

檢測(cè)方法

MethodofthePCRforthedetectionofcaninedistempervirusand

canineparvovirus

2015-12-11發(fā)布2016-03-01實(shí)施

上海市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB31/T954—2015

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由上海市畜牧獸醫(yī)辦公室提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由上海市畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人劉佩紅周錦萍鞠厚斌王建劉健葛菲菲楊德全李凱航楊顯超鄧波

:、、、、、、、、、。

Ⅰ

DB31/T954—2015

犬瘟熱病毒和犬細(xì)小病毒熒光PCR

檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了犬瘟熱病毒和犬細(xì)小病毒熒光的檢測(cè)方法

PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于犬瘟熱病毒和犬細(xì)小病毒核酸的檢測(cè)

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

基因檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求

SN/T1193

3縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件

。

犬瘟熱病毒

CDV:(CanineDistemperVirus)

犬細(xì)小病毒

CPV:(CanineParvovirus)

值熒光信號(hào)量達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

Ct:(CycleThresholdValue)

4原理

根據(jù)犬瘟熱病毒犬細(xì)小病毒各特定序列的保守片段分別合成一對(duì)特異性引物和一條特異性探

、,

針熒光探針的端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)端標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán)端淬滅基團(tuán)在近

。5’FAM,3’TAMRA,3’

距離內(nèi)能吸收端報(bào)告熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)但在擴(kuò)增時(shí)由于Taq酶的的外切活性

5’。,5’→3’,

在延伸到熒光探針時(shí)將其切斷兩基團(tuán)分離淬滅作用消失熒光信號(hào)產(chǎn)生因此可通過檢測(cè)熒光信

,,,,。,

號(hào)對(duì)核酸模板進(jìn)行檢測(cè)

。

5設(shè)備與試劑

51儀器

.

511實(shí)時(shí)熒光儀

..PCR。

512儀

..PCR。

513臺(tái)式冷凍離心機(jī)離心力g以上

..(12000)。

514水浴鍋

..。

515冰箱和兩種

..(2℃~8℃-20℃)。

516可調(diào)移液器