【高中生物】考綱規(guī)定的17個(gè)實(shí)驗(yàn)（其六）二鑒定物質(zhì)成分的生化實(shí)驗(yàn)6、生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定原理：還原糖+斐林試劑磚紅色沉淀

脂肪+蘇丹III橘黃色脂肪+蘇丹III橘黃色蘇丹IV紅色蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑紫色反應(yīng)還原糖的檢測(cè)（1）材料的選?。哼€原糖含量高，白色或近于白色，如蘋果，梨，白蘿卜。（2）試劑：斐林試劑（甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液），現(xiàn)配現(xiàn)用。（3）步驟：取樣液2mL于試管中→加入剛配的斐林試劑1mL（斐林試劑甲液和乙液等量混合均勻后再加入）→水浴加熱2min左右→觀察顏色變化（白色→淺藍(lán)色→磚紅色）模擬尿糖的檢測(cè)

1、取樣：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液2、檢測(cè)方法：斐林試劑（水浴加熱）或班氏試劑或尿糖試紙3、結(jié)果：（用斐林試劑檢測(cè)）試管內(nèi)發(fā)生出現(xiàn)磚紅色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出現(xiàn)磚紅色沉淀的是正常人的尿液。4、分析：因?yàn)樘悄虿』颊叩哪蛞褐泻羞€原糖，與斐林試劑發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生磚紅色沉淀，而正常人尿液中無還原糖，所以沒有發(fā)生反應(yīng)。脂肪的檢測(cè)（1）材料的選?。汉玖吭礁叩慕M織越好，如花生的子葉。（2）步驟：制作切片（切片越薄越好）將最薄的花生切片放在載玻片中央

染色（滴蘇丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴體積分?jǐn)?shù)50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精）制作裝片（滴1～2滴清水于材料切片上→蓋上蓋玻片）鏡檢鑒定（顯微鏡對(duì)光→低倍鏡觀察→高倍鏡觀察染成橘黃色的脂肪顆粒）蛋白質(zhì)的檢測(cè)（1）試劑：雙縮脲試劑（A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液）（2）步驟：試管中加樣液2mL→加雙縮脲試劑A液1mL，搖勻→加雙縮尿試劑B液4滴，搖勻→觀察顏色變化（紫色）疑難點(diǎn)拔：本實(shí)驗(yàn)為驗(yàn)證類實(shí)驗(yàn)。①葡萄糖、果糖和麥芽糖的分子內(nèi)含醛基，醛基具有還原性，可與弱氧化劑反應(yīng)。與醛基有特定顏色反應(yīng)的化學(xué)試劑可用來鑒定這三種糖的存在：a、利用斐林試劑；b、利用班氏試劑：由A液（CuSO4溶液）和B液（檸檬酸鈉和碳酸溶液）配制而成；c利用銀氨溶液；結(jié)果出現(xiàn)銀鏡。②脂肪的鑒定可用蘇丹III、蘇丹IV。③蛋白質(zhì)的鑒定可用雙縮脲試劑、濃硝酸試劑（結(jié)果形成黃色沉淀）④斐林試劑與雙縮脲試劑都由NaOH和CuSO4組成，但二者有以下不同：a、溶液濃度不同；b、使用原理不同（斐林試劑是新配制的CU/OH2溶液；雙縮脲試劑是堿性環(huán)境下的Cu2+）c、使用方法不同?？键c(diǎn)提示：

（1）常見還原性糖與非還原性糖有哪些？（2）還原性糖植物組織取材條件？（3）研磨中為何要加石英砂？不加石英砂對(duì)實(shí)驗(yàn)有何影響？（4）斐林試劑甲、乙兩液的使用方法？混合的目的？為何要現(xiàn)混現(xiàn)用？（5）還原性糖中加入斐林試劑后，溶液顏色變化的順序?yàn)椋海?）花生種子切片為何要??？（7）轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋時(shí)，若花生切片的細(xì)胞總有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？（8）脂肪鑒定中乙醇作用？（9）雙縮脲試劑A、B兩液是否混合后用？（1）葡萄糖、果糖、麥芽糖都是還原性糖；淀粉、蔗糖、纖維素都是非還原性糖。（2）含糖量較高、顏色為白色或近于白色，如：蘋果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜等。（3）加石英砂是為了使研磨更充分。不加石英砂會(huì)使組織樣液中還原性糖減少，使鑒定時(shí)溶液顏色變化不明顯。（4）混合后使用；產(chǎn)生氫氧化銅；氫氧化銅不穩(wěn)定。（5）淺藍(lán)色棕色磚紅色（6）只有很薄的切片，才能透光，而用于顯微鏡的觀察。（7）切片的厚薄不均勻。（8）洗去浮色。（9）不能混合；先加A液的目的是使溶液呈堿性；先留出一些大豆組織樣液做對(duì)比。7、DNA的粗提取與鑒定考點(diǎn)提示：

疑難點(diǎn)拔：①制備雞血細(xì)胞液時(shí)離心后除去上清液。②實(shí)驗(yàn)過程中兩次加入蒸餾水的作用不同。第一次的目的是為了使外界溶液濃度大于血細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞液的濃度，細(xì)胞大量吸水脹破得到DNA；第二次的目的是降低Nacl溶液濃度到DNA溶解度最低點(diǎn)，這樣DNA分子可以從Nacl溶液中析出。（1）雞血能用豬血代替嗎？為什么？（2）雞血中為何要加檸檬酸鈉？為何要棄去雞血細(xì)胞的上清液？

（3）脹破細(xì)胞的方法？能用生理鹽水嗎？

（4）該實(shí)驗(yàn)中最好應(yīng)用玻璃燒杯還是塑料燒杯？為什么？（5）前后三次過濾時(shí)，所用紗布的層數(shù)分別是多少？為什么？（6）若實(shí)驗(yàn)中所得黏稠物太少，其原因是什么？（7）兩次加入蒸餾水的目的分別是什么？（8）實(shí)驗(yàn)中攪拌溶液時(shí)，為何總要沿一個(gè)方向攪拌？（9）兩次析出DNA的方法分別是什么？原理分別是什么？（10）三次溶解DNA的液體分別是什么？原理分別是什么？（11）鑒定DNA時(shí)為何要用兩支試管？其現(xiàn)象分別是什么？（1）不能，因?yàn)椴溉閯?dòng)物的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核，不能提取DNA.（2）防止血液凝固；因?yàn)樯锨逡菏茄獫{，不含細(xì)胞和DNA.（3）向血細(xì)胞中加入蒸餾水，使細(xì)胞大量吸水而脹破；不能用生理鹽水，因?yàn)檠?xì)胞在蒸餾水中不能吸收水分。（4）最好用塑料燒杯，因?yàn)椴Ａ菀孜紻NA.（5）第一次用一層紗布，有利于核物質(zhì)透過紗布進(jìn)入濾液；第二次用多層紗布，能防止DNA絲狀物透過紗布進(jìn)入濾液；第三次用兩層紗布，既有利于DNA透過紗布，又能防止其它雜質(zhì)透過紗布。（6）第一次加蒸餾水過少，細(xì)胞未充分脹破；第二次加蒸餾水過多或過少；第一次過濾用了多層紗布；第二次過濾用了一層紗布。（7）第一次是為了使血細(xì)胞吸水脹破；第二次是為了降低氯化鈉的濃度，有利于DNA有析出。（8）防止DNA分子受到損傷。（9）第一次是加蒸餾水，降低氯化鈉的濃度，促使DNA析出；第二次是加入冷酒精，因?yàn)镈NA不溶于酒精溶液。（10）第一次、第二次都是用濃度為2mol/L的氯化鈉溶液，第三次用的是0.015mol/L（或2mol/L）的氯化鈉溶液。其原理是DNA在氯化鈉中的溶解度，是隨著氯化鈉的濃度的變化而改變的。當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為0.14mol/L時(shí)，DNA的溶解度最低。2mol/L的氯化鈉溶液和0.015mol/L的氯化鈉溶液對(duì)DNA的溶解度都比較高。（11）其中不加DNA的試管起對(duì)照作用。該試管溶液不變色，另一支加有DNA的試管溶液變藍(lán)色。三物質(zhì)性質(zhì)的探索實(shí)驗(yàn)8、酶的高效性注意問題：①實(shí)驗(yàn)時(shí)必須用新鮮的、剛從活的動(dòng)物體中取出的肝臟作實(shí)驗(yàn)材料。肝臟如果不新鮮，肝細(xì)胞內(nèi)的過氧化氫酶等有機(jī)物就會(huì)在腐生細(xì)菌的作用下分解，使組織中酶分子的數(shù)量減少且活性降低。②實(shí)驗(yàn)中使用肝臟的研磨液，可以加大肝細(xì)胞內(nèi)過氧化氫酶與試管中過氧化氫的接觸面積，從而加速過氧化氫的分解。考點(diǎn)提示：

（1）為何要選新鮮的肝臟？（2）該實(shí)驗(yàn)中所用試管應(yīng)選較粗的還是較細(xì)的？為什么？（3）為何要選動(dòng)物的肝臟組織來做實(shí)驗(yàn)，其他動(dòng)植物的組織的研磨液能替代嗎？（4）相同質(zhì)量的塊狀肝臟和肝臟研磨液，哪一個(gè)催化效果好？為什么？（5）滴入肝臟研磨液和氯化鐵溶液時(shí)，可否共用下個(gè)吸管？為什么？（1）因?yàn)樵诓恍迈r的肝臟中，過氧化氫酶的活性會(huì)由于細(xì)菌的破壞而降低。（2）應(yīng)選用較粗的，因?yàn)樵谳^細(xì)的試管中容易形成大量的氣泡，而影響衛(wèi)生香的復(fù)燃。（3）因?yàn)楦闻K組織中過氧化氫酶含量較豐富；其它動(dòng)植物組織也含有少量的過氧化氫酶，所以能夠替代。（4）研磨液效果好；因?yàn)樗黾舆^氧化氫酶與過氧化氫的接觸面積。（5）不可共用，防止過氧化氫酶與氯化鐵混合，而影響實(shí)驗(yàn)效果。9、酶的專一性（1）方案一：用同一種酶催化兩種不同物質(zhì)

淀粉（非還原糖）

麥芽糖（還原糖）

①蔗糖（非還原糖）

蔗糖用淀粉酶分別作用于淀粉和蔗糖后，再用斐林試劑鑒定，根據(jù)是否有磚紅色沉淀生成來判斷淀粉酶對(duì)二者是否有催化作用，從而探索酶的專一性。（2）方案二：用兩種不同酶催化同一種物質(zhì)

淀粉（非還原糖）

麥芽糖（還原糖）

①淀粉（非還原糖）

淀粉②再用斐林試劑鑒定，從而探究酶的專一性。疑難點(diǎn)拔：這三個(gè)實(shí)驗(yàn)為探索類實(shí)驗(yàn)。①探索酶的高效性時(shí)，應(yīng)合理設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)變量。②探索酶的專一性時(shí)，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)首先要從已知入手，確定何為實(shí)驗(yàn)變量（自變量），何為因變量，何為控制變量。淀粉、蒸糖水解的產(chǎn)物，水解的速率等為變化的結(jié)果，即因變量，從因變量入手我們將推知自變量（實(shí)驗(yàn)變量）即淀粉酶對(duì)其的影響程度或它們之間的關(guān)系。淀粉、蔗糖在實(shí)驗(yàn)過程中的濃度、用量，淀粉酶的濃度、用量。水解過程的溫度等都為控制變量，需遵循同時(shí)等量原則，以排除控制變量對(duì)2個(gè)水解反應(yīng)的影響。③探索溫度對(duì)酶活性的影響時(shí)，通過研究某一因素，如溫度（實(shí)驗(yàn)變量）對(duì)某一特定反應(yīng)的影響時(shí)，要在其他因素（控制變量）相同的條件下進(jìn)行。觀察不同的實(shí)驗(yàn)變量（如不同的溫度）對(duì)特定反應(yīng)的影響結(jié)果（因變量），以便對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（實(shí)驗(yàn)變量與因變量關(guān)系）進(jìn)行科學(xué)的分析。10、溫度對(duì)酶活性的影響原理

：淀粉遇碘變藍(lán)，淀粉酶可水解淀粉水解成麥芽糖和葡萄糖，麥芽糖和葡萄糖遇碘不變藍(lán)。材料：2%的新鮮淀粉酶溶液，3%的可溶性淀粉溶液，熱水，冰塊，碘液步驟：疑難點(diǎn)拔：這三個(gè)實(shí)驗(yàn)為探索類實(shí)驗(yàn)。①探索酶的高效性時(shí)，應(yīng)合理設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)變量。②探索酶的專一性時(shí)，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)首先要從已知入手，確定何為實(shí)驗(yàn)變量（自變量），何為因變量，何為控制變量。淀粉、蒸糖水解的產(chǎn)物，水解的速率等為變化的結(jié)果，即因變量，從因變量入手我們將推知自變量（實(shí)驗(yàn)變量）即淀粉酶對(duì)其的影響程度或它們之間的關(guān)系。淀粉、蔗糖在實(shí)驗(yàn)過程中的濃度、用量，淀粉酶的濃度、用量。水解過程的溫度等都為控制變量，需遵循同時(shí)等量原則，以排除控制變量對(duì)2個(gè)水解反應(yīng)的影響。③探索溫度對(duì)酶活性的影響時(shí)，通過研究某一因素，如溫度（實(shí)驗(yàn)變量）對(duì)某一特定反應(yīng)的影響時(shí)，要在其他因素（控制變量）相同的條件下進(jìn)行。觀察不同的實(shí)驗(yàn)變量（如不同的溫度）對(duì)特定反應(yīng)的影響結(jié)果（因變量），以便對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（實(shí)驗(yàn)變量與因變量關(guān)系）進(jìn)行科學(xué)的分析。11、葉綠體中色素的提取和分離原理：葉綠體中的色素能溶解于丙酮中，可以用丙酮提取葉綠體中的色素。色素在石油醚中的溶解度不同，隨石油醚在濾紙上擴(kuò)散的速度不同，從而分離四種色素。步驟：1）提取色素研磨（2）制備濾紙條（3）畫濾液細(xì)線：均勻，直，細(xì)，重復(fù)若干次（4）分離色素：不能讓濾液細(xì)線觸及層析液（5）觀察和記錄：結(jié)果濾紙條上從上到下依次為：橙黃色（胡蘿卜素）、黃色（葉黃素）、藍(lán)綠色（葉綠素a）、黃綠色（葉綠素b）。疑難點(diǎn)拔：四條色素帶的分布與色素?cái)U(kuò)散速度有關(guān)，而擴(kuò)散速度大小由分子量大小所決定，這四種色素的分子量分別是：胡蘿卜素（C40H56）536、葉黃素（C40H56O2）568、葉綠素a（C55H72O5N4Mg）892、葉綠素b（C55H70O6N4Mg）906，所以色素帶從上到下，即擴(kuò)散從快到慢依次為胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b。胡蘿卜素與葉黃素分子量相差32，葉綠素a與葉綠素b的分子量相差14，故前二種色素的距離大于后二種色素的距離。色素帶的粗細(xì)與色素的含量有關(guān)。通常葉綠素含量是類胡蘿卜素的四倍，葉綠素a的含量是葉綠素b的三倍，葉黃素含量是胡蘿卜素的二倍，含量越多，色素帶就會(huì)越濃越粗，故由濃粗到淡細(xì)依次是：葉綠素a>葉綠素b>葉黃素>胡蘿卜素?？键c(diǎn)提示：

（1）對(duì)葉片的要求？為何要去掉葉柄和粗的時(shí)脈？（2）二氧化硅的作用？不加二氧化硅對(duì)實(shí)驗(yàn)有何影響？（3）丙酮的作用？它可用什么來替代？用水能替代嗎？（4）碳酸鈣的作用？不加碳酸鈣對(duì)實(shí)驗(yàn)有何影響？（5）研磨為何要迅速？要充分？過濾時(shí)為何用布不用濾紙？（6）濾紙條為何要剪去兩角？（7）為何不能用鋼筆或圓珠筆畫線？（9）濾液細(xì)線為何不能觸到層析液？（10）濾紙條上色素為何會(huì)分離？

（11）色素帶最寬的是什么色素？（12）濾紙條上相互間距最大的是哪兩種色素？（13）色素帶最窄的是第幾條色素帶？為何？（1）綠色、最好是深綠色。因?yàn)槿~柄和葉脈中所含色素很少。（2）為了使研磨充分。不加二氧化硅，會(huì)使濾液和色素帶的顏色變淺。（3）溶解色素。它可用酒精等有機(jī)溶劑來代替，但不能用水來代替，因?yàn)樯夭蝗苡谒＃?）保護(hù)色素，防止在研磨時(shí)葉綠體中的色素受到破壞。不加碳酸鈣，濾液會(huì)變成黃綠色或褐色。（5）研磨