血液和尿液中秋水仙堿的液相色譜-質(zhì)譜定性定量檢驗方法22)內(nèi)標(biāo)工作溶液：1μg/mL的內(nèi)標(biāo)工作溶液由符合5.1i)1)的內(nèi)標(biāo)儲備溶液用甲醇稀釋得到。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期3個月。5.2儀器和設(shè)備儀器和設(shè)備及要求如下。a)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。b)電子天平：分度值≤0.1ng。d)恒溫水浴鍋。e)渦旋混合器。f)移液器。6定性分析6.1樣品前處理6.1.1檢材樣品取血液(或尿液)0.5mL,加內(nèi)標(biāo)工作溶液10μL,加硼砂溶液0.5mL,渦旋混勻，再加入乙酸乙酯3mL,渦旋混勻，2500r/min離心3min,取有機(jī)層于50℃水浴中吹干，殘留物用甲醇：含0.1%甲酸的20mmol/L乙酸銨緩沖溶液(體積比8:2)200山復(fù)溶，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析。6.1.2空白樣品取空白血液(或尿液)0.5L作為空白樣品，按6.1.1的方法，與檢材樣品平行操作。6.1.3添加樣品取空自血液(或尿液)0.5mL,添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液，配制成0.2ng/mL的添加樣品，然后按6.1.1的方法，與檢材樣品平行操作。6.2儀器檢測6.2.1儀器條件6.2.1.1液相色譜條件以下為參考條件，可根據(jù)不同品牌儀器等實際情況進(jìn)行調(diào)整。a)色譜柱：C18柱(150m×2.1mm,5μm)或其他等效柱。b)流動相：流動相A為含0.1%甲酸的20mmol/L乙酸銨緩沖溶液，流動相B為甲醇：采用等度洗脫方法，流動相A:流動相B=20:80.c)流速：0.2mL/min。d)柱溫：室溫。6.2.1.2質(zhì)譜條件6.2.1.2.1以下為參考條件，可根據(jù)不同品牌儀器等實際情況進(jìn)行調(diào)整。a)離子源：電噴霧電離-正離子模式(ESI+)。b)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)。c)離子源電壓：5500V。d)碰撞氣、氣簾氣、霧化氣和輔助氣均為高純氮氣，使用前調(diào)節(jié)各氣流流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求。e)去簇電壓和碰撞能量應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度。6.2.1.2.2在符合6.2.1.1和6.2.1.2的液相色譜條件和質(zhì)譜條件下，目標(biāo)物和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜參數(shù)和保留時間參見表1。3表1目標(biāo)物和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜參數(shù)和保留時間目標(biāo)物V丁丙諾啡(內(nèi)標(biāo)物)分別吸取空白樣品提取液、檢材樣品提取液和添加樣品提取液，按6.2.1的條件進(jìn)樣分析。記錄空白樣品、檢材樣品和添加樣品中目標(biāo)物可疑色譜峰的保留時間、質(zhì)譜特征離子對以保留時間、質(zhì)譜特征離子對峰和離子對豐度比作為定性判斷依據(jù)。若檢材樣品中出現(xiàn)目標(biāo)物的兩對定性離子對的色譜峰，保留時間與添加樣品中相應(yīng)目標(biāo)物的色譜峰保留時間比較，相對誤差在±2.5%內(nèi)，且定性離子對豐度比與添加樣品的離子對超過表2規(guī)定的范圍，則可判斷檢材樣品中檢出該種目標(biāo)物。取檢材樣品血液(或尿液)0.5L兩份，按6.1.1的方法操作。另取空白血液(或尿液)樣品若干份，添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液適量，制得系列質(zhì)量濃度或單點質(zhì)量檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度應(yīng)在工作曲線的線性范圍內(nèi)。配制單點質(zhì)量濃度的添加樣樣品中目標(biāo)物質(zhì)量濃度應(yīng)在添加樣品目標(biāo)物質(zhì)量濃度的(100±50)%范圍內(nèi)。記錄檢材樣品、系列質(zhì)量濃度的添加樣品或單點質(zhì)量濃度的添加樣品中目標(biāo)物及內(nèi)標(biāo)物定量離子對的峰面積值，然后計算檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度。4在系列質(zhì)量濃度的添加樣品中，以目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物定量離子對的峰面積比值(D為縱坐標(biāo)、目標(biāo)根據(jù)檢材樣品中目標(biāo)物及內(nèi)標(biāo)物定量離子對的峰面積比值。按式(1)計算檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)C——檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度。單位為納克每毫升(K—檢材樣品中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物定量離子對的峰面積比值：a——線性方程的截距：b——線性方程的斜率。根據(jù)檢材樣品和添加樣品中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物定量離子對的峰面積比值，按式(2)計算檢材樣品中C—檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);A——檢材樣品中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值；A'——添加樣品中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值；c——添加樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL)。檢材樣品平行測定兩份，相對相差按式(3)計算。G、C—兩份檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);c兩份檢材樣品中目標(biāo)物質(zhì)量濃度的平均值(C+C?)/2,單位為8.1.1陰性結(jié)果評價a)若檢材樣品中僅檢出內(nèi)標(biāo)物，未檢出目標(biāo)物，且添加樣品中檢出目標(biāo)物，則陰性結(jié)果可靠；b)若檢材樣品中未檢出內(nèi)標(biāo)物，或添加樣品中未檢出目標(biāo)物，則陰性結(jié)果不